中國養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《大蠟螟生物防治技術(shù)規(guī)程》編制說明（征求意見稿）起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所江西省養(yǎng)蜂研究所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所山西農(nóng)業(yè)大學(xué)中國養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)蜜蜂保護(hù)專業(yè)委員會(huì)一、工作簡況（包括任務(wù)來源、制定背景、起草過程等） 一、工作簡況（包括任務(wù)來源、制定背景、起草過程等）1.1任務(wù)來源2024年1月，中國養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)發(fā)布了《關(guān)于征集中國養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目》的通知，根據(jù)通知要求任務(wù)要求，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所計(jì)劃申報(bào)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，項(xiàng)目名稱為《大蠟螟生物防治技術(shù)規(guī)程》。項(xiàng)目承擔(dān)單位為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所、江西省養(yǎng)蜂研究所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所、貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所、山西農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國養(yǎng)蜂學(xué)會(huì)蜜蜂保護(hù)專業(yè)委員會(huì)。項(xiàng)目主持人為代平禮。1.2制定背景中華蜜蜂Apisceranacerana是我國特有的蜂種，具有抗螨能力強(qiáng)、氣候適應(yīng)能力強(qiáng)以及零星蜜粉源利用率高等優(yōu)點(diǎn)，是維護(hù)自然生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定和多樣性中不可缺少的重要資源，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)全國蜂群飼養(yǎng)量超過了500萬群。相比于西方蜜蜂Apismellifera，中華蜜蜂群勢小、清巢能力弱，使其極易被大蠟螟Galleriamellonella侵襲。大蠟螟主要以幼蟲取食蜜蜂巢脾，據(jù)調(diào)查結(jié)果顯示在北京、山西、陜西、甘肅、寧夏、湖北、湖南、江西、四川和貴州等地的中華蜜蜂蜂群或倉庫中均有大蠟螟發(fā)生，若不采取防治措施可造成蜂群和儲(chǔ)存巢脾約30%的損失，多數(shù)蜂場通過蜂箱支架、清理箱內(nèi)蠟屑等飼養(yǎng)管理措施預(yù)防或使用三無產(chǎn)品“巢蟲清”防治大蠟螟。采用“巢蟲清”等化學(xué)藥物防治存在污染蜂產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)，亟需突破高效、簡便、綠色的大蠟螟防控技術(shù)瓶頸。采用生物手段防控大蠟螟是一種更安全和有效的方法，其中蘇云金芽胞桿菌（Bacillusthuringiensis,Bt）是最可行的生物手段。Bt殺蟲蛋白對蜜蜂是安全的，許多研究在室內(nèi)或田間環(huán)境下評估了Bt殺蟲晶體蛋白毒素或一些Bt制劑對蜜蜂幼蟲或成蟲的影響，但并沒有發(fā)現(xiàn)任何顯著的不良影響。已有研究報(bào)道，直接將Bt噴施于巢脾或壓入巢礎(chǔ)可防治大蠟螟。但是，直接將Bt噴施于巢脾或壓入巢礎(chǔ)防治大蠟螟會(huì)造成芽胞殘留，影響蜂產(chǎn)品質(zhì)量。因此，尚未有針對大蠟螟防治的高毒力Bt制劑或成熟施用技術(shù)，亟需突破Bt防治大蠟螟的技術(shù)瓶頸。目前國內(nèi)還沒有采用Bt生物防治大蠟螟的方法標(biāo)準(zhǔn)，研究和應(yīng)用Bt防治大蠟螟的技術(shù)對實(shí)現(xiàn)大蠟螟的綠色、高效治理和保護(hù)我國中華蜜蜂健康具有重要意義。1.3起草過程項(xiàng)目組接到標(biāo)準(zhǔn)制定任務(wù)后，系統(tǒng)查閱并收集利用生物手段防治大蠟螟的文獻(xiàn)、方法及相關(guān)資料。制定實(shí)施方案，明確對大蠟螟幼蟲具有高殺蟲活性的蘇云金芽胞桿菌，并根據(jù)大蠟螟幼蟲的覓食習(xí)性，構(gòu)建了由Bt菌株、誘餌和誘殺盒組成的大蠟螟生物防治誘殺技術(shù)，驗(yàn)證其防治效果。圖1標(biāo)準(zhǔn)編制的技術(shù)路線主要起草過程：1.2024年1月，成立標(biāo)準(zhǔn)編制小組。組織標(biāo)準(zhǔn)編制單位中從事標(biāo)準(zhǔn)制修訂、蜜蜂病蟲害防控等具有豐富技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員組成標(biāo)準(zhǔn)編制小組。2.2024年2月，召開項(xiàng)目啟動(dòng)會(huì)議，確定了該標(biāo)準(zhǔn)制定的技術(shù)路線、技術(shù)內(nèi)容、分工以及時(shí)限等要求。3.2024年2月-3月，查閱文獻(xiàn)以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)等資料，創(chuàng)制基于Bt的新型大蠟螟生物防治技術(shù)。4.2024年3月-9月，開展由Bt、誘餌和誘殺盒組成的大蠟螟生物防治誘殺技術(shù)的防治效果測定。5.2024年10月-11月，形成定向征求意見稿補(bǔ)充定向征求意見的具體內(nèi)容及回復(fù)二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)2.1標(biāo)準(zhǔn)編制原則本標(biāo)準(zhǔn)編制在其適用范圍內(nèi)，按照“科學(xué)性、針對性、可操作性、協(xié)調(diào)性、適用性”等原則，嚴(yán)格遵守GB/T-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫。2.1.1科學(xué)性原則該標(biāo)準(zhǔn)借鑒國內(nèi)外害蟲生物防治技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用規(guī)程參數(shù)設(shè)定，充分考慮活蜂階段實(shí)現(xiàn)對大蠟螟高效綠色防控的要求，保證標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性和先進(jìn)性。2.1.2針對性原則該標(biāo)準(zhǔn)針對大蠟螟嚴(yán)重威脅蜂群健康亟需制定高效綠色防控技術(shù)的需求，對各個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)提出規(guī)范性的操作程序，針對性強(qiáng)。2.1.3可操作性原則該標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)技術(shù)措施實(shí)用、易行、可操作，確保蜂農(nóng)能正確理解和使用該標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。2.1.4協(xié)調(diào)性原則該標(biāo)準(zhǔn)始終貫徹綠色可持續(xù)發(fā)展的理念，強(qiáng)調(diào)在實(shí)施過程中維護(hù)生態(tài)平衡、多樣性管理和綜合防治手段的有效結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)蜜蜂病蟲害的綠色可持續(xù)防控，促進(jìn)蜂產(chǎn)業(yè)的協(xié)調(diào)健康發(fā)展。2.1.5適用性原則該標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)流程和內(nèi)容的確定充分考慮我國山區(qū)中華蜜蜂養(yǎng)殖的病蟲害防控現(xiàn)狀和高質(zhì)量發(fā)展需求，不但現(xiàn)時(shí)可用，而且具有靈活調(diào)整性。。2.2主要內(nèi)容及確定依據(jù)2.2.1主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大蠟螟生物防治技術(shù)規(guī)程的材料與試劑、操作流程、防治效果及注意事項(xiàng)，描述了制劑配制方法。2.2.2編制依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)的確立，主要依據(jù)《蘇云金芽胞桿菌原粉》GB/T19567.1-2004，篩選出了對大蠟螟幼蟲具有高毒力的蘇云金芽胞桿菌，遵循綠色高效原則提出了蘇云金芽胞桿菌+誘餌+誘殺盒的大蠟螟生物防治技術(shù)。三、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告，技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益3.1實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告3.1.1標(biāo)準(zhǔn)名稱本標(biāo)準(zhǔn)主要解決利用生物手段防治大蠟螟的技術(shù)問題，所以將本標(biāo)準(zhǔn)的名稱定為：《大蠟螟生物防治技術(shù)規(guī)程》。因此將本標(biāo)準(zhǔn)的全稱翻譯為“Technicalcodeofpracticeforgreaterwaxmothbiocontrol”。3.1.2前言明確了本標(biāo)準(zhǔn)的起草依據(jù)、歸口單位及主要起草單位、起草人。3.1.3主體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容包括：范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、材料與試劑、操作流程、防治效果及注意事項(xiàng)。3.1.4范圍的界定本文件確立了大蠟螟生物防治技術(shù)的操作流程，并給出了相應(yīng)的證實(shí)方法。本文件適用于蜂群中大蠟螟的高效綠色防控。3.1.5術(shù)語和定義大蠟螟greaterwaxmoth巢蟲、棉蟲隸屬鱗翅目（Lepidoptera）、螟蛾科（Pyralidae）、蠟螟屬（Galleri）最初在東方蜜蜂（ApisceranaFabricius）蜂群中被發(fā)現(xiàn)報(bào)道，其幼蟲喜食蜜蜂巢房，是養(yǎng)蜂業(yè)中普遍存在的一種害蟲，主要危害中華蜜蜂蜂群（ApisceranaceranaFabricius）以及蜂場儲(chǔ)藏的蜜蜂巢脾。蘇云金芽胞桿菌BacillusthuringiensisBt一種普遍存在于死亡昆蟲、土壤、水體和植被等多種基質(zhì)中革蘭氏陽性昆蟲病原菌，在生長穩(wěn)定后期會(huì)產(chǎn)生含有多種不同形態(tài)的殺蟲蛋白晶體，對鱗翅目（Lepidoptera）、雙翅目（Diptera）、鞘翅目（Coleoptera）等600多種昆蟲具有殺蟲活性。3.1.6試劑和材料3.1.6.1誘殺盒：15×3×1.3cm的塑料盒。3.1.6.2蘇云金芽胞桿菌原粉：BiotGm原粉（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供）3.1.6.3助劑：TritonX-100（北京艾克賽侖生物科技有限公司提供）。3.1.6.3誘餌：蜂箱底部蠟屑或儲(chǔ)有少量花粉和蜂蜜的舊巢脾（舊巢脾需切割成小碎塊）。3.2標(biāo)準(zhǔn)的方法研究內(nèi)容3.2.1毒力效價(jià)測定參考GB/T19567.1規(guī)定的毒力效價(jià)測定方法，采用自主建立的大蠟螟毒力測定和蘇云金芽胞桿菌（Bt）室內(nèi)殺蟲活性測定方法篩選出一種對大蠟螟高效（半數(shù)致死濃度LC50<2μg/g）和對蜜蜂安全（LC50>20,000μg/ml）的蘇云金芽胞桿菌原粉。3.2.2大蠟螟生物防治誘殺劑制備將配制好的蘇云金芽胞桿菌原粉溶液噴施于由蠟屑或舊巢脾碎屑制成的誘餌，噴施2遍~3遍（每次噴施前充分搖勻蘇云金芽胞桿菌溶液），拌勻；然后將噴施蘇云金芽胞桿菌溶液的誘餌放入誘殺盒內(nèi)，陰涼處隔夜放置，晾干多余水分后，蓋好蓋子；最后打開蜂箱從上方將組裝好的巢蟲誘殺盒放置于蜂箱底部，每群蜂放置一個(gè)（可根據(jù)大蠟螟危害情況增加誘殺盒數(shù)量），每兩個(gè)月按上述操作更換一次噴施蘇云金芽胞桿菌溶液的誘餌。3.2.4防治效果3.2.4.1大蠟螟危害程度劃分根據(jù)大蠟螟對巢脾或子脾的損傷情況劃定危害程度。無危害：所有巢脾上均未發(fā)現(xiàn)大蠟螟幼蟲，且未發(fā)現(xiàn)由大蠟螟幼蟲危害導(dǎo)致的白頭蛹癥狀，記為1（圖2a）；輕度：封蓋子脾出現(xiàn)大量連片的白頭蛹癥狀，但未見大蠟螟取食巢脾和蜂產(chǎn)品的跡象，記為2（圖2b）；中度：明顯發(fā)現(xiàn)巢脾上有大蠟螟幼蟲及其取食產(chǎn)生的絲網(wǎng)，記為3（圖2c）；重度：巢脾遭受嚴(yán)重的大蠟螟取食危害導(dǎo)致整個(gè)蜂群飛逃，記為4（圖2d）。大蠟螟危害指數(shù)的計(jì)算公式為：A（%）=[∑（B×C）∕（D×E）]×100。A：大蠟螟危害指數(shù)；B：各危害等級的巢脾數(shù)量；C：相應(yīng)危害等級的代表值；D：試驗(yàn)蜂群的巢脾總數(shù)；E：最高危害等級的代表值。圖2大蠟螟對蜂群的不同危害程度劃分3.2.4.2檢查時(shí)間根據(jù)大蠟螟危害程度劃分方法在使用生物誘殺劑防治后7d~10d檢查。3.2.4.3檢查方法查看誘殺盒內(nèi)是否有大蠟螟幼蟲尸體、封蓋子脾上是否有連片的白頭蛹癥狀、邊脾上是否有大蠟螟幼蟲取食產(chǎn)生的絲網(wǎng)以及巢脾是否遭受嚴(yán)重的大蠟螟取食危害。3.2.4.4防治效果計(jì)算按大蠟螟危害程度劃分方檢查未施用生物防治誘殺劑蜂群和施用生物防治誘殺劑蜂群的大蠟螟危害指數(shù)后計(jì)算大蠟螟生物防治技術(shù)的防效。大蠟螟生物防治技術(shù)的防效計(jì)算公式為：F（%）=[（G–H）/I]×100。F：大蠟螟生物防治誘殺劑防效；G：對照組蜂群的大蠟螟危害指數(shù)；H：施用生物防治誘殺劑蜂群的大蠟螟危害指數(shù)；I：對照組蜂群的大蠟螟危害指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在江西、北京、山西三地蜂群對照試驗(yàn)中，生物防治誘殺劑（誘餌+Bt）對大蠟螟的防效分別為93%、100%和100%（圖3a）。與對照組和誘餌對照組相比，使用了生物防治誘殺劑的蜂群群勢均有顯著的正增長（圖3b）。此外，在我國中華蜜蜂主要飼養(yǎng)區(qū)14個(gè)合作社4000多群蜂群中試用反饋結(jié)果表明，該技術(shù)也可有效保護(hù)蜂群免受大蠟螟的危害。圖3大蠟螟生物防治誘殺劑的實(shí)際蜂群防治效果。a不同處理組蜂群中不同大蠟螟危害程度的巢脾占比；b不同處理組蜂群試驗(yàn)前后的群勢變化。3.2.5注意事項(xiàng)蘇云金芽胞桿菌溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用，當(dāng)天用完，過期無效；在蜂群生產(chǎn)期切勿直接將本溶液噴施于含有蜂蜜或花粉的巢脾；不可用熱水稀釋原粉；本溶液不能與其他藥物混合使用；如不慎濺入眼睛，應(yīng)及時(shí)用大量清水沖洗。放入誘殺盒的誘餌必須晾干表面的水分后才能將其放入蜂箱底部。3.2.6記錄蜂群施用大蠟螟生物防治誘殺劑后，按照3.2.4描述的檢查流程對大蠟螟生物防治誘殺劑的防治效果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)記錄，填寫大蠟螟危害記錄表和大蠟螟生物防治記錄表。3.3預(yù)期效益分析3.3.1經(jīng)濟(jì)效益通過本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施，對大蠟螟生物防治技術(shù)進(jìn)行規(guī)范、簡化，可加快該技術(shù)的推廣應(yīng)用示范進(jìn)程，減少由大蠟螟侵襲危害造成的蜂業(yè)經(jīng)濟(jì)損失，充分結(jié)果顯示該技術(shù)的田間防效超過了93%可有效保護(hù)蜂群免受大蠟螟的危害，可降低蜂群損失30%。3.3.2社會(huì)效益本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制定有助于改善蜜蜂養(yǎng)殖用藥不合理現(xiàn)像，通過規(guī)范和優(yōu)化藥物使用，降低對蜜蜂的毒害，提升蜜蜂健康和蜂產(chǎn)品質(zhì)量，對蜜蜂病蟲害防治科學(xué)研究和蜜蜂養(yǎng)殖增產(chǎn)增效具有重要意義。3.3.3生態(tài)效益蜜蜂是重要的資源昆蟲、授粉昆蟲對于維持生物多樣性發(fā)揮重要作用。相比于西方蜜蜂中華蜜蜂嗅覺靈敏、抗螨、善于采集零星蜜源、適應(yīng)性強(qiáng)，是我國的優(yōu)勢本土蜂種資源，養(yǎng)殖規(guī)模正逐年攀升，作為不可或缺的重要傳粉者其作用將進(jìn)步得到發(fā)揮。本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制定將實(shí)現(xiàn)對中華蜜蜂重要害蟲大蠟螟的高效綠色防控，有助于對我國中蜂種質(zhì)資源的保護(hù)與利用，對減少化學(xué)農(nóng)藥濫用、保護(hù)生物多樣性、維持生態(tài)平衡具有重要意義。四、與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對比情況，或者與測試的國外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對比情況迄今為止，國內(nèi)外還未制定《大蠟螟生物防治技術(shù)規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)，因此，該標(biāo)準(zhǔn)具有國際領(lǐng)先性。五、以國際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況，以及是否合規(guī)引用或者采用國際國外標(biāo)準(zhǔn)，并說明未采用國際標(biāo)準(zhǔn)的原因目前利用生物手段防治大蠟螟無國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)可參照。本標(biāo)準(zhǔn)在制定過程中對利用Bt防治大蠟螟的研究進(jìn)展、實(shí)際應(yīng)用情況及市場進(jìn)行了充分的調(diào)查研究，并廣泛征求和采納了國內(nèi)相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜业囊庖姾徒ㄗh，所制定的標(biāo)準(zhǔn)適合我國國情，具有先進(jìn)性、科學(xué)性、實(shí)用性和可操作性。六、與有關(guān)法律、行政法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)所確定的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)和內(nèi)容符合我國現(xiàn)行的有關(guān)方針、政策，并與相關(guān)法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)吻合。本標(biāo)準(zhǔn)頒布實(shí)施后，填補(bǔ)行業(yè)缺乏大蠟螟生物防治技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)方法的空白，更有利于行業(yè)應(yīng)用；與現(xiàn)行的法律、法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)沒有矛盾。七、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)無重大分歧意見。八、涉及專利的有關(guān)說明本標(biāo)準(zhǔn)未明確涉及某一具體專利，但某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。九、實(shí)施團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的要求，以及組織措施、技術(shù)措施、過渡期和實(shí)施日期的建議等措施建議（1）首先應(yīng)在實(shí)施前保證文本的充足供應(yīng)，讓每個(gè)使用者都能及時(shí)得到文本；（2）為了貫徹好本標(biāo)準(zhǔn)，使其有效發(fā)揮作用，建議在標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后、實(shí)施前應(yīng)將信息在媒體上廣為宣傳，并在相關(guān)企業(yè)和檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行宣傳和貫徹，組織有關(guān)部門和人員進(jìn)行學(xué)習(xí)和培訓(xùn)。十、其他應(yīng)當(dāng)說明的事項(xiàng)無。參考文獻(xiàn)[1]Ellis,J.D.,Graham,J.R.,Mortensen,A.2013.Standardmethodsforwaxmothresearch.JournalofApiculturalResearch,52:1-17.DOI:org/10.3896/IBRA.1.52.1.10.[2]Kwadha,C.