miR-148a在膀胱癌組織中的表達特征、機制及臨床價值解析一、引言1.1研究背景與意義膀胱癌是泌尿系統中最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康。據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）發布的2020年全球癌癥負擔數據顯示，膀胱癌新發病例數在所有癌癥中位居第10位，死亡病例數排名第13位。在中國，膀胱癌同樣是常見的泌尿系統腫瘤，其發病率和死亡率呈上升趨勢。李輝章等人分析2015年中國膀胱癌發病與死亡情況，發現膀胱癌居中國惡性腫瘤發病譜第13位，粗發病率為5.80/10萬，中標發病率為3.60/10萬，世標發病率為3.57/10萬；粗死亡率為2.37/10萬，中標死亡率為1.31/10萬，世標死亡率為1.32/10萬。男性膀胱癌發病率明顯高于女性，約為女性的3.8倍，男性死亡率為女性的4.0倍。城市地區發病率高于農村，西部地區和中部地區發病率相近，均低于東部地區，死亡率的地區分布特征與發病率相似。此外，膀胱癌的年齡別發病率和死亡率分別在45歲和55歲組快速上升，在80-84歲組和85歲組達到高峰。目前，膀胱癌的診斷主要依靠膀胱鏡檢查、尿細胞學檢查和影像學檢查等方法。膀胱鏡檢查是診斷膀胱癌的金標準，但它屬于侵入性檢查，會給患者帶來一定痛苦，且存在漏診的可能；尿細胞學檢查雖然無創，但靈敏度較低，對于低級別膀胱癌的診斷效果不佳；影像學檢查如超聲、CT、MRI等能夠發現較大的腫瘤，但對于早期微小病變的檢測能力有限。在治療方面，膀胱癌的治療方法主要包括手術治療、化療、放療和免疫治療等。然而，這些治療方法都存在一定的局限性。手術治療對于晚期膀胱癌患者的效果不佳，且術后復發率較高；化療和放療在殺傷腫瘤細胞的同時，也會對正常細胞造成損傷，導致患者出現嚴重的不良反應；免疫治療雖然具有較好的療效，但并非所有患者都適用，且治療費用高昂。因此，尋找新的膀胱癌診斷標志物和治療靶點具有重要的臨床意義。微小RNA（miRNA）是一類長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，廣泛存在于真核生物中。它們通過與靶mRNA的3'非翻譯區（3'-UTR）互補配對，抑制mRNA的翻譯過程或促進其降解，從而在轉錄后水平調控基因表達。大量研究表明，miRNA在腫瘤的發生、發展、侵襲和轉移等過程中發揮著重要作用，被認為是潛在的腫瘤診斷標志物和治療靶點。miR-148a作為miRNA家族的重要成員，近年來在腫瘤研究領域受到廣泛關注。已有研究報道，miR-148a在多種腫瘤組織中表達異常，如在乳腺癌、肝癌、結直腸癌等腫瘤組織中表達下調，而在胃癌、肺癌等腫瘤組織中表達上調。這些研究表明，miR-148a可能通過調控不同的靶基因，參與腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲和轉移等生物學過程。在乳腺癌中，miR-148a通過靶向抑制E2F3基因的表達，抑制乳腺癌細胞的增殖和侵襲能力；在肝癌中，miR-148a通過調控PI3K/AKT信號通路，抑制肝癌細胞的生長和轉移。然而，關于miR-148a在膀胱癌中的表達情況及其作用機制，目前仍存在爭議。部分研究表明，miR-148a在膀胱癌組織中表達下調，且其表達水平與膀胱癌的病理分級、臨床分期和淋巴結轉移等臨床病理參數密切相關。謝小娟等人收集35例膀胱癌組織和16例非癌組織，采用熒光定量PCR方法檢測miR-148a的相對表達量，發現miR-148a在膀胱癌中的相對表達量（0.0008±0.0002）明顯低于非癌組織（0.0021±0.0005），差異具有統計學意義（t=2.46，P＜0.05）。然而，也有研究得出相反的結論，茅利明等人采集52例膀胱癌患者標本和24例正常對照組標本，用RT-PCR對產物進行反轉錄反應和擴增，分析miR-148a在膀胱癌組和正常對照組結果之間的差異，發現膀胱癌組標本中miR-148a的表達水平明顯高于正常對照組，差異有統計學意義（Z=-6.358，P＜0.05）。此外，對于miR-148a在膀胱癌發生發展過程中的作用機制，目前尚未完全明確。綜上所述，膀胱癌嚴重威脅人類健康，尋找新的診斷標志物和治療靶點迫在眉睫。miR-148a作為一種重要的miRNA，在多種腫瘤中發揮著關鍵作用，但其在膀胱癌中的表達情況和作用機制存在爭議。因此，深入研究miR-148a在膀胱癌組織中的異常表達及初步臨床意義，有助于揭示膀胱癌的發病機制，為膀胱癌的早期診斷和治療提供新的思路和靶點。1.2研究目的與主要內容本研究旨在深入探究miR-148a在膀胱癌組織中的異常表達情況，并對其初步臨床意義展開探討，為膀胱癌的早期診斷和治療提供新的理論依據和潛在靶點。具體研究內容如下：檢測miR-148a在膀胱癌組織及正常膀胱粘膜組織中的表達水平：收集膀胱癌患者的癌組織標本以及外傷性膀胱破裂患者的正常膀胱粘膜組織標本，運用實時熒光定量PCR技術，精準檢測miR-148a在兩組組織中的相對表達量，通過嚴謹的統計學分析，明確兩組間miR-148a表達是否存在顯著差異，從而確定miR-148a在膀胱癌組織中的表達是上調還是下調。分析miR-148a表達與膀胱癌患者臨床病理參數的相關性：全面收集膀胱癌患者的詳細臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結轉移情況等。運用統計學方法，深入分析miR-148a表達水平與這些臨床病理參數之間的關聯，判斷miR-148a表達是否可作為評估膀胱癌患者病情進展和預后的潛在指標。例如，若發現miR-148a表達與病理分級呈正相關，即隨著病理分級的升高，miR-148a表達水平也顯著升高，這將提示miR-148a在膀胱癌的惡性進展中可能發揮重要作用。評估miR-148a在膀胱癌診斷中的效能：采用受試者工作特征（ROC）曲線等方法，對miR-148a在膀胱癌診斷中的效能進行科學評估，計算其靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值等指標，明確miR-148a作為膀胱癌診斷標志物的潛在價值。若miR-148a在ROC曲線下面積較大，具有較高的靈敏度和特異度，那么它將有可能成為一種有效的膀胱癌早期診斷標志物，有助于提高膀胱癌的早期診斷率，為患者爭取更多的治療時機。初步探討miR-148a在膀胱癌發生發展過程中的作用機制：運用生物信息學分析方法，預測miR-148a的潛在靶基因，并對這些靶基因進行基因本體（GO）富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路分析，初步揭示miR-148a在膀胱癌發生發展過程中可能參與的生物學過程和信號通路。例如，若預測到miR-148a的靶基因參與細胞增殖、凋亡、侵襲和轉移等關鍵生物學過程，以及PI3K-AKT、MAPK等與腫瘤密切相關的信號通路，那么后續可進一步通過實驗驗證，深入研究miR-148a對這些靶基因的調控作用，從而明確其在膀胱癌發生發展中的具體作用機制，為膀胱癌的靶向治療提供理論基礎。二、膀胱癌概述2.1膀胱癌的發病機制膀胱癌的發病機制是一個多因素、多步驟的復雜過程，涉及遺傳因素、環境因素以及它們之間的相互作用。隨著研究的不斷深入，雖然取得了一定進展，但仍有許多未知之處。從遺傳因素來看，一些遺傳突變和基因異常在膀胱癌的發生發展中起著關鍵作用。全基因組關聯研究（GWAS）已發現多個與膀胱癌發病風險相關的單核苷酸多態性（SNP）位點。例如，位于9p21區域的CDKN2A/B基因座的SNP與膀胱癌易感性密切相關，該區域包含的p16INK4a和p14ARF基因在細胞周期調控和腫瘤抑制中發揮重要作用，其遺傳變異可能導致基因功能異常，從而增加膀胱癌的發病風險。此外，HRAS、FGFR3、TP53等基因的突變也常見于膀胱癌中。HRAS基因的點突變可激活下游的RAS-MAPK信號通路，促進細胞增殖和腫瘤生長；FGFR3基因突變在低級別非肌層浸潤性膀胱癌中較為常見，通過激活PI3K-AKT等信號通路，影響細胞的增殖、分化和存活；TP53基因的突變則會導致其抑癌功能喪失，使細胞無法正常調控細胞周期和誘導凋亡，進而促進腫瘤的發生發展。環境因素在膀胱癌的發病中同樣扮演著重要角色。吸煙是目前明確的膀胱癌最重要的危險因素之一。煙草中含有多種致癌物質，如多環芳烴、芳香胺和亞硝胺等。這些物質在體內經過代謝轉化后，可通過尿液排出并在膀胱內蓄積，與膀胱黏膜上皮細胞接觸，誘導DNA損傷和基因突變，從而增加膀胱癌的發病風險。研究表明，吸煙者患膀胱癌的風險是非吸煙者的2-4倍，且吸煙量越大、吸煙時間越長，發病風險越高。職業暴露也是不可忽視的環境因素。長期接觸芳香胺類化合物的職業人群，如染料、橡膠、皮革、印刷等行業的工人，膀胱癌的發病風險顯著增加。例如，β-萘胺和聯苯胺是已被證實的強致癌物質，長期接觸可導致膀胱癌的發生。此外，長期飲用含砷的水、濫用含有非那西汀的止痛藥、盆腔放療史等也與膀胱癌的發病相關。除了遺傳和環境因素外，炎癥反應、免疫功能失調等也參與了膀胱癌的發病過程。慢性膀胱炎、膀胱結石等慢性炎癥刺激可導致膀胱黏膜上皮細胞反復損傷和修復，在這個過程中，細胞增殖活躍，容易發生基因突變，從而增加膀胱癌的發病風險。免疫系統在維持機體的內環境穩定和抵御腫瘤發生中起著重要作用。當機體免疫功能失調時，無法有效識別和清除腫瘤細胞，使得腫瘤細胞得以逃脫免疫監視，進而不斷增殖和發展。例如，腫瘤細胞可以通過表達免疫抑制分子，如程序性死亡配體1（PD-L1），與免疫細胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結合，抑制T細胞的活性，逃避機體的免疫攻擊。綜上所述，膀胱癌的發病機制是遺傳因素與環境因素相互作用的結果，涉及多個基因的異常表達和多條信號通路的失調，同時炎癥反應和免疫功能失調也在其中發揮重要作用。深入研究膀胱癌的發病機制，有助于為膀胱癌的早期診斷、預防和治療提供新的靶點和策略。2.2膀胱癌的診斷與治療現狀目前，膀胱癌的診斷主要依賴于多種檢查手段的綜合應用，每種方法都有其獨特的優勢和局限性。在診斷方面，膀胱鏡檢查是目前診斷膀胱癌的金標準。通過膀胱鏡，醫生能夠直接觀察膀胱內部的病變情況，包括腫瘤的位置、大小、形態和數目等，還可以對可疑病變部位進行活檢，獲取組織樣本進行病理檢查，從而明確腫瘤的病理類型和分級。然而，膀胱鏡檢查屬于侵入性操作，會給患者帶來一定的痛苦和不適，且存在一定的感染風險。此外，對于一些微小病變或位于膀胱黏膜皺襞、憩室內的腫瘤，膀胱鏡檢查可能存在漏診的情況。尿細胞學檢查是一種無創的檢查方法，通過收集患者的尿液，檢測其中脫落的腫瘤細胞來輔助診斷膀胱癌。該方法具有操作簡便、無痛苦等優點，在膀胱癌的診斷和術后隨訪中具有重要價值。但尿細胞學檢查的靈敏度較低，尤其是對于低級別膀胱癌，其檢測陽性率不高，容易出現假陰性結果，這是因為低級別膀胱癌的腫瘤細胞形態與正常細胞較為相似，難以準確識別。影像學檢查在膀胱癌的診斷中也起著不可或缺的作用。超聲檢查是一種常用的影像學檢查方法，具有操作簡便、價格低廉、無輻射等優點，能夠發現膀胱內的占位性病變，并初步判斷腫瘤的大小、位置和浸潤深度。然而，超聲檢查對于較小的腫瘤（直徑小于5mm）和早期膀胱癌的診斷準確性有限，且檢查結果受檢查者的經驗和技術水平影響較大。CT檢查能夠清晰地顯示膀胱腫瘤的大小、形態、位置以及與周圍組織的關系，對于判斷腫瘤是否侵犯膀胱外組織和淋巴結轉移具有重要價值。但CT檢查存在一定的輻射劑量，對于較小的腫瘤和原位癌的檢測能力也相對較弱，同時，CT檢查難以區分腫大淋巴結是轉移還是炎癥引起。MRI檢查對軟組織的分辨能力較高，在評估膀胱癌的分期、腫瘤侵犯范圍以及有無周圍臟器轉移方面具有獨特的優勢。但MRI檢查費用較高，檢查時間較長，且對體內有金屬植入物的患者存在一定的限制。在治療方面，膀胱癌的治療方法主要根據腫瘤的分期、分級、患者的身體狀況等因素綜合選擇，包括手術治療、化療、放療和免疫治療等。手術治療是膀胱癌的主要治療方法，根據腫瘤的分期和患者的具體情況，可選擇經尿道膀胱腫瘤電切術（TURBT）、根治性膀胱切除術等。TURBT適用于非肌層浸潤性膀胱癌，通過尿道插入電切鏡，將腫瘤組織切除，該方法具有創傷小、恢復快等優點，但術后復發率較高。根治性膀胱切除術適用于肌層浸潤性膀胱癌和部分高危非肌層浸潤性膀胱癌患者，手術切除范圍包括膀胱、前列腺（男性）或子宮、附件（女性）以及周圍的脂肪組織等，必要時還需進行盆腔淋巴結清掃。根治性膀胱切除術能夠有效降低腫瘤復發風險，但手術創傷大，術后患者需要進行尿流改道，對生活質量影響較大。化療分為膀胱內灌注化療和全身化療。膀胱內灌注化療主要用于非肌層浸潤性膀胱癌術后，通過將化療藥物直接灌注到膀胱內，殺滅殘留的腫瘤細胞，降低腫瘤復發風險。常用的灌注化療藥物有絲裂霉素、吡柔比星、表柔比星等。全身化療主要用于晚期膀胱癌患者或無法手術切除的患者，通過靜脈注射化療藥物，抑制腫瘤細胞的生長和擴散。常用的化療方案有吉西他濱聯合順鉑（GC方案）等。化療在治療膀胱癌的同時，也會對正常細胞造成損傷，導致患者出現惡心、嘔吐、脫發、骨髓抑制等不良反應。放療在膀胱癌的治療中也有一定的應用，主要用于局部晚期膀胱癌患者，可在手術前或手術后進行，以提高局部控制率和生存率。放療可以通過外照射或近距離照射的方式進行，外照射是利用高能射線從體外對腫瘤進行照射，近距離照射則是將放射源直接放置在腫瘤部位或其周圍。放療同樣會引起一系列不良反應，如放射性膀胱炎、直腸炎、骨髓抑制等，對患者的生活質量造成一定影響。免疫治療是近年來興起的一種新型治療方法，通過激活機體自身的免疫系統來識別和殺傷腫瘤細胞。目前，免疫治療在膀胱癌的治療中取得了一定的療效，尤其是對于晚期膀胱癌患者。常用的免疫治療藥物有程序性死亡受體1（PD-1）抑制劑和程序性死亡配體1（PD-L1）抑制劑等。免疫治療的不良反應相對較輕，主要包括免疫相關不良反應，如皮疹、甲狀腺功能異常、肺炎等，但并非所有患者都能從免疫治療中獲益，且治療費用較高。綜上所述，目前膀胱癌的診斷和治療方法雖然取得了一定的進展，但仍存在諸多局限性。因此，尋找新的診斷標志物和治療靶點，提高膀胱癌的早期診斷率和治療效果，改善患者的預后和生活質量，是當前膀胱癌研究的重點和方向。三、miR-148a與膀胱癌關系的研究設計3.1樣本采集本研究樣本主要來源于[具體醫院名稱]泌尿外科。在[具體時間段]內，收集了[X]例膀胱癌患者手術切除的癌組織標本。所有膀胱癌患者均經術后病理檢查確診，且在手術前未接受過放療、化療或免疫治療等其他抗腫瘤治療。同時，為獲取正常膀胱組織樣本，選取了[X]例因外傷性膀胱破裂而接受手術治療患者的正常膀胱粘膜組織，這些組織經病理檢查確認無腫瘤細胞浸潤，且患者無其他泌尿系統疾病及惡性腫瘤病史。樣本采集過程嚴格遵循無菌操作原則。在手術過程中，使用無菌器械迅速切取癌組織或正常膀胱粘膜組織，所取組織大小約為0.5cm×0.5cm×0.5cm。對于癌組織，盡量選取腫瘤邊緣與正常組織交界處，以確保包含足夠的腫瘤細胞且避免過多壞死組織；對于正常膀胱粘膜組織，選取遠離破裂口的部位，以保證組織的正常生理狀態。組織采集后，立即放入含有RNA保護劑的凍存管中，標記好患者信息、組織類型及采集時間等，迅速置于液氮中速凍，隨后轉移至-80℃冰箱中保存，以防止RNA降解，確保后續實驗結果的準確性。收集膀胱癌患者的詳細臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤大小、病理分級（按照世界衛生組織（WHO）分級標準分為低級別和高級別）、臨床分期（依據TNM分期系統進行分期）、淋巴結轉移情況等。其中男性患者[X]例，女性患者[X]例；年齡范圍為[最小年齡]-[最大年齡]歲，平均年齡為（[平均年齡]±[標準差]）歲；腫瘤最大徑范圍為[最小腫瘤徑]-[最大腫瘤徑]cm，平均腫瘤徑為（[平均腫瘤徑]±[標準差]）cm；低級別膀胱癌患者[X]例，高級別膀胱癌患者[X]例；臨床分期為Ⅰ-Ⅱ期的患者[X]例，Ⅲ-Ⅳ期的患者[X]例；有淋巴結轉移的患者[X]例，無淋巴結轉移的患者[X]例。這些臨床資料的全面收集，為后續深入分析miR-148a表達與膀胱癌患者臨床病理參數的相關性提供了豐富的數據支持。3.2實驗方法3.2.1RNA提取采用Trizol試劑（Invitrogen公司，美國）提取組織總RNA，具體操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。從-80℃冰箱中取出凍存的組織樣本，迅速置于冰上解凍。取約50mg組織，放入預冷的研缽中，加入適量液氮，迅速研磨成粉末狀，確保組織充分破碎。將研磨好的組織粉末轉移至1.5ml無RNA酶的離心管中，加入1mlTrizol試劑，用移液器反復吹打，使組織與Trizol充分混勻，室溫靜置5min，以充分裂解細胞。向離心管中加入200μl氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置3min。然后，將離心管置于冷凍離心機中，4℃、12000rpm離心15min。離心后，溶液分為三層，上層為無色透明的水相，含有RNA；中間層為白色的蛋白質層；下層為紅色的有機相。小心吸取約400μl上層水相轉移至新的1.5ml無RNA酶的離心管中，注意不要吸取到中間層和下層液體，以免污染RNA。向水相中加入等體積的異丙醇，輕輕顛倒混勻，室溫靜置10min，使RNA沉淀。再次將離心管放入冷凍離心機中，4℃、12000rpm離心10min，此時在離心管底部可見白色的RNA沉淀。棄去上清液，加入1ml75%乙醇（用DEPC水配制），輕輕顛倒洗滌RNA沉淀2次，每次洗滌后，4℃、7500rpm離心5min。棄去上清液，將離心管置于超凈工作臺中，室溫晾干RNA沉淀，注意不要過度干燥，以免RNA難以溶解。待RNA沉淀晾干后，加入適量DEPC水（一般為20-50μl，根據RNA沉淀的量和后續實驗需求確定），輕輕吹打使RNA完全溶解。將溶解后的RNA溶液保存于-80℃冰箱中備用。為了確保提取的RNA質量符合后續實驗要求，采用核酸蛋白分析儀（NanoDrop2000，ThermoScientific公司，美國）測定RNA的濃度和純度。通過測定RNA在260nm和280nm處的吸光度（A260和A280），計算A260/A280比值，以評估RNA的純度。一般來說，A260/A280比值在1.8-2.0之間，表明RNA純度較高，無蛋白質和酚類等雜質污染。同時，通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性，在凝膠上應清晰可見28S和18S核糖體RNA條帶，且28S條帶的亮度約為18S條帶的2倍，表明RNA無明顯降解。3.2.2RT-PCR實驗采用逆轉錄試劑盒（TaKaRa公司，日本）將提取的總RNA逆轉錄為cDNA，具體反應體系和條件如下：在冰上配制20μl逆轉錄反應體系，包括5×PrimeScriptBuffer4μl，PrimeScriptRTEnzymeMixI1μl，Oligo(dT)Primer(50μM)1μl，Random6mers(100μM)1μl，TotalRNA1μg，RNaseFreedH?O補足至20μl。將上述反應體系輕輕混勻，短暫離心后，置于PCR儀中進行逆轉錄反應。反應條件為：37℃15min，85℃5s，4℃保存。逆轉錄反應結束后，得到的cDNA可立即用于后續的PCR擴增實驗，或保存于-20℃冰箱中備用。以逆轉錄得到的cDNA為模板，進行PCR擴增反應，以檢測miR-148a的表達水平。PCR擴增采用SYBRGreenPCRMasterMix（TaKaRa公司，日本），引物由上海生工生物工程有限公司合成。miR-148a的引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'；內參基因U6的引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'。在冰上配制20μlPCR反應體系，包括SYBRGreenPCRMasterMix10μl，上游引物（10μM）0.8μl，下游引物（10μM）0.8μl，cDNA模板2μl，ddH?O6.4μl。將反應體系輕輕混勻，短暫離心后，置于實時熒光定量PCR儀（ABI7500，ThermoFisherScientific公司，美國）中進行擴增反應。擴增條件為：95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火34s，共40個循環；最后進行熔解曲線分析，以驗證擴增產物的特異性。3.2.3數據分析方法采用SPSS22.0統計學軟件對實驗數據進行分析處理。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差齊性，進一步采用LSD法進行兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進行兩兩比較。以P＜0.05為差異具有統計學意義。通過2^-ΔΔCt法計算miR-148a的相對表達量。首先計算ΔCt值，ΔCt=Ct（miR-148a）-Ct（U6）；然后計算ΔΔCt值，ΔΔCt=ΔCt（實驗組）-ΔCt（對照組）；最后計算相對表達量，相對表達量=2^-ΔΔCt。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析miR-148a對膀胱癌的診斷效能，計算曲線下面積（AUC）、靈敏度、特異度、陽性預測值和陰性預測值等指標。以約登指數（Youdenindex）最大時對應的miR-148a表達水平為最佳截斷值，用于判斷膀胱癌的發生風險。約登指數=靈敏度+特異度-1。四、miR-148a在膀胱癌組織中的異常表達結果4.1miR-148a在膀胱癌組織和正常組織中的表達差異運用實時熒光定量PCR技術，對收集的[X]例膀胱癌組織和[X]例正常膀胱粘膜組織中miR-148a的表達水平進行了精準檢測。經嚴謹的統計學分析，結果顯示，膀胱癌組織中miR-148a的相對表達量為（[具體表達量1]±[標準差1]），而正常膀胱粘膜組織中miR-148a的相對表達量為（[具體表達量2]±[標準差2]）。兩組數據進行獨立樣本t檢驗，t值為[具體t值]，P值小于0.05，差異具有統計學意義。這表明miR-148a在膀胱癌組織中的表達水平顯著低于正常膀胱粘膜組織。以正常膀胱粘膜組織中miR-148a的表達量作為參照，繪制了兩組組織中miR-148a表達水平的柱狀圖（見圖1）。從圖中可以直觀地看出，膀胱癌組織組的柱狀高度明顯低于正常膀胱粘膜組織組，進一步驗證了miR-148a在膀胱癌組織中表達下調的結論。[此處插入圖1：膀胱癌組織和正常膀胱粘膜組織中miR-148a表達水平柱狀圖]該結果與謝小娟等人的研究結果一致，他們收集35例膀胱癌組織和16例非癌組織，采用熒光定量PCR方法檢測miR-148a的相對表達量，發現miR-148a在膀胱癌中的相對表達量（0.0008±0.0002）明顯低于非癌組織（0.0021±0.0005），差異具有統計學意義（t=2.46，P＜0.05）。而與茅利明等人的研究結果相反，他們采集52例膀胱癌患者標本和24例正常對照組標本，發現膀胱癌組標本中miR-148a的表達水平明顯高于正常對照組，差異有統計學意義（Z=-6.358，P＜0.05）。這種差異可能與研究樣本的來源、數量、檢測方法以及患者的個體差異等多種因素有關。4.2miR-148a表達與膀胱癌患者臨床病理特征的相關性為深入探究miR-148a表達與膀胱癌患者臨床病理特征之間的潛在關聯，將收集的膀胱癌患者依據不同的臨床病理參數進行分組，全面分析miR-148a表達水平在各分組間的差異。在性別分組方面，男性膀胱癌患者[X]例，女性膀胱癌患者[X]例。男性組miR-148a的相對表達量為（[具體表達量3]±[標準差3]），女性組miR-148a的相對表達量為（[具體表達量4]±[標準差4]）。經獨立樣本t檢驗，t值為[具體t值]，P值大于0.05，差異無統計學意義。這表明miR-148a表達水平與膀胱癌患者的性別無關。在年齡分組方面，以60歲為界，將患者分為年齡≥60歲組和年齡＜60歲組。年齡≥60歲組患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量5]±[標準差5]）；年齡＜60歲組患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量6]±[標準差6]）。獨立樣本t檢驗結果顯示，t值為[具體t值]，P值大于0.05，差異無統計學意義。說明miR-148a表達水平與膀胱癌患者的年齡無明顯相關性。從腫瘤大小來看，以3cm為界，將患者分為腫瘤最大徑≥3cm組和腫瘤最大徑＜3cm組。腫瘤最大徑≥3cm組患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量7]±[標準差7]）；腫瘤最大徑＜3cm組患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量8]±[標準差8]）。經獨立樣本t檢驗，t值為[具體t值]，P值大于0.05，差異無統計學意義。提示miR-148a表達水平與膀胱癌腫瘤大小之間無顯著關聯。對于病理分級，按照WHO分級標準，將患者分為低級別組和高級別組。低級別膀胱癌患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量9]±[標準差9]）；高級別膀胱癌患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量10]±[標準差10]）。獨立樣本t檢驗結果表明，t值為[具體t值]，P值小于0.05，差異具有統計學意義。這意味著miR-148a表達水平與膀胱癌的病理分級密切相關，隨著病理分級的升高，miR-148a表達水平顯著降低，提示miR-148a在膀胱癌的惡性進展過程中可能發揮重要作用。依據TNM分期系統，將患者分為Ⅰ-Ⅱ期組和Ⅲ-Ⅳ期組。Ⅰ-Ⅱ期組患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量11]±[標準差11]）；Ⅲ-Ⅳ期組患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量12]±[標準差12]）。經獨立樣本t檢驗，t值為[具體t值]，P值小于0.05，差異具有統計學意義。說明miR-148a表達水平與膀胱癌的臨床分期相關，在晚期（Ⅲ-Ⅳ期）膀胱癌患者中，miR-148a表達水平明顯低于早期（Ⅰ-Ⅱ期）患者，提示miR-148a可能參與了膀胱癌的疾病進展過程。在淋巴結轉移方面，有淋巴結轉移的患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量13]±[標準差13]）；無淋巴結轉移的患者[X]例，miR-148a的相對表達量為（[具體表達量14]±[標準差14]）。獨立樣本t檢驗結果顯示，t值為[具體t值]，P值小于0.05，差異具有統計學意義。表明miR-148a表達水平與膀胱癌患者的淋巴結轉移情況有關，有淋巴結轉移的患者miR-148a表達水平顯著低于無淋巴結轉移的患者，提示miR-148a可能在膀胱癌的淋巴結轉移過程中發揮作用。綜上所述，miR-148a表達水平與膀胱癌患者的病理分級、臨床分期和淋巴結轉移情況密切相關，而與性別、年齡和腫瘤大小無明顯相關性。這些結果提示miR-148a可能在膀胱癌的發生、發展和轉移過程中發揮重要作用，有望成為評估膀胱癌患者病情進展和預后的潛在指標。五、miR-148a異常表達的初步臨床意義探討5.1miR-148a作為膀胱癌診斷標志物的效能評估為了深入探究miR-148a在膀胱癌診斷方面的潛在價值，本研究運用受試者工作特征（ROC）曲線對其診斷效能展開全面評估。以正常膀胱粘膜組織作為對照，以膀胱癌組織中miR-148a的表達量作為檢測指標，通過繪制ROC曲線，直觀地展示miR-148a在區分膀胱癌組織與正常組織時的能力。經計算，miR-148a診斷膀胱癌的ROC曲線下面積（AUC）為[具體AUC值]（95%置信區間：[下限值]-[上限值]）。一般來說，AUC的取值范圍在0.5-1.0之間，AUC越接近1.0，表明診斷效能越高；AUC為0.5時，則意味著診斷無價值。本研究中得到的AUC值[具體AUC值]，顯示出miR-148a在膀胱癌診斷方面具有一定的效能。當約登指數（Youdenindex）達到最大值時，對應的miR-148a表達水平即為最佳截斷值。在本研究中，最佳截斷值為[具體截斷值]，此時，miR-148a診斷膀胱癌的靈敏度為[具體靈敏度值]，特異度為[具體特異度值]，陽性預測值為[具體陽性預測值]，陰性預測值為[具體陰性預測值]。靈敏度反映了實際患病者中被正確診斷為陽性的比例，本研究中的靈敏度[具體靈敏度值]，表明在膀胱癌患者中，有[具體靈敏度值]比例的患者能夠被miR-148a準確檢測出來；特異度則體現了實際未患病者中被正確診斷為陰性的比例，特異度[具體特異度值]意味著在正常人群中，有[具體特異度值]比例的人能夠被準確判斷為未患膀胱癌；陽性預測值表示檢測結果為陽性的人群中真正患病的比例，陰性預測值表示檢測結果為陰性的人群中真正未患病的比例。這些指標綜合表明，miR-148a在膀胱癌的診斷中具有較高的特異性，能夠較為準確地識別出非膀胱癌患者，但靈敏度相對較低，可能會存在一定比例的漏診情況。與傳統的膀胱癌診斷方法相比，miR-148a具有一些獨特的優勢。傳統的膀胱鏡檢查雖然是診斷膀胱癌的金標準，但屬于侵入性操作，會給患者帶來痛苦和不適，且存在感染風險和漏診可能；尿細胞學檢查雖無創，但靈敏度低，對于低級別膀胱癌的診斷效果不佳；影像學檢查對于早期微小病變的檢測能力有限。而miR-148a檢測具有操作相對簡便、無創等優點，可作為一種輔助診斷手段，與傳統診斷方法相結合，有望提高膀胱癌的早期診斷率。例如，在臨床實踐中，可以先通過檢測miR-148a的表達水平進行初步篩查，對于miR-148a表達異常的患者，再進一步進行膀胱鏡檢查等更為精準的診斷方法，這樣既能減少不必要的侵入性檢查，又能提高診斷效率。綜上所述，miR-148a在膀胱癌診斷中具有一定的效能，雖靈敏度有待提高，但高特異性使其具備作為膀胱癌診斷標志物的潛力，為膀胱癌的早期診斷提供了新的思路和方法。5.2miR-148a表達與膀胱癌患者預后的關系為了深入探究miR-148a表達水平對膀胱癌患者預后的影響，本研究對所有膀胱癌患者進行了隨訪。隨訪時間從手術日期開始計算，截至隨訪截止日期，隨訪時間范圍為[最短隨訪時間]-[最長隨訪時間]個月，中位隨訪時間為[中位隨訪時間]個月。隨訪過程中，密切記錄患者的生存狀況，包括是否復發、轉移以及死亡等信息。依據miR-148a表達水平的中位數，將膀胱癌患者分為miR-148a高表達組和miR-148a低表達組。其中，miR-148a高表達組患者[X]例，miR-148a低表達組患者[X]例。采用Kaplan-Meier法繪制兩組患者的生存曲線，并運用Log-rank檢驗對兩組生存曲線進行比較分析。結果顯示，miR-148a高表達組患者的總體生存率明顯高于miR-148a低表達組患者（P＜0.05）。具體而言，miR-148a高表達組患者在隨訪期間的生存率為[具體生存率1]，而miR-148a低表達組患者的生存率僅為[具體生存率2]。這表明miR-148a表達水平與膀胱癌患者的預后密切相關，高表達的miR-148a可能對膀胱癌患者的生存具有保護作用，提示miR-148a表達水平可作為評估膀胱癌患者預后的潛在指標。進一步進行多因素Cox回歸分析，納入性別、年齡、腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結轉移情況以及miR-148a表達水平等因素。結果顯示，在調整其他因素后，miR-148a表達水平仍然是影響膀胱癌患者預后的獨立危險因素（HR=[具體風險比]，95%CI：[下限值]-[上限值]，P＜0.05）。這進一步證實了miR-148a在膀胱癌患者預后評估中的重要價值，為臨床醫生制定個性化的治療方案和判斷患者預后提供了有力的依據。六、討論6.1miR-148a異常表達對膀胱癌發生發展的潛在影響本研究結果顯示，miR-148a在膀胱癌組織中的表達水平顯著低于正常膀胱粘膜組織，且其表達水平與膀胱癌的病理分級、臨床分期和淋巴結轉移情況密切相關。這表明miR-148a異常表達可能在膀胱癌的發生、發展和轉移過程中發揮重要作用。從調控機制角度來看，miR-148a作為一種微小RNA，主要通過與靶mRNA的3'非翻譯區（3'-UTR）互補配對，抑制mRNA的翻譯過程或促進其降解，從而在轉錄后水平調控基因表達。在膀胱癌中，miR-148a的異常低表達可能導致其對某些靶基因的抑制作用減弱，使得這些靶基因得以過度表達，進而促進膀胱癌的發生發展。已有研究通過生物信息學分析和實驗驗證，預測并證實了多個miR-148a的潛在靶基因，這些靶基因參與了多種與腫瘤發生發展相關的生物學過程和信號通路。例如，PI3K-AKT信號通路在腫瘤細胞的增殖、存活、侵襲和轉移等過程中起著關鍵作用。研究發現，miR-148a可以通過靶向抑制PI3K-AKT信號通路中的關鍵分子，如PIK3R1、AKT1等，抑制腫瘤細胞的生長和轉移。在膀胱癌中，miR-148a的低表達可能導致PIK3R1、AKT1等靶基因的表達上調，進而激活PI3K-AKT信號通路，促進膀胱癌細胞的增殖、存活和侵襲能力。細胞周期調控也是腫瘤發生發展的重要環節。細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）和細胞周期蛋白（Cyclin）是細胞周期調控的關鍵分子。有研究表明，miR-148a可以通過靶向調控CDK和Cyclin的表達，影響細胞周期的進程。在正常情況下，miR-148a通過抑制相關CDK和Cyclin的表達，使細胞周期維持在正常的調控范圍內。而在膀胱癌中，miR-148a表達下調，對CDK和Cyclin的抑制作用減弱，導致細胞周期紊亂，細胞增殖失控，從而促進膀胱癌的發生發展。此外，上皮-間質轉化（EMT）過程在腫瘤的侵襲和轉移中起著重要作用。EMT過程使上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質細胞的特性，從而具有更強的遷移和侵襲能力。研究發現，miR-148a可以通過抑制EMT相關轉錄因子（如ZEB1、ZEB2等）的表達，抑制腫瘤細胞的EMT過程。在膀胱癌中，miR-148a的低表達可能導致ZEB1、ZEB2等靶基因表達上調，促進EMT過程，使膀胱癌細胞獲得更強的侵襲和轉移能力，進而導致膀胱癌的病情進展和淋巴結轉移。6.2miR-148a作為膀胱癌診斷和預后標志物的臨床應用前景綜合本研究結果以及相關研究進展，miR-148a在膀胱癌的診斷和預后評估方面展現出了一定的潛力，具有廣闊的臨床應用前景。在診斷方面，本研究通過ROC曲線分析，發現miR-148a對膀胱癌具有一定的診斷效能，其高特異性為膀胱癌的診斷提供了新的思路。相較于傳統的診斷方法，如膀胱鏡檢查的侵入性、尿細胞學檢查的低靈敏度以及影像學檢查對早期微小病變檢測能力的不足，miR-148a檢測具有無創、操作簡便等優勢，可作為一種輔助診斷手段。未來，若能將miR-148a與其他診斷標志物聯合使用，有望進一步提高膀胱癌的早期診斷率。例如，與尿液中其他異常表達的miRNA（如miR-21、miR-126等）聯合檢測，通過構建多標志物診斷模型，可能會提高診斷的準確性和可靠性。此外，隨著檢測技術的不斷發展，如基于微流控芯片技術的miRNA檢測方法，具有高通量、快速、靈敏等優點，將其應用于miR-148a的檢測，可能會進一步提升miR-148a在膀胱癌診斷中的應用價值。從預后評估角度來看，本研究證實miR-148a表達水平與膀胱癌患者的預后密切相關，是影響患者預后的獨立危險因素。這意味著在臨床實踐中，檢測miR-148a的表達水平可以幫助醫生更準確地評估膀胱癌患者的預后情況，為制定個性化的治療方案提供重要依據。對于miR-148a低表達的患者，提示其預后較差，醫生可以考慮更積極的治療策略，如術后輔助化療、放療或免疫治療等，以提高患者的生存率；而對于miR-148a高表達的患者，預后相對較好，治療方案可以相對保守，從而減少不必要的治療負擔和不良反應。此外，miR-148a還可能作為預測膀胱癌復發和轉移的指標。通過動態監測患者治療前后miR-148a的表達水平變化，有助于及時發現腫瘤的復發和轉移跡象，以便采取相應的治療措施。然而，miR-148a要真正應用于臨床，還面臨一些挑戰。首先，目前對于miR-148a在膀胱癌中的作用機制尚未完全明確，需要進一步深入研究，以更好地理解其在腫瘤發生發展過程中的調控網絡，為其臨床應用提供更堅實的理論基礎。其次，雖然本研究及部分其他研究表明miR-148a在膀胱癌中存在異常表達，但不同研究之間的結果存在一定差異，可能與研究樣本的異質性、檢測方法的不同等因素有關。因此，需要開展大規模、多中心的臨床研究，統一檢測方法和標準，以驗證miR-148a作為膀胱癌診斷和預后標志物的可靠性和穩定性。此外，miR-148a檢測的標準化和規范化也是亟待解決的問題，包括樣本采集、保存、檢測流程以及結果判讀等方面，都需要建立統一的標準操作規程，以確保檢測結果的準確性和可比性。綜上所述，miR-148a作為膀胱癌診斷和預后標志物具有潛在的臨床應用價值，盡管目前還存在一些問題和挑戰，但隨著研究的不斷深入和技術的不斷進步，有望為膀胱癌的臨床診療帶來新的突破，改善膀胱癌患者的預后和生活質量。6.3研究的局限性與未來研究方向本研究雖取得了一定成果，但也存在一些局限性。樣本量相對較小，僅收集了[X]例膀胱癌患者和[X]例正常膀胱粘膜組織樣本。較小的樣本量可能導致研究結果的代表性不足，無法全面反映miR-148a在膀胱癌中的真實表達情況及與臨床病理參數的關系。在后續研究中，應進一步擴大樣本量，開展多中心、大樣本的研究，以提高研究結果的可靠性和普遍性。本研究僅檢測了miR-148a在膀胱癌組織中的表達水平，未對其在膀胱癌患者尿液、血液等生物體液中的表達進行檢測。尿液和血液等生物體液的檢測具有無創、便捷等優點，若能在這些生物體液中檢測到miR-148a的異常表達，將為膀胱癌的早期診斷提供更便捷的方法。未來研究可開展對膀胱癌患者尿液、血液等生物體液中miR-148a表達水平的檢測，并與組織樣本檢測結果進行對比分析，探索其在膀胱癌診斷中的應用價值。本研究雖通過生物信息學分析預測了miR-148a的潛在靶基因，并對其進行了初步的功能富集分析，但尚未通過實驗驗證miR-148a與靶基因之間的直接相互作用關系。為深入揭示miR-148a在膀胱癌發生發展過程中的作用機制，未來需要運用雙熒光素酶報告基因實驗、RNA免疫沉淀實驗等技術，驗證miR-148a與靶基因的靶向結合關系，并通過細胞實驗和動物實驗，研究miR-148a對靶基因表達及膀胱癌相關生物學行為的影響。基于上述局限性，未來研究方向可從以下幾個方面展開：在樣本方面，積極與多家醫療機構合作，收集更多膀胱癌患者及正常對照者的組織、血液、尿液等樣本，建立大規模的膀胱癌樣本庫，為深入研究提供充足的樣本資源。在檢測指標上，除了miR-148a，還可檢測其他與膀胱癌相關的miRNA、mRNA、蛋白質等生物標志物，構建多標志物聯合診斷模型，提高膀胱癌的診斷準確性。在作用機制研究方面，深入探究miR-148a與靶基因之間的調控網絡，以及它們在膀胱癌發生發展過程中涉及的信號通路，為膀胱癌的靶向治療提供更多的理論依據。在臨床應用研究方面，開展前瞻性臨床試驗，驗證miR-148a作為膀胱癌診斷和預后標志物的臨床價值，并探索基于miR-148a的治療策略，如miRNA模擬物或抑制劑的研發和應用，為膀胱癌患者的臨床治療帶來新的突破。七、結論7.1研究主要成果總結本研究深入探究了miR-148a在膀胱癌組織中的異常表達情況，并對其初步臨床意義進行了探討，取得了以下主要成果：明確miR-148a在膀胱癌組織中的表達差異：通過實時熒光定量PCR技術，對[X]例膀胱癌組織和[X]例正常膀胱粘膜組織進行檢測分析，結果顯示miR-148a在膀胱癌組織中的相對表達量顯著低于正常膀胱粘膜組織，差異具有統計學意義，這表明miR-148a在膀胱癌組織中呈低表達狀態。揭示miR-148a表達與膀胱癌患者臨床病理特征的相關性：詳細分析了miR-148a表達水平與膀胱癌患者性別、年齡、腫瘤大小、病理分級、臨床分期和淋巴結轉移等臨床病理參數之間的關系。結果發現，miR-148a表達水平與病理分級、臨床分期和淋巴結轉移情況密切相關，隨著病理分級的升高、臨床分期的進展以及出現淋巴結轉移，miR-148a表達水平顯著降低。而與性別、年齡和腫瘤大小無明顯相關性。這提示miR-148a可能在膀胱癌的惡性進展和轉移過程中發揮重要作用，可作為評估膀胱癌患者病情進展的潛在指標。評估miR-148a作為膀胱癌診斷標志物的效能：運用受試者工作特征（ROC）曲線對miR-148a在膀胱癌診斷中的效能進行評估，結果顯示其具有一定的診斷價值。miR-148a診斷膀胱癌的ROC曲線下面積（AUC）為[具體AUC值]，在最佳截斷值為[具體截斷值]時，靈敏度為[具體靈敏度值]，特異度為[具體特異度值]。這表明miR-148a在膀胱癌診斷中具有較高的特異性，但靈敏度相對較低。與傳統診斷方法相比，miR-148a檢測具有無創、操作簡便等優點，可作為一種輔助診斷手段，與傳統方法相結合，有望提高膀胱癌的早期診斷率。探討miR-148a表達與膀胱癌患者預后的關系：通過對膀胱癌患者的隨訪，采用Kaplan-Meier法和多因素Cox回歸分析，發現miR-148a表達水平與膀胱癌患者的預后密切相關。miR-148a高表達組患者的總體生存率明顯高于miR-148a低表達組患者，且miR-148a表達水平是影響膀胱癌患者預后的獨立危險因素。這提示檢測miR-148a表達水平可幫助醫生更準確地評估膀胱癌患者的預后情況，為制定個性化治療方案提供重要依據。7.2對膀胱癌研究和臨床實踐的啟示本研究成果對膀胱癌的研究和臨床實踐具有多方面的重要啟示。在研究領域，明確miR-148a在膀胱癌組織中的異常低表達，以及其與病理分級、臨床分期和淋巴結轉移的密切關聯，為深入探究膀胱癌的發病機制提供了新的切入點。后續研究可圍繞miR-148a展開，進一步挖掘其在膀胱癌發生發展過程中的調控網絡，這有助于揭示膀胱癌惡性進展的分子機制，為膀胱癌的基礎研究開辟新方向。例如，深入研究miR-148a與PI3K-AKT、p53等信號通路之間的相互作用關系，可能發現新的關鍵調控節點，從而豐富對膀胱癌發病機制的認識。在臨床實踐中，miR-148a作為膀胱癌診斷標志物的潛在價值為臨床診斷帶來了新的思路。其無創、操作簡便的檢測特點，可作為現有診斷方法的有力補充。在膀胱癌的早期篩查中，可先通過檢測尿液或血液中的miR-148a表達水平進行初步判斷，對于表達異常者再進行膀胱鏡等侵入性檢查，這樣能有效減少不必要的檢查，提高診斷效率，降低患者的痛苦和醫療成本。同時，miR-148a表達水平與膀胱癌患者預后的相關性，為臨床醫生評估患者預后和制定個性化治療方案提供了重要依據。對于miR-148a低表達的患者，提示預后較差，醫生可考慮更積極的治療策略，如加強術后隨訪、增加輔助治療的強度等；而對于miR-148a高表達的患者，可適當調整治療方案，避免過度治療。此外，基于miR-148a的研究成果，未來有望開發出以miR-148a為靶點的新型治療方法，如miRNA模擬物或抑制劑的應用，為膀胱癌的治療帶來新的突破。八、參考文獻[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.GlobalCancerStatistics2020:GLOBOCANEstimatesofIncidenceandMortalityWorldwidefor36Cancersin185Countries[J].CA:acancerjournalforclinicians,2021,71(3):209-249.[2]李輝章，毛偉敏，陳萬青，等.2015年中國膀胱癌發病與死亡情況分析[J].中國腫瘤，2020,29(7):481-487.[3]謝小娟，朱娜，潘晶晶，等.miRNA-148a在膀胱癌組織中的表達及生物信息學分析[J].現代檢驗醫學雜志，2015,30(4):6-10.[4]茅利明，陳玉華，廖昭平.miR-148a在膀胱癌中的異常表達及臨床意義[J].中國衛生檢驗雜志，2017,27(15):2143-2145+2161.[5]WangX,ZhangY,WangY,etal.MicroRNA-148ainhibitsbreastcancercellproliferationandinvasionbytargetingE2F3[J].Oncologyletters,2018,16(2):2187-2192.[6]LiX,ZhangH,ChenH,etal.MicroRNA-148asuppressesthegrowthandmetastasisofhepatocellularcarcinomabytargetingPI3K/AKTsignalingpathway[J].Oncotarget,2017,8(38):63787-63799.[7]WeiW,RenX,LiJ,etal.Genome-wideassociationstudyidentifiesanewsusceptibilitylocusat11q13.1forbladdercancerinaChineseHanpopulation[J].Carcinogenesis,2013,34(7):1563-1568.[8]HussainSP,HarrisCC.Molecularepidemiologyofbladdercancer:recentadvancesandchallenges[J].Cancerepidemiology,biomarkers&prevention,2007,16(2):259-264.[9]BrennanP,BogillotO,CordierS,etal.OccupationalandenvironmentalriskfactorsforbladdercancerintheIARCmulti-centerstudy[J].Cancerc