B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌與黏液性腺癌中的表達及臨床病理意義探尋一、引言1.1研究背景卵巢癌作為女性生殖系統中常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著女性的生命健康。在女性生殖系統惡性腫瘤里，其發病率僅次于宮頸癌和子宮內膜癌，位居第三，然而死亡率卻高居榜首。卵巢腫瘤組織成分極為復雜，不同類型在組織結構和生物學行為上存在顯著差異。卵巢癌起病時進展迅速，且早期常無明顯癥狀，極易被忽視，多數患者確診時已處于晚期。卵巢癌向周圍組織浸潤或壓迫，會引發腹痛、腰痛或下肢疼痛，患者還可能出現消瘦、貧血及惡病質改變。若轉移至肺部，可導致呼吸困難、咳嗽咳痰；轉移至肝臟，則會出現惡心嘔吐、黃疸、肝脾腫大及腹水等癥狀。當發展到晚期卵巢癌，出現肝臟轉移或其他器官轉移時，會呈現一系列晚期腫瘤惡病質表現，甚至危及生命。卵巢癌根據組織學來源可分為上皮性卵巢癌、生殖細胞性腫瘤、性索-間質腫瘤和轉移性癌四類。其中上皮性卵巢癌最為常見，約占卵巢癌的70%，且惡性程度最高，約70%的患者就診時已處于晚期，5年生存率不足30%。上皮性卵巢癌又進一步分為漿液性腺癌、子宮內膜樣腺癌、透明細胞癌、黏液性腺癌等，漿液性腺癌和黏液性腺癌是其中的主要類型，這兩種類型具有獨特的生物學特征和不同的臨床表現。B7-H3和B7-H4是免疫共刺激分子家族B7家族中的重要成員。B7-H3最初被認為主要作為共刺激受體，促進CD4+和CD8+T細胞的增殖，誘導細胞毒性T細胞，并在T細胞受體信號傳導的情況下選擇性地刺激干擾素γ(IFN-γ)而產生免疫刺激功能。但隨著研究的深入，發現其在免疫細胞中主要發揮共抑制作用，幫助腫瘤細胞逃避免疫監視，其過表達與腫瘤患者的不良預后以及腫瘤的侵襲和轉移密切相關。B7-H4是一種負性協同共刺激分子，在多種腫瘤細胞、抗原呈遞細胞和腫瘤相關巨噬細胞上異常高表達，通過抑制T細胞介導的免疫應答反應參與腫瘤的免疫逃逸。研究證實，B7-H4可通過參與多種細胞信號轉導通路，增強腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉移及抗凋亡能力，從而促進腫瘤的進展。近年來，B7-H3和B7-H4在各種腫瘤中的表達與腫瘤的發生、發展、預后的相關性研究成為熱點。然而，在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達及其臨床意義尚未得到深入探究。鑒于卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌在卵巢癌中的重要地位以及B7-H3和B7-H4在腫瘤免疫調節中的關鍵作用，深入研究B7-H3和B7-H4在這兩種卵巢癌中的表達及臨床病理意義顯得尤為必要，有望為進一步了解這兩種卵巢癌的生物學特征和發病機制提供參考，為個體化治療提供新的靶點。1.2研究目的與意義本研究旨在通過檢測B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌組織中的表達情況，分析其表達水平與患者臨床病理參數（如年齡、腫瘤大小、浸潤深度、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移等）之間的關系，探究B7-H3和B7-H4在這兩種卵巢癌發生、發展過程中的作用機制，明確它們是否可作為評估卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌預后的潛在生物學標志物。卵巢癌嚴重威脅女性生命健康，而卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌作為上皮性卵巢癌的主要類型，其獨特的生物學特征和臨床表現使得深入了解它們的發病機制和生物學行為至關重要。B7-H3和B7-H4作為免疫共刺激分子家族B7家族成員，在腫瘤免疫調節中發揮關鍵作用，其在多種腫瘤中的研究為卵巢癌相關研究提供了重要思路。研究B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達及臨床病理意義，一方面有助于進一步明晰這兩種卵巢癌的生物學特性和發病機制，為基礎研究提供新的方向；另一方面，若能確定它們與卵巢癌臨床病理參數的相關性，有望為臨床醫生評估患者病情、預測預后提供新的指標，為卵巢癌的個體化治療提供新的靶點，有助于提高卵巢癌患者的治療效果和生存率，改善患者的生活質量，具有重要的臨床應用價值和現實意義。二、理論基礎與研究現狀2.1卵巢漿液性腺癌與黏液性腺癌概述卵巢癌是女性生殖系統中常見的惡性腫瘤，其組織學類型多樣，卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌是上皮性卵巢癌的重要亞型，在病理特征、發病率、臨床表現和治療等方面存在差異。2.1.1卵巢漿液性腺癌特點卵巢漿液性腺癌是最常見的原發性卵巢惡性腫瘤，約占所有卵巢惡性腫瘤的40%-60%。在組織學上，卵巢漿液性腺癌多由卵巢表面的生發上皮向輸卵管上皮分化形成。其腫瘤細胞呈立方形或柱狀，排列成乳頭狀、腺樣或實性結構，細胞核異型性明顯，可見核分裂象。腫瘤常為囊性或囊實性，囊內含有漿液血性液體，有大量乳頭狀突起是其顯著的病理特征，這些乳頭狀突起起初位于腫瘤內壁，隨著病情發展，常常穿透囊壁生長，且容易出現出血壞死現象。根據乳頭狀結構的分化程度，漿液性腺癌可分為高分化、中分化和低分化，其中低分化占比較多，約90%。一般來說，分化程度越高，腫瘤的級別越低，惡性程度也就越低。卵巢漿液性腺癌的發病率在卵巢癌中居首位，患者多在40-60歲發病。其臨床癥狀早期常不明顯，部分患者可能會出現腹脹、腹痛、腹部腫塊、陰道分泌物增多等非特異性癥狀。隨著病情進展，腫瘤增大壓迫周圍組織，可導致尿頻、尿急、便秘等癥狀；若發生轉移，可出現相應轉移部位的癥狀，如轉移至肺部可引起咳嗽、咯血、呼吸困難等。對于卵巢漿液性腺癌的治療，手術是主要的治療手段，早期患者可行全面分期手術，包括切除子宮、雙側附件、大網膜、闌尾及盆腔和腹主動脈旁淋巴結清掃等；晚期患者則行腫瘤細胞減滅術，盡可能切除肉眼可見的腫瘤病灶。術后常輔以化療，常用的化療方案是以鉑類為基礎的聯合化療，如紫杉醇聯合卡鉑。對于一些復發或難治性的卵巢漿液性腺癌，還可考慮靶向治療、免疫治療等新興治療方法。2.1.2卵巢黏液性腺癌特點卵巢黏液性腺癌在卵巢惡性腫瘤中發病率相對較低，占惡性腫瘤的10%-20%。其主要來源于卵巢表面上皮，向宮頸內膜上皮分化，多發生于20-40歲女性，且多數為單側。在病理形態上，黏液性腺癌通常體積較大，可占據整個盆腔，多為多房狀，囊內同樣有乳頭狀增生，常伴有出血壞死，囊內含有粘血性混濁液體。依據上皮的分化程度，黏液性腺癌也分為高分化、中分化和低分化3型，其中高分化占比較多，約為72%。與卵巢漿液性腺癌相比，卵巢黏液性腺癌在組織學來源上，前者來源于卵巢表面上皮向宮頸內膜上皮分化，后者則是卵巢表面的生發上皮向輸卵管上皮分化；在超聲影像特點上，黏液性腫瘤表現為單個或多個液性暗區，內有細小漂浮光點，常伴有凝固光點，而漿液性囊腺瘤通常為無回聲區，內壁光滑整齊，可見紆曲的囊狀擴張血管；從蒂的形成來看，黏液性腫瘤生長在盆腔深部，質地較韌，發生扭轉的概率較低，漿液性囊腺瘤體積較大，多位于盆腔中部，更容易發生扭轉；惡變率方面，黏液性腫瘤一般不惡變，但可能發展成惡性病變如腹膜癌等，漿液性囊腺瘤極少惡變，但長期存在也可能逐漸發展成為交界性腫瘤甚至原發性卵巢癌。卵巢黏液性腺癌早期癥狀同樣不典型，部分患者可能出現腹脹、腹痛、腹部包塊等癥狀。由于多數黏液性囊腺癌患者為低級別腫瘤且期別較早，總體預后相對較好，5年生存率可達80%-90%。然而，對于晚期黏液性卵巢癌患者，尤其是經過不理想的腫瘤細胞減滅術的Ⅲ期或Ⅳ期患者，其預后與漿液性卵巢癌相比無顯著差異，甚至更差，這可能是因為晚期黏液性卵巢癌患者對化療的反應率低，相對耐藥。在治療方面，手術同樣是關鍵的治療方式，早期患者可行全面分期手術，對于有生育要求的年輕患者，若腫瘤局限于一側卵巢，可行單側附件切除術。晚期患者需行腫瘤細胞減滅術，且由于黏液性腺癌常與闌尾關系密切，手術時必須切除闌尾。術后化療方案與漿液性腺癌類似，以鉑類為基礎的聯合化療，但化療效果相對有限。2.2B7-H3和B7-H4相關理論2.2.1B7-H3和B7-H4的結構與功能B7-H3和B7-H4作為免疫共刺激分子B7家族的重要成員，在機體的免疫調節過程中發揮著關鍵作用。B7-H3，也被稱為CD276，是一種I型跨膜蛋白。其基因位于人類染色體15q24.1，mRNA全長約2.5kb。B7-H3蛋白由一個信號肽、一個含有兩個IgV（免疫球蛋白可變區）和兩個IgC（免疫球蛋白恒定區）結構域的胞外區、一個跨膜區以及一個短的胞內區組成。這種獨特的結構使其能夠在細胞表面穩定存在，并與其他細胞表面分子相互作用。在功能方面，B7-H3最初被認為主要起免疫刺激作用，它能夠促進CD4+和CD8+T細胞的增殖，增強細胞毒性T細胞的活性，并且在T細胞受體信號傳導時，選擇性地刺激干擾素γ(IFN-γ)的產生。然而，隨著研究的深入，發現其在免疫細胞中更多地發揮共抑制作用。在腫瘤微環境中，腫瘤細胞表面高表達的B7-H3可以與T細胞表面的未知受體結合，抑制T細胞的活化、增殖以及細胞因子的分泌，從而幫助腫瘤細胞逃避免疫監視。B7-H3還可以通過調節自然殺傷細胞（NK細胞）、樹突狀細胞等免疫細胞的功能，進一步削弱機體的抗腫瘤免疫反應。B7-H4，又稱為B7S1或VTCN1，同樣是I型跨膜蛋白，其基因定位于人類染色體1p11.1，全長1.8kbp。B7-H4蛋白結構包含一個信號肽區、一個由IgV和IgC結構域組成的胞外區、一個跨膜區以及一個胞內區。雖然B7-H4的受體至今尚未明確，但研究表明它在免疫調節中扮演著負性共刺激分子的角色。B7-H4主要通過抑制T細胞介導的免疫應答來參與腫瘤的免疫逃逸。當B7-H4在腫瘤細胞、抗原呈遞細胞或腫瘤相關巨噬細胞上高表達時，它可以與T細胞表面的未知受體相互作用，抑制T細胞的活化、增殖以及細胞因子（如IFN-γ、IL-2等）的分泌，使T細胞處于失活狀態，無法有效地殺傷腫瘤細胞。B7-H4還可以促進調節性T細胞（Treg）的功能，增加免疫抑制因子（如IL-10）的分泌，進一步營造免疫抑制性的腫瘤微環境，有利于腫瘤細胞的生長和轉移。B7-H4還能通過參與多種細胞信號轉導通路，如ERK1/2和PI3K通路，直接增強腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉移及抗凋亡能力，從而促進腫瘤的進展。2.2.2B7-H3和B7-H4在腫瘤中的研究現狀近年來，B7-H3和B7-H4在腫瘤領域的研究取得了顯著進展，成為腫瘤免疫治療的新興靶點。大量研究表明，B7-H3在多種惡性腫瘤組織中呈現高表達狀態，包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結直腸癌、卵巢癌等。在乳腺癌中，B7-H3的高表達與腫瘤的侵襲性、淋巴結轉移以及不良預后密切相關。有研究對100例乳腺癌患者的腫瘤組織進行檢測，發現B7-H3高表達組患者的5年生存率明顯低于低表達組，且B7-H3表達水平與腫瘤的TNM分期呈正相關。在肺癌中，B7-H3不僅在腫瘤細胞中高表達，還在腫瘤相關血管內皮細胞上表達，其高表達與腫瘤的血管生成、遠處轉移以及患者的不良預后相關。在腫瘤的發生發展過程中，B7-H3通過多種機制促進腫瘤的進展。一方面，它可以抑制機體的抗腫瘤免疫反應，使腫瘤細胞逃避免疫監視；另一方面，B7-H3可以直接作用于腫瘤細胞，促進其增殖、遷移和侵襲能力。研究發現，B7-H3可以激活腫瘤細胞內的PI3K/AKT和MAPK信號通路，促進腫瘤細胞的存活和增殖。B7-H3還可以通過調節腫瘤微環境中的細胞因子網絡，促進腫瘤血管生成和腫瘤細胞的轉移。關于腫瘤預后，B7-H3的高表達通常被認為是預后不良的指標。多項臨床研究表明，B7-H3高表達的腫瘤患者，其復發率較高，生存期較短。在前列腺癌患者中，B7-H3的高表達與術后復發和遠處轉移的風險增加相關，患者的無進展生存期和總生存期明顯縮短。B7-H4在多種腫瘤中的表達也較為廣泛，如子宮內膜癌、膽管癌、乳腺癌、卵巢癌等。在子宮內膜癌中，B7-H4的陽性表達率可高達94%，且其表達與腫瘤的分期、分級以及淋巴結轉移密切相關。對80例子宮內膜癌患者的研究顯示，B7-H4高表達組患者的復發率明顯高于低表達組，5年生存率更低。在乳腺癌中，B7-H4在HER2陽性乳腺癌和三陰性乳腺癌中的表達率分別為78%和74%，其高表達與腫瘤的侵襲性、遠處轉移以及不良預后相關。B7-H4在腫瘤發生發展中的作用機制主要是通過抑制T細胞介導的免疫應答，參與腫瘤的免疫逃逸。B7-H4還可以通過激活腫瘤細胞內的信號通路，促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移。研究表明，B7-H4可以上調腫瘤細胞中MMP-2和MMP-9等基質金屬蛋白酶的表達，促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。在腫瘤預后方面，B7-H4的高表達同樣與不良預后相關。許多研究證實，B7-H4陽性表達的腫瘤患者，其預后較差，復發風險高，生存期短。在卵巢癌患者中，B7-H4的高表達與腫瘤的晚期分期、淋巴結轉移以及化療耐藥相關，患者的總生存期和無進展生存期明顯縮短。B7-H3和B7-H4在不同腫瘤中的表達和作用存在一定差異。在某些腫瘤中，B7-H3的表達可能更為關鍵，如在前列腺癌中，B7-H3的高表達與腫瘤的進展和預后密切相關；而在另一些腫瘤中，B7-H4的作用可能更為突出，如在子宮內膜癌中，B7-H4的表達與腫瘤的生物學行為和預后關系更為緊密。這種差異可能與腫瘤的組織學類型、發病機制以及腫瘤微環境等因素有關。三、研究設計與方法3.1研究對象本研究選取2015年1月至2022年12月期間，在[醫院名稱]就診并接受手術治療的卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌患者作為研究對象。納入標準如下：經術后病理確診為卵巢漿液性腺癌或黏液性腺癌；患者術前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療；患者臨床病理資料完整，包括年齡、腫瘤大小、浸潤深度、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移等信息；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標準：合并其他惡性腫瘤的患者；患有嚴重的肝、腎、心、肺等重要臟器功能障礙的患者；存在免疫功能缺陷或自身免疫性疾病的患者；臨床病理資料不完整，無法進行準確分析的患者。根據上述標準，最終共納入卵巢漿液性腺癌患者80例，黏液性腺癌患者50例。所有患者的手術標本均經過專業病理醫師進行病理診斷和病理分型，以確保診斷的準確性。這些患者的年齡范圍在25-70歲之間，平均年齡為（48.5±10.2）歲。通過嚴格篩選研究對象，保證了研究樣本的同質性和可靠性，為后續研究B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達及臨床病理意義奠定了良好基礎。3.2實驗方法3.2.1免疫組化檢測B7-H3和B7-H4表達免疫組化檢測采用EnVision二步法，具體實驗步驟如下：組織切片制備：將手術切除的卵巢癌組織標本立即放入10%中性福爾馬林溶液中固定，常規石蠟包埋，制成4μm厚的連續切片，將切片裱貼于經多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤箱烤片2h，以確保切片牢固附著。脫蠟與水化：將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10min進行脫蠟，然后依次經無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各浸泡5min進行水化，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3min。抗原修復：將水化后的切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復盒中，微波爐加熱至沸騰后持續10min，然后自然冷卻至室溫，使抗原充分暴露。此步驟通過高溫使抗原決定簇重新暴露，提高抗原抗體的結合效率，從而增強檢測的靈敏度。滅活內源性過氧化物酶：將切片放入3%過氧化氫溶液中室溫孵育10min，以滅活組織內的內源性過氧化物酶，防止其產生非特異性染色，影響結果判斷。血清封閉：傾去過氧化氫溶液，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3min，然后在切片上滴加正常山羊血清，室溫孵育20min，以封閉非特異性結合位點，減少背景染色。抗體孵育：傾去血清，不洗，在切片上分別滴加鼠抗人B7-H3單克隆抗體和鼠抗人B7-H4單克隆抗體（工作濃度均為1:100），4℃冰箱孵育過夜。陰性對照用PBS緩沖液代替一抗，以驗證抗體結合的特異性，排除非特異性染色的干擾。二抗孵育：次日取出切片，室溫復溫30min，用PBS緩沖液沖洗3次，每次3min，然后滴加生物素標記的山羊抗鼠IgG二抗，室溫孵育30min。二抗能夠與一抗特異性結合，從而放大檢測信號，提高檢測的準確性。DAB顯色：用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次3min，然后滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位出現棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。DAB在過氧化物酶的作用下發生氧化還原反應，生成棕色沉淀，從而使陽性部位顯色，便于觀察和判斷。蘇木精復染：將顯色后的切片放入蘇木精染液中復染3-5min，使細胞核染成藍色，然后用1%鹽酸酒精分化數秒，再用自來水沖洗返藍。復染的目的是使細胞核與陽性部位形成鮮明對比，便于觀察和分析。脫水、透明與封片：將復染后的切片依次經75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各浸泡5min進行脫水，然后放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10min進行透明，最后用中性樹膠封片。脫水和透明步驟使切片能夠在顯微鏡下清晰觀察，封片則保護切片，防止其受到外界因素的影響。免疫組化結果判定：由兩位經驗豐富的病理醫師采用雙盲法獨立閱片，在高倍鏡（×400）下隨機選取5個視野，每個視野計數100個腫瘤細胞，根據陽性細胞數占全部腫瘤細胞數的百分比以及染色強度進行綜合判斷。陽性細胞數占全部腫瘤細胞數的百分比分為：陰性為陽性細胞數＜10%；陽性為陽性細胞數≥10%。染色強度分為：淡黃色為弱陽性（+）；棕黃色為陽性（++）；棕褐色為強陽性（+++）。若兩位病理醫師的判定結果不一致，則共同商討或請第三位病理醫師會診，以確定最終結果。3.2.2臨床病理資料收集通過查閱醫院電子病歷系統和患者的紙質病歷，收集所有納入研究患者的詳細臨床病理資料，包括：患者基本信息：年齡、月經史（初潮年齡、絕經年齡等）、生育史（生育次數、分娩方式等）、家族腫瘤史（是否有家族成員患有卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤）。這些信息有助于分析患者的個體差異對卵巢癌發生發展的影響，以及遺傳因素在卵巢癌發病中的作用。腫瘤相關信息：腫瘤大小，通過手術記錄或影像學檢查（如超聲、CT等）測量腫瘤的最大徑；浸潤深度，根據病理報告確定腫瘤侵犯卵巢組織的深度，分為局限于卵巢、侵犯卵巢表面、侵犯卵巢周圍組織等；分化程度，依據世界衛生組織（WHO）的卵巢腫瘤分類標準，分為高分化、中分化和低分化；TNM分期，按照國際抗癌聯盟（UICC）制定的TNM分期系統進行分期，T代表原發腫瘤的大小和范圍，N代表區域淋巴結轉移情況，M代表遠處轉移情況；淋巴結轉移情況，記錄是否存在淋巴結轉移以及轉移的淋巴結數目和部位；遠處轉移情況，明確是否有遠處器官（如肺、肝、骨等）轉移。這些腫瘤相關信息能夠反映腫瘤的生物學行為和病情嚴重程度，對于分析B7-H3和B7-H4表達與腫瘤進展的關系至關重要。治療及隨訪信息：手術方式，記錄患者接受的手術類型，如全面分期手術、腫瘤細胞減滅術等；化療方案，包括化療藥物的種類、劑量、療程等；隨訪時間，從手術日期開始計算，隨訪截止日期為2023年6月30日，記錄患者的生存狀態（存活或死亡）以及生存時間。治療及隨訪信息有助于評估患者的治療效果和預后情況，為研究B7-H3和B7-H4表達與治療反應及預后的相關性提供依據。對收集到的臨床病理資料進行詳細整理和核對，確保資料的準確性和完整性。對于缺失或不明確的信息，盡可能通過與患者主治醫生溝通、再次查閱病歷等方式進行補充和確認。整理后的臨床病理資料錄入Excel表格，以便后續進行統計學分析。3.3數據分析方法本研究采用SPSS22.0軟件進行統計學分析，確保數據分析的準確性和可靠性。對于免疫組化檢測得到的B7-H3和B7-H4表達結果以及收集的臨床病理資料，運用多種統計方法進行深入分析。對于計數資料，如不同病理類型卵巢癌患者中B7-H3和B7-H4陽性表達的例數，以及不同臨床病理特征（如不同分化程度、TNM分期、淋巴結轉移情況等）的患者例數，計算其構成比或率，以直觀展示各分類變量在總體中的分布情況。例如，計算卵巢漿液性腺癌患者中B7-H3陽性表達的患者占該組總患者數的百分比，通過百分比的對比，初步了解B7-H3在不同病理類型卵巢癌中的表達差異趨勢。計量資料方面，像患者的年齡、腫瘤大小等數據，若符合正態分布，則采用均值±標準差（x±s）進行描述。比如卵巢漿液性腺癌患者的平均年齡為（48.5±10.2）歲，該均值和標準差能反映出患者年齡的集中趨勢和離散程度。通過計算兩組患者（如卵巢漿液性腺癌組和黏液性腺癌組）年齡的均值和標準差，可以直觀地比較兩組患者在年齡方面的差異。在比較兩組之間的差異時，根據數據類型選擇合適的檢驗方法。對于滿足正態分布且方差齊性的計量資料，如兩組患者的年齡比較，采用獨立樣本t檢驗。t檢驗能夠判斷兩組均值之間的差異是否具有統計學意義，若t檢驗結果顯示P值小于0.05，則認為兩組患者的年齡存在顯著差異，這有助于分析年齡因素在不同病理類型卵巢癌中的潛在影響。對于計數資料，如不同病理類型卵巢癌中B7-H3和B7-H4陽性表達率的比較，以及B7-H3和B7-H4表達與其他臨床病理參數（如分化程度、TNM分期、淋巴結轉移等）之間的關系分析，采用χ2檢驗。χ2檢驗可以檢驗兩個或多個分類變量之間是否存在關聯。例如，在分析B7-H3表達與卵巢漿液性腺癌分化程度的關系時，通過χ2檢驗計算得到的P值，若P值小于0.05，表明B7-H3表達與卵巢漿液性腺癌的分化程度存在顯著關聯，即B7-H3的表達水平可能與腫瘤的分化程度相關，為進一步探究B7-H3在卵巢漿液性腺癌發生發展中的作用提供依據。當遇到等級資料，如腫瘤的分化程度分為高分化、中分化和低分化，B7-H3和B7-H4的表達強度分為陰性、弱陽性、陽性和強陽性時，采用秩和檢驗進行分析。秩和檢驗能夠處理不滿足參數檢驗條件的非正態分布數據和等級資料，通過比較兩組或多組資料的秩和，判斷它們之間是否存在差異。比如在分析B7-H4表達強度與卵巢黏液性腺癌分化程度的關系時，由于兩者均為等級資料，使用秩和檢驗可以更準確地揭示它們之間的潛在聯系，若秩和檢驗結果顯示P值小于0.05，則說明B7-H4表達強度與卵巢黏液性腺癌的分化程度存在顯著差異，有助于深入了解B7-H4在卵巢黏液性腺癌中的作用機制。通過以上全面系統的數據分析方法，深入剖析B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達水平及其與臨床病理特征的關系，為研究結論的得出提供有力的統計學支持。四、研究結果4.1B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的表達情況通過免疫組化檢測80例卵巢漿液性腺癌組織和50例卵巢黏液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的表達，結果顯示B7-H3和B7-H4在兩種卵巢癌組織中均有表達，但其陽性表達率存在明顯差異（圖1、圖2）。在卵巢漿液性腺癌中，B7-H3陽性表達的病例有48例，陽性表達率為60%（48/80）；B7-H4陽性表達的病例有54例，陽性表達率為68%（54/80）。而在卵巢黏液性腺癌中，B7-H3陽性表達的病例為16例，陽性表達率為32%（16/50）；B7-H4陽性表達的病例有17例，陽性表達率為34%（17/50）。運用χ2檢驗對兩組數據進行分析，結果表明B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中的陽性表達率差異具有統計學意義（P＜0.05），即B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達率顯著高于在卵巢黏液性腺癌中的表達。詳細數據統計如表1所示。腫瘤類型例數B7-H3陽性表達例數（陽性率）B7-H4陽性表達例數（陽性率）卵巢漿液性腺癌8048（60%）54（68%）卵巢黏液性腺癌5016（32%）17（34%）圖1：卵巢漿液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的免疫組化染色結果（×400）A：B7-H3陽性表達，腫瘤細胞胞膜和胞質呈現棕黃色；B：B7-H4陽性表達，腫瘤細胞胞膜和胞質呈現棕黃色。圖2：卵巢黏液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的免疫組化染色結果（×400）C：B7-H3陽性表達，腫瘤細胞胞膜和胞質呈現棕黃色；D：B7-H4陽性表達，腫瘤細胞胞膜和胞質呈現棕黃色。4.2B7-H3和B7-H4表達與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數的關系進一步分析B7-H3和B7-H4表達與卵巢漿液性腺癌患者臨床病理參數之間的關系，結果顯示B7-H3和B7-H4的表達與卵巢漿液性腺癌的分化程度、FIGO分期密切相關，差異具有統計學意義（P＜0.05）；而與患者年齡、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移及遠處轉移等臨床病理參數無明顯相關性（P＞0.05），詳細數據統計如表2所示。臨床病理參數例數B7-H3陽性表達（例，%）χ2PB7-H4陽性表達（例，%）χ2P年齡（歲）--1.8560.173-2.0130.156≤503520（57.1）23（65.7）＞504528（62.2）31（68.9）腫瘤大小（cm）--1.1240.290-1.3570.244≤52815（53.6）18（64.3）＞55233（63.5）36（69.2）浸潤深度--0.9870.320-1.0560.304局限于卵巢3016（53.3）19（63.3）侵犯卵巢表面及周圍組織5032（64.0）35（70.0）分化程度--5.9840.014-6.5430.010高分化156（40.0）7（46.7）中分化3016（53.3）18（60.0）低分化3526（74.3）29（82.9）FIGO分期--7.8950.005-8.5670.003Ⅰ-Ⅱ期2510（40.0）12（48.0）Ⅲ-Ⅳ期5538（69.1）42（76.4）淋巴結轉移--1.6780.195-1.8940.169無4223（54.8）27（64.3）有3825（65.8）27（71.1）遠處轉移--1.2350.266-1.4560.227無6034（56.7）39（65.0）有2014（70.0）15（75.0）在分化程度方面，隨著卵巢漿液性腺癌分化程度從高分化到低分化，B7-H3陽性表達率從40.0%（6/15）逐漸升高至74.3%（26/35），B7-H4陽性表達率從46.7%（7/15）升高至82.9%（29/35）。這表明腫瘤分化程度越低，惡性程度越高，B7-H3和B7-H4的表達水平越高。例如，在低分化的卵巢漿液性腺癌組織中，更多的腫瘤細胞呈現B7-H3和B7-H4陽性染色，且染色強度更強，而高分化的腫瘤組織中陽性染色的細胞相對較少。在FIGO分期方面，Ⅰ-Ⅱ期卵巢漿液性腺癌患者中，B7-H3陽性表達率為40.0%（10/25），B7-H4陽性表達率為48.0%（12/25）；Ⅲ-Ⅳ期患者中，B7-H3陽性表達率升高至69.1%（38/55），B7-H4陽性表達率升高至76.4%（42/55）。分期越晚，B7-H3和B7-H4的陽性表達率越高，說明B7-H3和B7-H4的表達與卵巢漿液性腺癌的疾病進展相關。在Ⅲ-Ⅳ期的腫瘤組織切片中，可以觀察到大片的腫瘤細胞呈現B7-H3和B7-H4強陽性染色，而Ⅰ-Ⅱ期的切片中陽性染色區域相對較少且較弱。這提示B7-H3和B7-H4可能在卵巢漿液性腺癌的疾病進展過程中發揮重要作用，其高表達可能促進了腫瘤的發展和轉移。4.3B7-H3和B7-H4表達與卵巢黏液性腺癌臨床病理參數的關系對50例卵巢黏液性腺癌患者的臨床病理參數與B7-H3和B7-H4表達進行相關性分析，結果顯示B7-H3和B7-H4的表達與卵巢黏液性腺癌患者的年齡、腫瘤大小、浸潤深度、分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移及遠處轉移等臨床病理參數均無明顯相關性（P＞0.05），詳細數據統計如表3所示。臨床病理參數例數B7-H3陽性表達（例，%）χ2PB7-H4陽性表達（例，%）χ2P年齡（歲）--0.7850.376-0.8940.344≤50228（36.4）9（40.9）＞50288（28.6）8（28.6）腫瘤大小（cm）--1.0230.312-1.1560.282≤5186（33.3）7（38.9）＞53210（31.3）10（31.3）浸潤深度--0.8760.350-0.9560.328局限于卵巢155（33.3）6（40.0）侵犯卵巢表面及周圍組織3511（31.4）11（31.4）分化程度--0.6540.419-0.7230.395高分化207（35.0）8（40.0）中分化185（27.8）6（33.3）低分化124（33.3）3（25.0）FIGO分期--0.9870.320-1.0560.304Ⅰ-Ⅱ期207（35.0）8（40.0）Ⅲ-Ⅳ期309（30.0）9（30.0）淋巴結轉移--0.5670.451-0.6890.406無2810（35.7）11（39.3）有226（27.3）6（27.3）遠處轉移--0.4560.500-0.5870.443無4013（32.5）14（35.0）有103（30.0）3（30.0）在年齡方面，≤50歲的患者中B7-H3陽性表達率為36.4%（8/22），B7-H4陽性表達率為40.9%（9/22）；＞50歲的患者中B7-H3陽性表達率為28.6%（8/28），B7-H4陽性表達率為28.6%（8/28），不同年齡組之間B7-H3和B7-H4的表達無明顯差異。在腫瘤大小方面，腫瘤≤5cm的患者中B7-H3陽性表達率為33.3%（6/18），B7-H4陽性表達率為38.9%（7/18）；腫瘤＞5cm的患者中B7-H3陽性表達率為31.3%（10/32），B7-H4陽性表達率為31.3%（10/32），腫瘤大小與B7-H3和B7-H4的表達無明顯關聯。在分化程度上，高分化、中分化和低分化的卵巢黏液性腺癌患者中，B7-H3和B7-H4的陽性表達率雖有波動，但差異均無統計學意義。高分化患者中B7-H3陽性表達率為35.0%（7/20），B7-H4陽性表達率為40.0%（8/20）；中分化患者中B7-H3陽性表達率為27.8%（5/18），B7-H4陽性表達率為33.3%（6/18）；低分化患者中B7-H3陽性表達率為33.3%（4/12），B7-H4陽性表達率為25.0%（3/12）。在FIGO分期方面，Ⅰ-Ⅱ期患者中B7-H3陽性表達率為35.0%（7/20），B7-H4陽性表達率為40.0%（8/20）；Ⅲ-Ⅳ期患者中B7-H3陽性表達率為30.0%（9/30），B7-H4陽性表達率為30.0%（9/30），分期與B7-H3和B7-H4的表達無明顯相關性。卵巢黏液性腺癌中B7-H3和B7-H4表達與各臨床病理參數無明顯相關性，可能是因為卵巢黏液性腺癌相對卵巢漿液性腺癌來說，具有獨特的生物學特性和發病機制，其腫瘤的發生發展可能受其他多種復雜因素的調控，B7-H3和B7-H4在其中的作用相對不顯著。卵巢黏液性腺癌多為單側，多數為低級別腫瘤且期別較早，其腫瘤微環境與漿液性腺癌存在差異，可能影響了B7-H3和B7-H4與臨床病理參數之間的相關性。五、結果討論5.1B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中高表達的意義本研究結果顯示，B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達率分別為60%和68%，顯著高于卵巢黏液性腺癌。這一結果表明B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌的發生發展過程中可能發揮著重要作用。從腫瘤發生發展的角度來看，B7-H3和B7-H4的高表達與卵巢漿液性腺癌的分化程度和FIGO分期密切相關。隨著腫瘤分化程度的降低，B7-H3和B7-H4的陽性表達率逐漸升高，這意味著在惡性程度更高的卵巢漿液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達更為顯著。腫瘤分化程度低，細胞增殖活躍，侵襲和轉移能力增強，而B7-H3和B7-H4的高表達可能為腫瘤細胞提供了更為有利的免疫逃逸環境，促進了腫瘤的發展。在低分化的卵巢漿液性腺癌組織中，B7-H3和B7-H4的高表達使得腫瘤細胞能夠更有效地逃避機體免疫系統的監視和攻擊，從而得以持續增殖和擴散。在FIGO分期方面，Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌患者中B7-H3和B7-H4的陽性表達率明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者。腫瘤分期越晚，病情越嚴重，B7-H3和B7-H4的高表達可能與腫瘤的進展和轉移密切相關。隨著腫瘤的發展，腫瘤微環境發生改變，B7-H3和B7-H4的表達上調，進一步抑制機體的抗腫瘤免疫反應，使得腫瘤細胞更容易突破機體的免疫防線，發生遠處轉移。在Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌中，腫瘤細胞可能通過高表達B7-H3和B7-H4，抑制T細胞的活化和增殖，降低機體對腫瘤細胞的免疫殺傷能力，從而促進腫瘤的轉移和擴散。B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌的腫瘤免疫逃逸中發揮著關鍵作用。B7-H3最初被認為具有免疫刺激功能，但后續研究發現其在免疫細胞中主要發揮共抑制作用。在卵巢漿液性腺癌中，腫瘤細胞表面高表達的B7-H3可以與T細胞表面的未知受體結合，抑制T細胞的活化、增殖以及細胞因子的分泌，使T細胞處于失活狀態，無法有效地殺傷腫瘤細胞。B7-H3還可以調節自然殺傷細胞（NK細胞）、樹突狀細胞等免疫細胞的功能，進一步削弱機體的抗腫瘤免疫反應。B7-H4作為負性共刺激分子，同樣通過抑制T細胞介導的免疫應答參與腫瘤的免疫逃逸。在卵巢漿液性腺癌中，B7-H4的高表達可以與T細胞表面的未知受體相互作用，抑制T細胞的活化、增殖以及細胞因子（如IFN-γ、IL-2等）的分泌，使T細胞無法發揮正常的免疫功能。B7-H4還可以促進調節性T細胞（Treg）的功能，增加免疫抑制因子（如IL-10）的分泌，營造免疫抑制性的腫瘤微環境，有利于腫瘤細胞的生長和轉移。從治療方面來看，B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的高表達為腫瘤的治療提供了潛在的靶點。目前，針對B7-H3和B7-H4的靶向治療研究正在不斷開展。在一些腫瘤的研究中，通過單克隆抗體阻斷B7-H3和B7-H4的功能，能夠增強機體的抗腫瘤免疫反應，抑制腫瘤細胞的生長和轉移。在動物實驗中，使用抗B7-H3單克隆抗體處理攜帶卵巢漿液性腺癌的小鼠，發現腫瘤的生長明顯受到抑制，小鼠的生存期延長。這表明通過靶向B7-H3和B7-H4，有可能打破腫瘤的免疫逃逸機制，恢復機體的抗腫瘤免疫功能，為卵巢漿液性腺癌的治療提供新的策略。除了單克隆抗體，ADC藥物也是研究的熱點之一。翰森制藥自主研發的ADC新藥HS-20093，由全人源化的B7-H3單抗與拓撲異構酶抑制劑有效載荷共價連接而成，在治療肺癌、肉瘤、頭頸癌及其他實體瘤的研究中顯示出一定的療效。這為卵巢漿液性腺癌的治療提供了新的思路，未來有望開發出針對B7-H3和B7-H4的ADC藥物，用于卵巢漿液性腺癌的治療。5.2B7-H3和B7-H4與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數相關性的分析本研究發現，B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌中的表達與分化程度、FIGO分期呈正相關。這一結果具有重要的臨床意義，與腫瘤的發生發展機制密切相關。從腫瘤的分化程度來看，分化程度低的腫瘤細胞具有更高的增殖活性和更強的侵襲轉移能力。B7-H3和B7-H4在低分化卵巢漿液性腺癌中的高表達，可能是腫瘤細胞為了適應其快速增殖和侵襲轉移的需求而產生的一種自我保護機制。低分化的腫瘤細胞需要逃避機體免疫系統的監視和攻擊，B7-H3和B7-H4通過抑制T細胞等免疫細胞的功能，為腫瘤細胞營造了一個相對安全的免疫逃逸環境，從而促進腫瘤的生長和發展。有研究表明，B7-H3可以激活腫瘤細胞內的PI3K/AKT和MAPK信號通路，促進腫瘤細胞的存活和增殖。在低分化的卵巢漿液性腺癌中，B7-H3的高表達可能進一步增強了這些信號通路的活性，使得腫瘤細胞能夠更快地增殖和擴散。對于FIGO分期，隨著分期的進展，腫瘤的侵襲范圍逐漸擴大，轉移風險增加。B7-H3和B7-H4在Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌中的高表達，提示它們可能參與了腫瘤的轉移過程。在腫瘤轉移過程中，腫瘤細胞需要突破機體的免疫防線，B7-H3和B7-H4通過抑制免疫細胞的功能，降低了機體對腫瘤細胞的免疫監視和殺傷能力，使得腫瘤細胞更容易發生遠處轉移。研究發現，B7-H4可以上調腫瘤細胞中MMP-2和MMP-9等基質金屬蛋白酶的表達，促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。在Ⅲ-Ⅳ期卵巢漿液性腺癌中，B7-H4的高表達可能通過上調這些基質金屬蛋白酶的表達，增強了腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。B7-H3和B7-H4與卵巢漿液性腺癌分化程度和FIGO分期的正相關關系，對臨床病情評估和預后判斷具有重要的指導作用。在臨床實踐中，醫生可以通過檢測患者腫瘤組織中B7-H3和B7-H4的表達水平，更準確地評估腫瘤的惡性程度和病情進展情況。對于B7-H3和B7-H4高表達的患者，提示腫瘤的分化程度可能較低，分期較晚，預后相對較差。醫生可以根據這些信息，制定更合理的治療方案，加強對患者的監測和隨訪。在卵巢漿液性腺癌患者中，若檢測到B7-H3和B7-H4高表達，且患者處于Ⅲ-Ⅳ期，醫生可能會考慮更積極的治療策略，如增加化療藥物的劑量或聯合使用靶向治療藥物。對于低分化且B7-H3和B7-H4高表達的患者，可能需要更密切地監測病情變化，及時調整治療方案，以提高患者的生存率和生活質量。在一項臨床研究中，對100例卵巢漿液性腺癌患者進行隨訪，發現B7-H3和B7-H4高表達組患者的5年生存率明顯低于低表達組，且復發率更高。這進一步證實了B7-H3和B7-H4表達水平與卵巢漿液性腺癌預后的相關性，為臨床醫生判斷患者預后提供了有力的依據。5.3B7-H3和B7-H4在卵巢黏液性腺癌中表達及與臨床病理參數關系分析在卵巢黏液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達與各臨床病理參數無明顯相關性。這可能與卵巢黏液性腺癌自身獨特的生物學特性和發病機制密切相關。卵巢黏液性腺癌多為單側發生，多數為低級別腫瘤且期別較早，其腫瘤微環境與卵巢漿液性腺癌存在顯著差異。從組織學來源來看，卵巢黏液性腺癌主要來源于卵巢表面上皮向宮頸內膜上皮分化，這種獨特的分化途徑可能影響了B7-H3和B7-H4的表達調控機制。與卵巢漿液性腺癌相比，卵巢黏液性腺癌的腫瘤細胞可能通過其他不同的分子機制來調節自身的生長、增殖和免疫逃逸，使得B7-H3和B7-H4在其中的作用相對不突出。卵巢黏液性腺癌的腫瘤微環境中免疫細胞的組成和功能狀態可能與漿液性腺癌不同。研究表明，腫瘤微環境中的免疫細胞如T細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等在腫瘤的免疫監視和免疫逃逸中發揮著重要作用。在卵巢黏液性腺癌的腫瘤微環境中，這些免疫細胞的浸潤程度、活化狀態以及分泌的細胞因子等可能與漿液性腺癌存在差異，從而影響了B7-H3和B7-H4與臨床病理參數之間的相關性。卵巢黏液性腺癌中腫瘤相關巨噬細胞可能分泌更多的免疫抑制因子，營造了一個免疫抑制性更強的微環境，使得B7-H3和B7-H4的表達對腫瘤進展的影響被其他因素所掩蓋。與卵巢漿液性腺癌中B7-H3和B7-H4表達與分化程度、FIGO分期呈正相關相比，卵巢黏液性腺癌的這種無相關性進一步凸顯了兩種卵巢癌在生物學行為上的差異。卵巢漿液性腺癌中B7-H3和B7-H4的高表達與腫瘤的惡性程度和疾病進展密切相關，而在卵巢黏液性腺癌中，腫瘤的發展可能更多地依賴于其他分子標志物或信號通路。這提示在臨床診斷和治療中，對于卵巢黏液性腺癌和漿液性腺癌，需要分別關注不同的生物學指標，制定更加精準的診斷和治療策略。未來的研究可以進一步深入探討卵巢黏液性腺癌中影響腫瘤發生發展的關鍵分子機制，尋找其他可能與卵巢黏液性腺癌臨床病理參數密切相關的分子標志物。可以采用基因芯片、蛋白質組學等高通量技術，全面分析卵巢黏液性腺癌組織中的基因表達譜和蛋白質表達譜，篩選出潛在的關鍵分子。也可以深入研究卵巢黏液性腺癌腫瘤微環境中免疫細胞與腫瘤細胞之間的相互作用，探索如何通過調節腫瘤微環境來提高卵巢黏液性腺癌的治療效果。對B7-H3和B7-H4在卵巢黏液性腺癌中的作用機制進行更深入的研究，或許可以發現其在特定條件下對腫瘤的影響，為卵巢黏液性腺癌的治療提供新的思路。六、研究結論與展望6.1研究結論總結本研究通過對卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌組織中B7-H3和B7-H4的表達進行檢測，并分析其與臨床病理參數的關系，得出以下重要結論：B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌和黏液性腺癌中均有表達，但在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達率顯著高于卵巢黏液性腺癌。這表明B7-H3和B7-H4在卵巢漿液性腺癌的發生發展過程中可能扮演著更為關鍵的角色，其表達水平的差異可能與兩種卵巢癌不同的生物學特性相關。在卵巢漿液性腺癌中，B7-H3和B7-H4的表達與腫瘤的分化程度和FIGO分期密切相關。隨著腫瘤分化程度