22TechnicalcodeofpracticefordiagnosisandintegratedmanagenmentoftomatolateblightI本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。喆、屈亞飛、張丹、孫西琳、馬馨悅、龔镕烈、王1番茄晚疫病診斷與防治技術規程GB/T8321（所有部分）農藥合理使用DB22/T3495—2023露地辣椒疫病診斷與防治技術由致病疫霉菌[Phytophthorainfestans（Mont.）deBar聚合酶鏈式反應polymerasechainreacti4診斷與防治流程21.1癥狀識別(見5.1)1.2病原鑒定(見5.2)2.1防治原則(見6.1)2.2防治方法(見6.2)1病害診斷(見第5章)圖1番茄晚疫病診斷與防治流程5病害診斷5.1癥狀識別5.1.1樣本采集采集具有典型癥狀的發病植株，用于癥狀識別與病原菌鑒定。5.1.2病害癥狀整個生育期均可發病，主要危害成株期的葉、莖和果實。具體如下：a)葉部癥狀：葉片感病多從葉緣開始發生，發病初期呈暗綠色不規則的水漬狀病斑，后逐漸變成褐色，邊緣不明顯。濕度大時迅速擴大，葉片背面病、健交界處產生白色霉狀物，嚴重時整個葉片腐爛，并蔓延至葉柄和主莖。典型癥狀見圖A.1;b)莖部癥狀：莖部感病病斑呈暗褐色，形狀不規則，稍凹陷，后期變成黑色。濕度大時，邊緣有明顯的白色霉狀物，莖稈腐爛易折斷。典型癥狀見圖A.2;3b)用潔凈解剖針直接挑取病部或培養基上的霉狀物，置水滴中，并使病原物分散開；c)加蓋蓋玻片，使蓋玻片的一側邊緣與水滴邊緣接觸，并慢慢放下蓋玻片，待顯微觀察。形態見圖B.2。5.2.2.1.1在超凈工作臺上，將采集的病葉浸于75%酒精中，表面消毒30s,再用3%次氯酸鈉滅菌2min～3min,用無菌水漂洗3次，吸水紙吸干水后將病、健交界處剪成5mm2~10mm2小塊。5.2.2.1.2取4小塊病葉置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養基上，在25℃培養箱中培養3d~以病菌基因組DNA為模板，采用通用引物ITS4/ITS5(ITS4:5’-TCCT行。經檢測得到ITS序列長度為750bp～760bp。檢測結果見圖C.1。將PCR產物進行測序，測序結果在GenB定為番茄致病疫霉菌，其ITS序列長度為754bp。詳細序列見附錄C.3。46.2.1選擇抗病品種6.2.2加強栽培管理6.2.2.1合理輪作6.2.2.2清潔田園6.2.2.3土壤消毒6.2.2.4田間管理6.2.3設施生態防控6.2.3.1降低濕度6.2.3.2調控溫度6.2.4化學防治6.2.4.1農藥選用與管理6.2.4.2施藥方法6.2.4.2.1煙霧法56(資料性)番茄晚疫病典型癥狀圖片番茄晚疫病典型癥狀見圖A.1至圖A.3。圖A.1葉部癥狀圖A.2莖部癥狀圖A.3果實癥狀7(資料性)番茄晚疫病病原菌顯微形態及菌落形態B.1病原菌顯微形態顯微形態見圖B.1和圖B.2。圖A.4病原菌游動孢子囊梗(顯微鏡倍數40×10)圖A.5病原菌游動孢子囊(顯微鏡倍數40×10)B.2病原菌菌落形態在PDA培養基上的菌落形態見圖B.3。圖A.6PDA培養基上的菌落形態(左：正面右：反面)8(規范性)病原菌分子鑒定C.1PCR反應體系和參數C.1.1反應體系ITS4和TIS5引物各加0.5μL,PCRmix5μL,DNA模板1μL,ddH?O3μL,合計10μC.1.2反應參數C.1.2.194℃預變性3min;94℃變性30s,55℃退火50s,72℃循環；72℃延伸10min;4℃保存。C.1.2.2PCR產物檢測使用1%的瓊脂糖凝膠，用0.5×TBE電泳緩沖液，100V電泳30min～40C.1.2.3在凝膠成像系統進行電泳結果觀察，判斷是否為預擴增長度的條帶，無非特異性條帶，且濃度大于50ng/μL。C.2PCR擴增產物檢測凝膠成像檢測PCR擴增產物，經檢測得到病原菌ITS序列長度為750bp~760bp。檢測結果見樣本圖B.1ITS序列PCR擴增產物電泳檢測對照圖9將PCR產物純化后測序，測試結果顯示番茄晚疫病疫霉菌ITS序列片段長度為1AACCGTTTCAACCCAATAGTACTTGGCGGCATTTTAAACCACTGTGGGGAACGCTGCGAAAGTGAGTCATAACGCATATTAAACTTGGCTACTAAACTGTACTTCTCTTTATGGAGAAATATGGACTGGTATCCATTTGG12