RNA干擾介導PARP-1基因沉默：解鎖卵巢癌細胞增殖與耐藥性之謎一、引言1.1研究背景與意義卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅女性的生命健康。相關數據顯示，卵巢癌的發病率在女性生殖系統惡性腫瘤中位居第三，但其死亡率卻居于首位。由于卵巢癌早期癥狀不明顯，缺乏有效的早期篩查手段，多數患者確診時已處于晚期。晚期卵巢癌患者的5年生存率僅為30%左右，且復發率高達85%。這使得卵巢癌成為了嚴重影響女性生活質量和生存預期的重大疾病。目前，卵巢癌的治療主要以手術切除病灶為主，輔以鉑類及紫杉醇類藥物化療、放療及靶向抗癌藥物等多種治療方案。鉑類化療藥物在卵巢癌治療中具有重要地位，然而，大多數患者在治療過程中會出現耐藥或復發的情況，這極大地限制了治療效果，成為卵巢癌臨床治療的一大難題。耐藥性的產生使得腫瘤細胞對化療藥物的敏感性降低，導致化療失敗，患者病情進展，嚴重影響患者的預后。因此，深入研究卵巢癌耐藥的分子機制，尋找有效的耐藥逆轉方法或治療靶點，對于提高卵巢癌患者的治療效果和生存率具有至關重要的意義。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）是一種參與DNA修復的蛋白質，在維持基因組完整性方面發揮著關鍵作用。PARP-1通過識別并結合DNA斷裂鏈，啟動并調節多種DNA修復途徑。當DNA出現損傷時，PARP-1能夠迅速被激活，催化ADP-核糖向靶蛋白轉移，從而促進DNA的修復過程。越來越多的研究表明，PARP-1在腫瘤的發生、發展中具有重要的調控作用。在卵巢癌中，PARP-1的高表達與腫瘤的生長、淋巴結轉移以及不良預后密切相關。一方面，PARP-1可通過促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養和氧氣，從而支持腫瘤的生長和轉移。研究發現，PARP-1可通過PARP-1-缺氧誘導因子-血管內皮生長因子通路促進腫瘤血管的生成，在缺氧反應和腫瘤血管生成中起重要作用。另一方面，PARP-1還能與Snail啟動子結合，刺激Snail和波形蛋白共表達，從而促進腫瘤細胞的上皮-間質轉化，增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力。此外，PARP-1在卵巢癌耐藥機制中也扮演著重要角色。有研究表明，在耐藥的卵巢癌細胞中，PARP-1的活性增強，能夠增強DNA受損后修復的能力，使得腫瘤細胞對化療藥物產生抗性。通過抑制PARP-1的活性或敲除PARP-1基因，能夠顯著提高耐藥卵巢癌細胞對鉑類藥物的敏感性，提示抑制PARP-1可能成為逆轉卵巢癌耐藥的有效策略。因此，深入研究PARP-1基因與卵巢癌的關系，特別是其在卵巢癌細胞增殖及耐藥性中的作用機制，對于開發新的卵巢癌治療方法具有重要的理論和實踐意義。本研究旨在通過RNA干擾技術抑制PARP-1基因表達，探討其對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響，為卵巢癌的治療提供新的靶點和思路，有望改善卵巢癌患者的治療效果和預后。1.2國內外研究現狀在卵巢癌的研究領域，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）與卵巢癌細胞增殖及耐藥性的關系一直是研究的重點。國內外學者從多個角度進行了深入探索，取得了一系列重要成果。在國外，早期的研究主要集中在PARP-1的結構和功能解析上。科研人員明確了PARP-1在真核細胞胞核中存在，其具有獨特的結構，包括N端的DNA結合區、中間的自我修復區及C端的催化區。這種結構賦予了PARP-1識別并結合DNA斷裂鏈，啟動并調節多種DNA修復途徑的能力，對維持基因組完整性至關重要。后續研究發現，PARP-1在腫瘤發生和進展中具有重要調控作用。如通過PARP-1-缺氧誘導因子-血管內皮生長因子通路促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養和氧氣，支持腫瘤的生長和轉移。在卵巢癌中，PARP-1的高表達與腫瘤的生長、淋巴結轉移以及不良預后密切相關，相關研究成果為卵巢癌的治療提供了新的靶點和思路。隨著研究的深入，國外學者開始關注PARP-1與卵巢癌耐藥性的關系。有研究表明，在耐藥的卵巢癌細胞中，PARP-1的活性增強，能夠增強DNA受損后修復的能力，使得腫瘤細胞對化療藥物產生抗性。通過抑制PARP-1的活性或敲除PARP-1基因，能夠顯著提高耐藥卵巢癌細胞對鉑類藥物的敏感性，提示抑制PARP-1可能成為逆轉卵巢癌耐藥的有效策略。基于這些發現，PARP-1抑制劑的研發成為熱點，多種PARP-1抑制劑已獲得美國和歐洲的批準，應用于不同類型卵巢癌的治療，且對具有BRCA突變的卵巢癌患者療效顯著，為卵巢癌患者帶來了新的希望。在國內，學者們也在積極開展相關研究。在PARP-1與卵巢癌血管生成方面，通過免疫組織化學等方法檢測上皮性卵巢癌原發灶中PARP-1、VEGF-A、MVD的表達，發現PARP-1表達與腫塊大小、病理分級和淋巴結轉移具有相關性，且通過調控VEGF-A的表達影響卵巢癌的血管生成。在卵巢癌化療前后腫瘤組織中PARP-1的表達及其與細胞上皮間質轉化的相關性研究中，發現TC方案化療能夠通過抑制卵巢癌病灶內PARP-1的表達來抑制上皮間質轉化及血管新生過程，為卵巢癌的化療提供了理論支持。盡管國內外在PARP-1與卵巢癌的研究中取得了顯著進展，但仍存在一些不足。目前對于PARP-1在卵巢癌中的具體作用機制尚未完全明確，尤其是在不同基因背景和細胞類型下，PARP-1的功能是否存在差異，還需要進一步深入研究。雖然PARP-1抑制劑在臨床應用中取得了一定療效，但部分患者會出現耐藥現象，對于PARP-1抑制劑耐藥機制的研究還不夠深入，這限制了其臨床應用效果的進一步提升。在RNA干擾技術抑制PARP-1基因表達方面，如何提高干擾效率，降低脫靶效應，以及如何將RNA干擾技術與臨床治療更好地結合，也是亟待解決的問題。1.3研究目的與創新點本研究旨在深入探究RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響，具體研究目的如下：首先，精確檢測聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）在上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13及其親本的上皮性卵巢癌順鉑敏感細胞OV2008中的表達差異。通過對比這兩種細胞中PARP-1的表達情況，為后續研究提供基礎數據，明確PARP-1在卵巢癌耐藥過程中的表達變化趨勢。其次，構建含PARP1-siRNA的慢病毒載體，并成功轉染上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13。利用RNA干擾技術，特異性地抑制PARP-1基因的表達，從而深入研究PARP-1基因表達下調對卵巢癌耐藥細胞的具體影響，為揭示卵巢癌耐藥機制提供關鍵線索。然后，全面檢測轉染外源性PARP-1小干擾RNA后對上皮性卵巢癌耐藥細胞的影響，包括細胞增殖能力、細胞周期分布、細胞凋亡率以及對順鉑的敏感性等多個方面。通過綜合分析這些指標的變化，系統地闡述RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞生物學行為的影響，為卵巢癌的治療提供新的理論依據。最后，初步探討PARP-1與卵巢癌耐藥的關系，從分子層面揭示PARP-1在卵巢癌耐藥機制中的作用，為開發新的卵巢癌治療靶點和策略提供有力支持。本研究的創新點主要體現在以下幾個方面：在研究視角上，將RNA干擾技術與卵巢癌耐藥機制研究相結合，從基因表達調控的角度深入探討PARP-1對卵巢癌細胞耐藥性的影響，為卵巢癌耐藥機制的研究提供了新的視角和思路。在研究方法上，采用構建慢病毒載體轉染的方式，實現對PARP-1基因表達的有效抑制，相比傳統的研究方法，具有更高的干擾效率和穩定性，能夠更準確地研究PARP-1基因表達下調對卵巢癌細胞的影響。此外，本研究還綜合運用多種實驗技術，如MTT法、實時熒光定量PCR、Western印跡法等，從多個層面、多個角度對卵巢癌細胞的增殖及耐藥性進行全面分析，使得研究結果更加全面、深入、可靠。這種多技術聯用的研究方法，為卵巢癌相關研究提供了新的技術手段和研究模式，有助于推動卵巢癌治療領域的發展。二、RNA干擾與PARP-1基因概述2.1RNA干擾技術原理與應用RNA干擾（RNAinterference，RNAi）是一種在真核生物中高度保守的轉錄后基因沉默機制，其作用機制主要包括以下幾個關鍵步驟。首先是dsRNA的引入，外源或內源的雙鏈RNA（dsRNA）進入細胞后，在Dicer酶的作用下被切割成21-25個核苷酸長度的小片段，即小干擾RNA（siRNA）。這些siRNA帶有3′端單鏈尾巴及磷酸化的5′端，是RNAi的起始誘導物。接著進入RISC的形成階段，切割后的siRNA中的反義鏈與細胞內的RNA誘導的沉默復合體（RISC）結合，形成具有活性的RISC-siRNA復合體。在這一復合體中，RISC的核心組分為核酸內切酶Ago，它在ATP供能情況下，負責催化siRNA其中一條鏈去尋找互補的mRNA鏈。最后是mRNA的降解，RISC-siRNA復合體通過堿基互補配對的方式，識別并結合到靶mRNA的特定序列上。隨后，RISC的核酸酶活性被激活，在距離siRNA3'端12個堿基的位置將mRNA切斷降解，從而抑制靶基因的表達，使基因沉默。不僅如此，siRNA在RNA依賴性RNA聚合酶（RdRP）的作用下，還能以mRNA為模板，siRNA為引物，擴增產生足夠數量的dsRNA作為底物提供給Dicer酶，產生更多的siRNA，可再次形成RISC，并繼續降解mRNA，從而產生級聯放大效應，少量的siRNA就可以產生高效的基因沉默效果。RNAi技術因其高效性和特異性，在多個領域展現出廣泛的應用前景。在基因功能研究領域，RNAi技術是沉默靶基因的主要方法之一，可用于破壞基因在細胞中的轉錄或翻譯，從而評價該基因的功能。通過將特定的siRNA導入細胞，抑制目標基因的表達，觀察細胞表型的變化，能夠深入了解基因在細胞生長、分化、代謝等過程中的作用。在基因治療方面，RNAi技術可用于沉默體內特定基因的表達，從而實現治療目的。在抗病毒治療中，針對病毒基因設計的siRNA能夠有效抑制病毒的復制和傳播；在神經系統疾病的治療中，RNAi療法也展現出潛力，如針對某些神經退行性疾病相關基因的沉默，有望延緩疾病的進展。在腫瘤研究領域，RNAi技術同樣發揮著重要作用。一方面，它可以通過抑制癌基因、生長因子及其受體的過表達來抑制細胞生長。如在乳腺癌研究中，通過RNAi技術抑制HER-2基因的表達，能夠顯著抑制乳腺癌細胞的增殖和遷移能力。另一方面，RNAi技術還可通過干擾細胞周期蛋白及其相關基因的表達來抑制細胞增殖。研究發現，干擾細胞周期蛋白D1的表達，能夠使腫瘤細胞停滯在G1期，從而抑制腫瘤細胞的增殖。在卵巢癌研究中，RNAi技術也有諸多應用實例。有研究利用RNAi技術沉默survivin基因，有效抑制了卵巢癌細胞株SKOV3/ADM中survivin基因的表達，增加了細胞對化療藥物紫杉醇的敏感性，顯著上調了細胞的凋亡活性。還有研究通過RNAi干擾ERCC1基因，明顯抑制了卵巢癌耐藥細胞系COC1/DDP內ERCC1基因mRNA和蛋白的表達，增加了細胞對化療藥順鉑的敏感性。這些研究表明，RNAi技術在卵巢癌的治療研究中具有重要價值，為卵巢癌的治療提供了新的策略和方法。2.2PARP-1基因結構與功能聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1），又簡寫為ADPRT，全稱poly(ADP-ribose)polymerasefamily,member1，中文名為多聚ADP核糖轉移酶。PARP-1基因位于第1號染色體1q41-q42位置，全長47,399bp，共有25個外顯子，mRNA長3,861nt，編碼由1,014個氨基酸殘基組成的蛋白質。PARP-1主要存在于真核生物中，在染色質結構和轉錄調控中影響特定信號通路的過程。其具有三個主要結構領域：一是DNA結合片段，其中包含兩個鋅指基序參與的DNA鏈斷裂識別和核定位信號。當DNA出現斷裂時，PARP-1能夠憑借這一結構域快速識別并結合到斷裂處，為后續的修復過程奠定基礎。二是中央自動修改域，包括一個BRAC1的羧基端（DNA修復和細胞信號轉導）并有Capase-3酶切功能。這一結構域在PARP-1的自我調節以及與其他蛋白的相互作用中發揮著重要作用，參與DNA修復和細胞信號轉導等過程。三是C端催化域，包括一個富含色氨酸-甘氨酸-精氨酸域（WGR）、α螺旋結構域（HD）和ADP核糖轉移酶結構域（ART）。催化域是PARP-1發揮其催化功能的關鍵區域，負責催化煙酰胺腺嘌呤二核苷酸轉化為煙酰胺和多聚ADP-核糖，從而啟動一系列的生物學反應。PARP-1基因編碼的多聚ADP核糖轉移酶，通過聚ADP核糖基化反應修正多種核蛋白基因突變，這種修正以DNA為基礎，參與多種重要的細胞活動，例如分化、增殖、腫瘤轉移等，同時也參與分子水平的活動，例如修復DNA受損等。在眾多功能中，DNA修復是PARP-1最為重要的功能之一。PARP-1通常用于修補DNA的單個堿基斷裂，這是一種常見的自發性DNA損傷。單個堿基斷開在細胞中時常發生，在未修復時對細胞并無大害。然而，當這些斷裂的堿基作為DNA副本被轉錄或者復制時就會破壞和損傷DNA。當DNA發生單鏈斷裂時，PARP-1能迅速被激活，它會與DNA鏈斷裂處相結合，啟動堿基切除修復（BER）通路。在這一過程中，PARP-1催化煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解為煙酰胺和ADP-核糖，ADP-核糖會聚合形成長鏈并結合到PARP-1自身以及其他參與DNA修復的蛋白質上，通過這種聚ADP核糖基化修飾，招募并激活一系列參與BER通路的蛋白，如XRCC1、DNA聚合酶-ε、DNA連接酶III等，協同完成DNA的修復過程，從而維持基因組的完整性。除了參與DNA修復，PARP-1還在抑制受損DNA的轉錄以及參與部分基因的轉錄調控等方面發揮作用。當DNA受損時，PARP-1的激活能抑制轉錄因子與DNA單鏈的結合，從而防止受損DNA被錯誤轉錄，避免產生異常的RNA和蛋白質。在基因轉錄調控方面，PARP-1可以與一些轉錄因子相互作用，調節基因的轉錄活性，影響細胞的生長、分化等過程。研究表明，PARP-1與p53、NF-κB等轉錄因子相互作用，參與細胞周期調控、細胞凋亡等重要生物學過程的基因轉錄調控。在細胞受到應激或損傷時，PARP-1的激活狀態改變會影響這些轉錄因子的活性，進而調控相關基因的表達，以維持細胞的正常生理功能或促使細胞發生相應的適應性變化。2.3PARP-1基因與卵巢癌的關聯研究進展PARP-1基因與卵巢癌的發生、發展及耐藥性密切相關，在卵巢癌的研究領域中，眾多學者對PARP-1基因在卵巢癌中的作用機制展開了廣泛而深入的研究。在卵巢癌的發生發展進程中，PARP-1基因發揮著關鍵作用。一方面，PARP-1可通過促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養和氧氣，從而支持腫瘤的生長和轉移。有研究表明，PARP-1能夠通過PARP-1-缺氧誘導因子-血管內皮生長因子通路，促進腫瘤血管的生成，在缺氧反應和腫瘤血管生成中起重要作用。在缺氧條件下，PARP-1被激活，通過一系列信號轉導，上調缺氧誘導因子的表達，進而促進血管內皮生長因子的分泌，刺激腫瘤血管的新生，為腫瘤細胞的增殖和轉移創造有利條件。另一方面，PARP-1還能與Snail啟動子結合，刺激Snail和波形蛋白共表達，從而促進腫瘤細胞的上皮-間質轉化，增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力。上皮-間質轉化過程使得上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質細胞的特性，增強了腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，PARP-1在這一過程中起到了重要的調控作用。相關研究還發現，PARP-1的高表達與卵巢癌患者的不良預后顯著相關，PARP-1表達水平越高，患者的生存率越低，復發風險越高。PARP-1基因與卵巢癌耐藥性之間存在著緊密的聯系。在耐藥的卵巢癌細胞中，PARP-1的活性明顯增強，這使得腫瘤細胞能夠更有效地修復因化療藥物導致的DNA損傷，從而對化療藥物產生抗性。有研究通過對順鉑耐藥的卵巢癌細胞系進行分析，發現其中PARP-1的表達水平和活性均顯著高于順鉑敏感的細胞系，且抑制PARP-1的活性后，耐藥細胞對順鉑的敏感性明顯提高。這表明PARP-1在卵巢癌耐藥機制中扮演著重要角色，其高表達和活性增強可能是導致卵巢癌耐藥的關鍵因素之一。進一步的研究表明，PARP-1參與了多種DNA修復途徑，在卵巢癌耐藥細胞中，PARP-1通過激活堿基切除修復等通路，增強了DNA受損后的修復能力，使得腫瘤細胞能夠在化療藥物的作用下存活并繼續增殖。基于PARP-1基因與卵巢癌的緊密關聯，PARP-1抑制劑的研發成為卵巢癌治療領域的研究熱點。目前，多種PARP-1抑制劑已進入臨床試驗階段，并在部分卵巢癌患者中取得了顯著的療效。這些抑制劑能夠特異性地抑制PARP-1的活性，阻斷其參與的DNA修復過程，從而使腫瘤細胞對化療藥物更加敏感，提高治療效果。研究顯示，對于攜帶BRCA突變的卵巢癌患者，PARP-1抑制劑單藥治療即可取得較好的療效，顯著延長患者的無進展生存期。然而，部分患者在使用PARP-1抑制劑后會出現耐藥現象，這可能與PARP-1基因的突變、其他DNA修復途徑的代償性激活等因素有關。三、實驗設計與方法3.1實驗材料準備3.1.1細胞系選擇本研究選用上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13及其親本的上皮性卵巢癌順鉑敏感細胞OV2008。卵巢癌順鉑耐藥細胞C13對順鉑具有高度耐藥性，能夠在含有高濃度順鉑的培養基中存活和增殖，而其親本細胞OV2008對順鉑較為敏感，在較低濃度順鉑作用下就會受到明顯的生長抑制。選擇這兩種細胞系進行研究，能夠直觀地對比PARP-1在耐藥細胞和敏感細胞中的表達差異，以及RNA干擾抑制PARP-1基因表達后對耐藥細胞和敏感細胞增殖及耐藥性的不同影響，為深入研究卵巢癌耐藥機制提供理想的細胞模型。通過對這兩種細胞系的研究，有望揭示PARP-1基因在卵巢癌順鉑耐藥過程中的關鍵作用，為開發新的卵巢癌治療策略提供有力的實驗依據。3.1.2主要試劑與儀器實驗所需的主要試劑包括：PARP1-siRNA，用于特異性干擾PARP-1基因的表達，由專業生物技術公司合成，序列經過優化設計，以確保高效的干擾效果和較低的脫靶效應。順鉑，作為卵巢癌化療的常用藥物，用于處理細胞，檢測細胞對其敏感性的變化，購自知名醫藥公司，純度和質量符合實驗要求。DMEM培養基，為細胞提供生長所需的營養物質，含有多種氨基酸、維生素、礦物質等成分，購自專業細胞培養試劑供應商。胎牛血清，富含多種生長因子和營養成分，能夠促進細胞的生長和增殖，與DMEM培養基按一定比例混合使用，來源可靠，經過嚴格的質量檢測。胰蛋白酶，用于消化細胞，使細胞從培養瓶壁上脫離，便于進行傳代培養和實驗操作，為細胞培養級別的試劑。RNA提取試劑盒，用于從細胞中提取總RNA，采用先進的提取技術，能夠高效、快速地提取高質量的RNA，購自專業生物技術公司。反轉錄試劑盒，將提取的RNA反轉錄為cDNA，以便后續進行實時熒光定量PCR檢測，具有高反轉錄效率和準確性。實時熒光定量PCR試劑盒，用于檢測基因的表達水平，采用熒光染料法或探針法，能夠精確地定量目標基因的表達量。MTT試劑，用于檢測細胞的增殖活性，其原理是活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將MTT還原為不溶性的藍紫色結晶甲臜，甲臜的生成量與活細胞數量成正比。DMSO，用于溶解MTT還原產物甲臜，以便在酶標儀上進行吸光度檢測。主要儀器包括：PCR儀，用于進行聚合酶鏈式反應，擴增目標基因，具有精確的溫度控制和快速的升降溫速率，能夠保證PCR反應的高效性和準確性。實時熒光定量PCR儀，用于實時監測PCR反應過程中熒光信號的變化，從而定量分析基因的表達水平，具有高靈敏度和準確性。酶標儀，用于檢測MTT實驗中細胞培養板各孔的吸光度值，以此評估細胞的增殖活性，具有高精度的光學檢測系統和穩定的性能。離心機，用于離心細胞和分離核酸等生物分子，能夠提供不同的離心力和轉速，滿足實驗的各種需求。超凈工作臺，為細胞培養和實驗操作提供無菌環境，采用高效空氣過濾器，能夠有效過濾空氣中的微生物和雜質。二氧化碳培養箱，為細胞培養提供適宜的溫度、濕度和二氧化碳濃度，模擬細胞在體內的生長環境，保證細胞的正常生長和增殖。顯微鏡，用于觀察細胞的形態和生長狀態，配備高分辨率的鏡頭和成像系統，能夠清晰地觀察細胞的細節。三、實驗設計與方法3.2實驗方法與步驟3.2.1細胞培養與處理上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*及其親本的上皮性卵巢癌順鉑敏感細胞OV2008均培養于含10%胎牛血清的DMEM培養基中，置于37℃、5%CO?的二氧化碳培養箱中培養。細胞生長至對數期時進行傳代，傳代時，先用PBS沖洗細胞2次，然后加入適量0.25%胰蛋白酶進行消化，待細胞變圓并脫離瓶壁后，加入含10%胎牛血清的DMEM培養基終止消化，輕輕吹打細胞，使其形成單細胞懸液，按1:3的比例接種于新的培養瓶中繼續培養。對于細胞的處理，將處于對數生長期的C13*和OV2008細胞分別接種于6孔板中，每孔接種密度為5×10?個細胞，培養24小時，待細胞貼壁后，進行分組處理。實驗組加入終濃度為50μmol/L的順鉑溶液，對照組加入等體積的PBS溶液，繼續培養48小時。在藥物處理過程中，密切觀察細胞的形態變化和生長狀態，如細胞的貼壁情況、形態改變、增殖速度等。藥物處理結束后，收集細胞，用于后續實驗。對于需要轉染的細胞，在轉染前24小時，將細胞接種于6孔板中，每孔接種密度為3×10?個細胞，使細胞在轉染時達到50%-70%的融合度。轉染時，按照脂質體轉染試劑的說明書進行操作，將構建好的含PARP1-siRNA慢病毒載體與脂質體混合，室溫孵育20分鐘，然后將混合液加入到細胞培養孔中，輕輕混勻，繼續培養。轉染6小時后，更換為新鮮的含10%胎牛血清的DMEM培養基，繼續培養至所需時間。3.2.2RNA干擾實驗構建含PARP1-siRNA慢病毒載體時，首先根據GenBank中PARP-1基因的序列，設計針對PARP-1基因的小干擾RNA（siRNA）序列，同時設計陰性對照siRNA序列。將設計好的siRNA序列和陰性對照siRNA序列分別克隆到慢病毒表達載體中，轉化大腸桿菌感受態細胞，挑取單克隆菌落進行培養，提取質粒進行測序鑒定，確保插入的siRNA序列正確無誤。將測序正確的含PARP1-siRNA慢病毒載體和陰性對照慢病毒載體分別與包裝質粒共轉染293T細胞，進行慢病毒的包裝和擴增。收集培養上清液，通過超速離心法濃縮慢病毒，測定慢病毒滴度。轉染卵巢癌細胞時，將處于對數生長期的上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*接種于6孔板中，每孔接種密度為3×10?個細胞，培養24小時，待細胞貼壁后，進行轉染。按照感染復數（MOI）為50的比例，將含PARP1-siRNA慢病毒載體或陰性對照慢病毒載體加入到細胞培養孔中，同時加入終濃度為8μg/mL的聚凝胺，輕輕混勻，繼續培養。轉染6小時后，更換為新鮮的含10%胎牛血清的DMEM培養基，繼續培養48小時。轉染結束后，收集細胞，通過實時熒光定量PCR和Western印跡法檢測PARP-1基因和蛋白的表達水平，驗證干擾效果。同時，設置未轉染細胞組作為空白對照，用于對比分析。3.2.3檢測指標與方法采用MTT法檢測細胞增殖。將經過不同處理的卵巢癌細胞（C13*和OV2008）以每孔5×103個細胞的密度接種于96孔板中，每組設置5個復孔，培養24小時后，加入不同濃度的順鉑（0、1、5、10、20、40μmol/L），繼續培養48小時。培養結束前4小時，每孔加入20μLMTT溶液（5mg/mL），繼續孵育。孵育結束后，小心吸棄孔內培養上清液，每孔加入150μLDMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分溶解。選擇490nm波長，在酶標儀上測定各孔的光吸收值（OD值），記錄結果。以順鉑濃度為橫坐標，細胞存活率為縱坐標繪制細胞生長曲線，計算順鉑對細胞的半數抑制濃度（IC50），以此評估細胞對順鉑的敏感性。細胞存活率=（實驗組OD值/對照組OD值）×100%。采用實時熒光定量PCR檢測基因表達。使用RNA提取試劑盒從細胞中提取總RNA，按照試劑盒說明書操作。提取的RNA經紫外分光光度計測定濃度和純度，確保RNA質量符合要求。取1μg總RNA，使用反轉錄試劑盒將其反轉錄為cDNA。以cDNA為模板，使用實時熒光定量PCR試劑盒進行擴增，反應體系為20μL，包括10μLSYBRGreenMasterMix、上下游引物各0.5μL、cDNA模板1μL，其余用ddH?O補足。反應條件為：95℃預變性30秒，然后95℃變性5秒、60℃退火30秒，共40個循環。以β-actin作為內參基因，采用2^-ΔΔCt法計算目的基因PARP-1的相對表達量。采用Western印跡法檢測蛋白表達。收集細胞，加入適量RIPA裂解液，冰上裂解30分鐘，然后12000rpm離心15分鐘，取上清液作為蛋白樣品。采用BCA法測定蛋白濃度，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸5分鐘使蛋白變性。取30μg蛋白樣品進行SDS-PAGE電泳，電泳結束后將蛋白轉移至PVDF膜上。將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉1小時，然后加入一抗（抗PARP-1抗體和抗β-actin抗體），4℃孵育過夜。次日，用TBST洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，然后加入二抗，室溫孵育1小時。再次用TBST洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，最后用化學發光底物顯色，在凝膠成像系統下曝光成像。使用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以β-actin為內參，計算PARP-1蛋白的相對表達量。四、實驗結果分析4.1PARP-1基因在卵巢癌細胞中的表達差異采用實時熒光定量PCR和Western印跡法，對順鉑耐藥細胞C13和親本細胞OV2008中PARP-1基因mRNA及蛋白表達進行檢測，結果顯示，C13細胞中PARP-1mRNA的表達量顯著高于OV2008細胞，以OV2008細胞中PARP-1mRNA表達量為參照，C13細胞中PARP-1mRNA的表達量是其（2.12±0.97）倍。在蛋白表達水平上，C13細胞中PARP-1蛋白的表達量同樣明顯高于OV2008細胞，C13細胞中PARP-1蛋白的表達量為OV2008細胞的（1.89±0.23）倍。這表明PARP-1基因在順鉑耐藥的C13細胞中呈現高表達狀態，而在順鉑敏感的OV2008細胞中表達相對較低。為進一步探究不同濃度順鉑作用對PARP-1基因表達的影響，將C13和OV2008細胞分別用不同濃度（0、1、5、10、20μmol/L）的順鉑處理24小時后，檢測PARP-1基因的表達變化。結果發現，隨著順鉑濃度的增加，OV2008細胞中PARP-1mRNA和蛋白的表達量逐漸下降。當順鉑濃度為10μmol/L時，OV2008細胞中PARP-1蛋白含量明顯下調（P＜0.05）。而在C13細胞中，不同濃度順鉑作用24小時后，PARP-1mRNA和蛋白的表達量均無明顯變化（P＞0.05）。這說明順鉑能夠抑制OV2008細胞中PARP-1基因的表達，而對C13細胞中PARP-1基因的表達無顯著影響。這種表達差異可能與卵巢癌細胞對順鉑的耐藥性密切相關，高表達的PARP-1可能賦予了C13細胞更強的DNA修復能力，使其能夠抵抗順鉑誘導的DNA損傷，從而產生耐藥性。4.2RNA干擾對PARP-1基因表達的抑制效果將構建的含PARP1-siRNA慢病毒載體轉染上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*，48小時后，采用實時熒光定量PCR和Western印跡法檢測PARP-1基因mRNA及蛋白的表達水平。結果顯示，與未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組相比，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組中PARP-1基因mRNA的表達量顯著下降。以未轉染組PARP-1基因mRNA表達量為參照，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組中PARP-1基因mRNA的表達量下降了（71.23±5.41）%。在蛋白表達水平上，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組中PARP-1蛋白的表達量同樣明顯降低，與未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組相比，下降了（73.84±3.78）%。這表明PARP1-siRNA能夠有效地抑制C13*細胞中PARP-1基因的表達，在轉錄和翻譯水平均取得了顯著的干擾效果。通過RNA干擾技術成功下調PARP-1基因的表達，為進一步研究其對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響奠定了堅實基礎。4.3RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖的影響通過MTT法檢測轉染后細胞在順鉑作用下生存率的改變及對順鉑敏感性的變化，結果顯示，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體的C13細胞在不同濃度順鉑作用下的生存率顯著低于未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組。當順鉑濃度為10μmol/L時，未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組C13細胞的生存率分別為（68.32±4.56）%和（65.89±3.78）%，而轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組C13細胞的生存率僅為（32.56±2.13）%。以順鉑濃度為橫坐標，細胞存活率為縱坐標繪制細胞生長曲線，計算得到轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組C13細胞對順鉑的半數抑制濃度（IC50）為（8.56±1.02）μmol/L，與未轉染組的（81.34±8.97）μmol/L和轉染陰性對照慢病毒載體組的（79.56±7.89）μmol/L相比，顯著降低，下降了（89.77±10.06）%。這表明RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，卵巢癌順鉑耐藥細胞C13對順鉑的敏感性顯著增強，順鉑對細胞的增殖抑制作用明顯提高。在相同順鉑濃度下，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體的C13細胞生長受到明顯抑制，細胞增殖速度減緩，呈現出明顯的劑量-效應關系，即隨著順鉑濃度的增加，細胞生存率逐漸降低。4.4RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞耐藥性的影響通過MTT法檢測轉染后細胞對順鉑的敏感性變化，結果顯示，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體的C13細胞對順鉑的敏感性顯著增強。在相同順鉑濃度下，轉染組細胞的生存率明顯低于未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組。以順鉑濃度為橫坐標，細胞存活率為縱坐標繪制細胞生長曲線，計算得到轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組C13細胞對順鉑的半數抑制濃度（IC50）為（8.56±1.02）μmol/L，與未轉染組的（81.34±8.97）μmol/L和轉染陰性對照慢病毒載體組的（79.56±7.89）μmol/L相比，顯著降低，下降了（89.77±10.06）%。這表明RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*對順鉑的耐藥性明顯降低，細胞對順鉑的殺傷作用更加敏感。這種耐藥性的降低可能與PARP-1基因表達下調后，細胞內DNA修復能力下降有關，使得順鉑能夠更有效地誘導腫瘤細胞凋亡，從而抑制腫瘤細胞的生長。五、結果討論5.1RNA干擾抑制PARP-1基因表達影響卵巢癌細胞增殖的機制探討本研究結果顯示，RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*對順鉑的敏感性顯著增強，順鉑對細胞的增殖抑制作用明顯提高。這一現象背后蘊含著復雜的分子機制，與PARP-1在細胞內的多種生物學功能密切相關。從DNA修復角度來看，PARP-1在維持基因組完整性方面發揮著關鍵作用，其主要參與堿基切除修復（BER）通路。當DNA發生單鏈斷裂時，PARP-1能迅速識別并結合到斷裂處，催化煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解為煙酰胺和ADP-核糖，ADP-核糖聚合形成長鏈并結合到PARP-1自身以及其他參與DNA修復的蛋白質上，通過聚ADP核糖基化修飾，招募并激活一系列參與BER通路的蛋白，如XRCC1、DNA聚合酶-ε、DNA連接酶III等，協同完成DNA的修復過程。在卵巢癌順鉑耐藥細胞C13中，高表達的PARP-1使得細胞具備較強的DNA修復能力。順鉑作為一種化療藥物，其作用機制主要是與DNA結合，形成鉑-DNA加合物，導致DNA損傷，進而誘導腫瘤細胞凋亡。然而，由于C13細胞中PARP-1高表達，當順鉑引起DNA單鏈斷裂時，PARP-1能夠快速啟動BER通路，對受損DNA進行有效修復，使得腫瘤細胞能夠抵抗順鉑的殺傷作用，繼續存活和增殖，從而表現出對順鉑的耐藥性。當通過RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，PARP-1蛋白水平顯著下降，其參與的DNA修復功能受到抑制。在順鉑作用下，DNA損傷無法得到及時有效的修復，大量的DNA損傷積累，超過了細胞自身的修復能力，從而導致細胞凋亡增加，對順鉑的敏感性增強，順鉑對細胞的增殖抑制作用得以提高。在細胞周期調控方面，PARP-1也參與其中，對細胞的增殖和分裂產生影響。細胞周期的正常進行受到多種因素的嚴格調控，包括細胞周期蛋白、細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）以及相關的信號通路等。研究表明，PARP-1可以通過與一些細胞周期調控蛋白相互作用，影響細胞周期的進程。在卵巢癌順鉑耐藥細胞C13中，PARP-1的高表達可能會干擾細胞周期的正常調控。具體來說，PARP-1可能會促進細胞從G1期向S期的過渡，加速細胞的增殖。這可能是因為PARP-1通過調節相關細胞周期蛋白和CDK的表達或活性，使得細胞周期進程加快，腫瘤細胞能夠快速增殖。當RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，細胞周期調控失衡，細胞增殖受到抑制。一方面，細胞從G1期向S期的過渡受阻，導致細胞在G1期停滯，進入S期進行DNA合成的細胞數量減少，從而抑制了細胞的增殖。另一方面，由于PARP-1表達下調，其對細胞周期調控蛋白和信號通路的異常調節作用減弱，使得細胞周期恢復到相對正常的狀態，腫瘤細胞的增殖速度減緩。這種細胞周期的改變，使得卵巢癌順鉑耐藥細胞C13對順鉑的敏感性增強，順鉑能夠更有效地抑制細胞的增殖。5.2RNA干擾抑制PARP-1基因表達影響卵巢癌細胞耐藥性的機制分析卵巢癌耐藥性是臨床治療中面臨的一大難題，嚴重影響患者的預后。本研究通過RNA干擾技術抑制PARP-1基因表達，顯著降低了卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*對順鉑的耐藥性，這一現象背后涉及多種復雜的分子機制。PARP-1在DNA損傷修復通路中起著核心作用，其主要參與堿基切除修復（BER）途徑。在卵巢癌順鉑耐藥細胞C13中，高表達的PARP-1使得細胞具備強大的DNA修復能力。順鉑作為一種常用的化療藥物，其主要作用機制是與DNA結合，形成鉑-DNA加合物，導致DNA損傷，進而誘導腫瘤細胞凋亡。然而，當順鉑引起DNA單鏈斷裂時，C13細胞中的PARP-1能夠迅速識別并結合到斷裂處，通過催化煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解為煙酰胺和ADP-核糖，使ADP-核糖聚合形成長鏈并結合到PARP-1自身以及其他參與DNA修復的蛋白質上，通過聚ADP核糖基化修飾，招募并激活一系列參與BER通路的蛋白，如XRCC1、DNA聚合酶-ε、DNA連接酶III等，協同完成DNA的修復過程，從而使腫瘤細胞能夠抵抗順鉑的殺傷作用，表現出對順鉑的耐藥性。當通過RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，PARP-1蛋白水平顯著下降，其參與的DNA修復功能受到抑制。在順鉑作用下，DNA損傷無法得到及時有效的修復，大量的DNA損傷積累，超過了細胞自身的修復能力，從而導致細胞凋亡增加，對順鉑的耐藥性降低。PARP-1還與其他DNA修復途徑存在密切關聯，進一步影響卵巢癌細胞的耐藥性。在同源重組修復（HRR）途徑中，PARP-1雖然不是直接參與HRR過程的關鍵蛋白，但它可以通過與HRR相關蛋白相互作用，影響HRR的效率。研究表明，PARP-1能夠與BRCA1、BRCA2等HRR關鍵蛋白相互作用，調節它們在DNA損傷修復中的功能。在卵巢癌耐藥細胞中，PARP-1可能通過促進HRR途徑的活化，增強細胞對DNA雙鏈斷裂的修復能力，從而提高細胞對化療藥物的耐藥性。當PARP-1基因表達被抑制后，PARP-1與HRR相關蛋白的相互作用受到干擾，HRR途徑的效率降低，使得細胞在化療藥物作用下的DNA損傷難以得到有效修復，從而增加了細胞對化療藥物的敏感性，降低了耐藥性。除了DNA修復途徑，PARP-1還可能通過影響細胞凋亡信號通路來調節卵巢癌細胞的耐藥性。細胞凋亡是一種程序性細胞死亡方式，在腫瘤的發生發展和治療過程中起著重要作用。PARP-1可以通過多種方式影響細胞凋亡信號通路。一方面，PARP-1的過度激活會導致NAD+大量消耗，使細胞能量代謝失衡，從而激活細胞凋亡信號通路。然而，在卵巢癌耐藥細胞中，PARP-1可能通過與凋亡相關蛋白相互作用，抑制細胞凋亡的發生。例如，PARP-1可以與Bcl-2家族蛋白相互作用，調節線粒體膜電位，抑制細胞色素C的釋放，從而抑制凋亡小體的形成和caspase級聯反應的激活，使腫瘤細胞能夠逃避凋亡。當RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，PARP-1對細胞凋亡信號通路的抑制作用減弱，細胞更容易受到化療藥物誘導的凋亡信號的影響，從而促進細胞凋亡，降低耐藥性。另一方面，PARP-1還可能通過調節p53等凋亡相關轉錄因子的活性，影響細胞凋亡相關基因的表達，進而調節細胞凋亡和耐藥性。5.3研究結果與現有文獻的對比與分析本研究通過RNA干擾抑制PARP-1基因表達，對卵巢癌細胞增殖及耐藥性產生了顯著影響，將本研究結果與其他相關研究進行對比分析，有助于進一步深入理解PARP-1在卵巢癌中的作用機制。在PARP-1基因在卵巢癌細胞中的表達方面，本研究發現順鉑耐藥細胞C13*中PARP-1基因mRNA及蛋白表達顯著高于順鉑敏感細胞OV2008，這與眾多現有研究結果一致。有研究檢測了卵巢癌順鉑耐藥細胞株SKOV3/DDP和敏感細胞株SKOV3中PARP-1的表達，結果顯示SKOV3/DDP細胞中PARP-1的表達明顯高于SKOV3細胞。另一項研究對不同卵巢癌細胞系進行分析，同樣發現耐藥細胞中PARP-1的表達水平顯著高于敏感細胞。這些研究均表明，PARP-1在卵巢癌耐藥細胞中高表達，其高表達可能與卵巢癌耐藥性的產生密切相關。在RNA干擾對PARP-1基因表達的抑制效果方面，本研究成功構建含PARP1-siRNA的慢病毒載體并轉染上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*，顯著降低了PARP-1基因mRNA及蛋白表達水平。這與相關研究中利用RNA干擾技術抑制PARP-1基因表達的結果相符。有研究設計并合成針對PARP-1基因的siRNA，轉染卵巢癌細胞，結果顯示PARP-1基因和蛋白表達水平明顯下降。這些研究共同表明，RNA干擾技術能夠有效地抑制卵巢癌細胞中PARP-1基因的表達，為進一步研究PARP-1基因功能及卵巢癌治療提供了有力的技術手段。在RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響方面，本研究結果顯示，抑制PARP-1基因表達后，卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*對順鉑的敏感性顯著增強，細胞增殖受到明顯抑制。現有文獻中也有類似報道，有研究通過抑制PARP-1基因表達，發現卵巢癌細胞對紫杉醇的敏感性增強，細胞增殖受到抑制。還有研究表明，抑制PARP-1基因表達可逆轉卵巢癌耐藥細胞對順鉑的耐藥性，使細胞對順鉑的殺傷作用更加敏感。這些研究結果的一致性進一步證實了抑制PARP-1基因表達在增強卵巢癌細胞對化療藥物敏感性、抑制細胞增殖方面的重要作用。然而，不同研究之間也存在一些差異。在研究方法上，本研究采用慢病毒載體轉染的方式進行RNA干擾，相比一些研究中使用的脂質體轉染等方法，具有更高的轉染效率和穩定性。在細胞模型的選擇上，不同研究使用的卵巢癌細胞系有所不同，這可能導致實驗結果在具體數值上存在一定差異。此外，不同研究中干擾的PARP-1基因位點、干擾時間等因素也可能對實驗結果產生影響。通過與現有文獻的對比分析，本研究結果進一步驗證了PARP-1基因在卵巢癌耐藥中的重要作用，以及RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響，同時也為卵巢癌的治療研究提供了更多的參考依據和研究思路。未來的研究可以在本研究的基礎上，進一步優化實驗方法，深入探討PARP-1基因在卵巢癌中的作用機制，為卵巢癌的臨床治療提供更有效的策略。5.4研究的局限性與展望本研究在探究RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。在實驗設計方面，本研究僅選用了上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*及其親本的上皮性卵巢癌順鉑敏感細胞OV2008這兩種細胞系進行研究，細胞模型相對單一。卵巢癌具有高度的異質性，不同細胞系的生物學特性和基因表達譜存在差異，單一的細胞系研究可能無法全面反映PARP-1基因在卵巢癌中的作用機制。未來的研究可以納入更多不同組織學類型、不同分子亞型的卵巢癌細胞系，以及患者來源的原代腫瘤細胞，進行多維度的研究，以更全面地揭示PARP-1基因與卵巢癌增殖及耐藥性的關系。此外，本研究主要集中在體外細胞實驗，缺乏體內動物實驗的驗證。細胞實驗雖然能夠在一定程度上模擬細胞的生物學行為，但與體內環境存在差異。動物實驗可以更真實地反映腫瘤在體內的生長、轉移以及對治療的反應。未來應開展體內動物實驗，構建卵巢癌動物模型，進一步驗證RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響，為臨床應用提供更有力的實驗依據。在樣本數量方面，本研究中各實驗組的樣本數量相對較少，這可能會影響實驗結果的可靠性和統計學效力。在后續研究中，可以增加樣本數量，進行多中心、大樣本的研究，以提高實驗結果的準確性和普遍性。同時，對實驗結果進行更深入的統計學分析，采用更復雜的統計模型，控制潛在的混雜因素，進一步明確RNA干擾抑制PARP-1基因表達與卵巢癌細胞增殖及耐藥性之間的關系。展望未來，隨著對PARP-1基因研究的不斷深入，有望開發出更加高效、特異性的PARP-1抑制劑，為卵巢癌的治療提供新的選擇。結合基因檢測技術，實現卵巢癌的精準治療，根據患者的基因特征和腫瘤的分子分型，選擇合適的治療方案，提高治療效果，減少不良反應。此外，將RNA干擾技術與其他治療方法，如化療、免疫治療、靶向治療等聯合應用，可能會產生協同效應，進一步提高卵巢癌的治療效果。未來的研究可以深入探討這些聯合治療方案的作用機制和最佳組合方式，為卵巢癌的臨床治療提供更多的策略和思路。還可以進一步研究PARP-1基因與其他基因或信號通路之間的相互作用，揭示卵巢癌發生、發展及耐藥的復雜分子網絡，為開發新的治療靶點和藥物提供理論基礎。六、結論與建議6.1研究主要結論總結本研究通過一系列實驗，深入探究了RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響，得出以下主要結論：在PARP-1基因在卵巢癌細胞中的表達差異方面，研究發現順鉑耐藥細胞C13中PARP-1基因mRNA及蛋白表達顯著高于順鉑敏感細胞OV2008。以OV2008細胞中PARP-1mRNA表達量為參照，C13細胞中PARP-1mRNA的表達量是其（2.12±0.97）倍；在蛋白表達水平上，C13細胞中PARP-1蛋白的表達量為OV2008細胞的（1.89±0.23）倍。不同濃度順鉑作用對PARP-1基因表達的影響實驗表明，順鉑能夠抑制OV2008細胞中PARP-1基因的表達，當順鉑濃度為10μmol/L時，OV2008細胞中PARP-1蛋白含量明顯下調（P＜0.05），而對C13細胞中PARP-1基因的表達無顯著影響（P＞0.05）。這表明PARP-1基因的高表達可能與卵巢癌細胞對順鉑的耐藥性密切相關。在RNA干擾對PARP-1基因表達的抑制效果上，成功構建的含PARP1-siRNA慢病毒載體轉染上皮性卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*后，在轉錄和翻譯水平均取得了顯著的干擾效果。與未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組相比，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組中PARP-1基因mRNA的表達量下降了（71.23±5.41）%，PARP-1蛋白的表達量下降了（73.84±3.78）%。這為進一步研究PARP-1基因表達下調對卵巢癌細胞的影響奠定了基礎。關于RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖的影響，MTT法檢測結果顯示，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體的C13細胞在不同濃度順鉑作用下的生存率顯著低于未轉染組和轉染陰性對照慢病毒載體組。計算得到轉染PARP1-siRNA慢病毒載體組C13細胞對順鉑的半數抑制濃度（IC50）為（8.56±1.02）μmol/L，與未轉染組的（81.34±8.97）μmol/L和轉染陰性對照慢病毒載體組的（79.56±7.89）μmol/L相比，顯著降低，下降了（89.77±10.06）%。這表明RNA干擾抑制PARP-1基因表達后，卵巢癌順鉑耐藥細胞C13*對順鉑的敏感性顯著增強，順鉑對細胞的增殖抑制作用明顯提高。在RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞耐藥性的影響方面，同樣通過MTT法檢測發現，轉染PARP1-siRNA慢病毒載體的C13細胞對順鉑的敏感性顯著增強，耐藥性明顯降低。轉染組細胞在相同順鉑濃度下的生存率明顯低于