靶向二代測序在感染性疾病診療中的規(guī)范化應(yīng)用專家共識（2025）解讀202X匯報(bào)人：XXX2025.5目錄1.4.2.5.3.感染性疾病診療現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)靶向二代測序技術(shù)的優(yōu)勢與原理專家共識中的臨床應(yīng)用場景專家共識中的未來發(fā)展方向?qū)＜夜沧R中的全流程規(guī)范感染性疾病診療現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)01202X感染性疾病仍是全球重要公共衛(wèi)生威脅，如結(jié)核病每年導(dǎo)致約130萬人死亡，2022年全球報(bào)告約1060萬新病例。2022年全球瘧疾約2.49億病例，60.8萬人死亡，主要集中在非洲地區(qū)。感染性疾病全球負(fù)擔(dān)傳統(tǒng)病原體檢測方法如涂片鏡檢、培養(yǎng)等在臨床檢測中存在局限性，如培養(yǎng)陽性率低。傳統(tǒng)檢測方法在檢測范圍、靈敏度和時(shí)效性上存在不足，難以滿足臨床需求。傳統(tǒng)檢測方法的局限性耐藥性問題日益嚴(yán)峻，如2022年耐多藥結(jié)核病治療覆蓋率僅2/5。耐藥性問題導(dǎo)致治療難度增加，給臨床診療帶來巨大挑戰(zhàn)。耐藥性問題的加劇感染性疾病對公共衛(wèi)生的影響靶向二代測序技術(shù)的優(yōu)勢與原理02202X高靈敏度與特異性tNGS通過特異性引物或探針靶向富集目標(biāo)病原體或基因，靈敏度高，可檢測低載量病原體。在血流感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等樣本中，tNGS靈敏度可達(dá)70.8%-95.0%。成本效益與快速檢測tNGS測序量僅為mNGS的百分之一，成本低，且檢測周期短，平均15小時(shí)可出結(jié)果。相比傳統(tǒng)培養(yǎng)法（3-7天）和mNGS（平均24小時(shí)），tNGS能更快提供診斷信息。同時(shí)檢測DNA和RNA病原體tNGS可同時(shí)檢測DNA和RNA病原體，如在呼吸道感染中能同時(shí)檢測病毒和細(xì)菌。這一特性使其在檢測如結(jié)核分枝桿菌等RNA病毒時(shí)更具優(yōu)勢。tNGS技術(shù)的核心優(yōu)勢tNGS基于多重PCR特異擴(kuò)增或探針捕獲技術(shù)，富集特定病原體核酸。通過設(shè)計(jì)特異性引物或探針，可靶向檢測臨床標(biāo)本中的病原體及其耐藥基因。多重PCR擴(kuò)增或探針捕獲利用二代測序技術(shù)對富集后的核酸進(jìn)行高通量測序，產(chǎn)生大量數(shù)據(jù)。通過生物信息學(xué)分析，將測序結(jié)果與參考數(shù)據(jù)庫比對，確定病原體種類和耐藥基因。高通量測序與數(shù)據(jù)分析mNGS為鳥槍法測序，無需預(yù)設(shè)待檢病原，但易受人源背景干擾。tNGS通過靶向富集，減少了人源背景干擾，提高了檢測效率和準(zhǔn)確性。與mNGS的比較tNGS技術(shù)的工作原理專家共識中的臨床應(yīng)用場景03202X下呼吸道感染tNGS在下呼吸道感染中可檢測多種病原體，包括細(xì)菌、病毒、真菌等。對于傳統(tǒng)檢測陰性或治療無效的患者，tNGS可提供更準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷。上呼吸道感染上呼吸道感染的tNGS檢測宜納入呼吸道合胞病毒、流感病毒等常見病原體。tNGS可輔助判斷上呼吸道感染的病原體類型，為臨床治療提供依據(jù)。0102呼吸系統(tǒng)感染血液樣本中的病原體檢測對臨床治療的指導(dǎo)意義tNGS在血流感染中具有高靈敏度，可檢測低載量的病原體。能快速識別血流感染的病原體，指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。tNGS結(jié)果可幫助臨床醫(yī)生快速調(diào)整抗菌治療方案，減少不必要的廣譜抗生素使用。通過檢測耐藥基因，tNGS還能為血流感染的精準(zhǔn)治療提供依據(jù)。血流感染腦脊液樣本中的病原體檢測對預(yù)后評估的價(jià)值tNGS在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中可檢測腦脊液中的病原體，包括病毒、細(xì)菌和真菌。對于腦膜炎等疾病，tNGS能快速確定病原體，為及時(shí)治療提供支持。早期準(zhǔn)確的病原體診斷有助于改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者的預(yù)后。tNGS可檢測病原體的毒力基因，為評估疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后提供參考。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染專家共識中的全流程規(guī)范04202X樣本采集要求不同類型的感染性疾病需采集相應(yīng)的樣本類型，如呼吸道感染采集痰液、鼻咽拭子等。采集樣本時(shí)需注意無菌操作，避免樣本污染。樣本保存與運(yùn)輸樣本采集后需根據(jù)類型和檢測要求進(jìn)行保存和運(yùn)輸，如血樣需冷藏運(yùn)輸。為保證樣本質(zhì)量，需在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成檢測，避免核酸降解。樣本采集與處理采用合適的核酸提取方法，確保核酸的完整性和濃度。文庫構(gòu)建過程中需嚴(yán)格控制質(zhì)量，避免污染和錯誤。核酸提取與文庫構(gòu)建使用高通量測序儀進(jìn)行測序，確保測序質(zhì)量。數(shù)據(jù)分析需采用專業(yè)的生物信息學(xué)軟件，與參考數(shù)據(jù)庫比對，確定病原體。測序與數(shù)據(jù)分析0102實(shí)驗(yàn)室檢測流程建立完整的質(zhì)量控制體系，包括樣本采集、實(shí)驗(yàn)室檢測和數(shù)據(jù)分析等環(huán)節(jié)。定期進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價(jià)，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。質(zhì)量控制體系結(jié)果報(bào)告需包括病原體種類、耐藥基因、序列數(shù)等信息。結(jié)果解讀需結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、免疫狀態(tài)和傳統(tǒng)檢測結(jié)果，由多學(xué)科團(tuán)隊(duì)共同完成。結(jié)果報(bào)告與解讀質(zhì)量控制與結(jié)果報(bào)告專家共識中的未來發(fā)展方向05202X目前tNGS檢測范圍尚未完全統(tǒng)一，未來需進(jìn)一步標(biāo)準(zhǔn)化。通過優(yōu)化引物和探針設(shè)計(jì)，擴(kuò)大檢測范圍，提高檢測準(zhǔn)確性。檢測范圍的標(biāo)準(zhǔn)化低載量病原體檢測是tNGS的挑戰(zhàn)之一，需優(yōu)化技術(shù)提高檢測靈敏度。研究新的富集方法和數(shù)據(jù)分析算法，以更好地檢測低載量病原體。低載量病原體檢測優(yōu)化技術(shù)創(chuàng)新與優(yōu)化罕見病原體檢測對于罕見或新發(fā)病原體感染，mNGS仍是更優(yōu)選擇，但tNGS也在不斷拓展應(yīng)用。通過不斷更新數(shù)據(jù)庫和優(yōu)化檢測流程，tNGS有望在罕見病原體檢測中發(fā)揮更