ICS67050

CCSX.04

中國儀器儀表學會標準

T/CIS67002—2021

3種劇毒鵝膏菌的物種鑒別

PCR擴增-Sanger測序法

Speciesidentificationofthreelethalamanitas—PCRamplification-

Sangersequencing

2021-11-01發布2022-01-01實施

中國儀器儀表學會發布

本標準由中國儀器儀表學會制定其著作權為中國儀器儀表學會所有除

,。

了用于法律許可范圍或事先得到中國儀器儀表學會文字上的許可外不許以任何形式再復

,

制本標準如果關于本標準有任何著作權/版權或相關咨詢請聯系中國儀器儀表學會或

。,

本標準出版社

!

中國儀器儀表學會簡稱是中國儀器儀表與

(ChinaInstrumentandControlSociety)CIS,

測量控制科學技術工作者自愿組成并依法登記成立的學術性公益性非營利性社團法人是

、、,

聯系儀器儀表與測量控制科技工作者的橋梁和紐帶是發展中國儀器儀表與測量控制科學技

,

術事業的重要社會力量

。

地址北京市海淀區知春路號錦秋國際大廈座層郵編

:6A23:100088

電話傳真

:86-10-82800385:86-10-82800485

網址電子郵箱

::scis@

T/CIS67002—2021

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規范性引用文件

2…………………………1

術語和定義

3………………1

縮略語

4……………………2

原理

5………………………2

試劑及配制

6………………2

儀器和設備

7………………3

鑒別分析步驟

8……………3

采樣

8.1…………………3

試樣制備

8.2……………4

提取

8.3DNA……………4

擴增

8.4PCR……………4

產物電泳檢測

8.5PCR…………………5

產物純化及膠回收

8.6PCR……………5

克隆純化

8.7……………5

測序

8.8…………………5

序列分析

8.9……………5

結果判斷與表述

9…………………………5

結果判斷

9.1……………5

結果表述

9.2……………6

檢測過程中防止交叉污染的措施

10………………………6

危害性廢棄物處理

11………………………6

附錄資料性產物純化及膠回收示例

A()PCR…………7

附錄資料性克隆純化示例

B()…………9

附錄資料性參考序列

C()………………10

Ⅰ

T/CIS67002—2021

前言

本文件按照標準化工作導則第部分標準化文件的結構和起草規則的規定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發布機構不承擔識別專利的責任

。。

本文件由中國儀器儀表學會提出并歸口

。

本文件起草單位國家食品安全風險評估中心湖南師范大學江西省疾病預防控制中心浙江省疾

:、、、

病預防控制中心遼寧省疾病預防控制中心

、。

本文件主要起草人李楠陳作紅江濤王佳慧何正蜜張眉眉劉洋陳鴻鵠耿英芝

:、、、、、、、、。

Ⅲ

T/CIS67002—2021

引言

采用擴增測序法鑒別致命鵝膏等種劇毒鵝膏菌以鵝膏菌基因組為模板針

PCR-Sanger3,DNA,

對區域進行擴增克隆和測序通過與參考序列比對進而對物種進行鑒

ITS1-5.8SrDNA-ITS2PCR、,

別其優點在于突破了形態學鑒定的局限性不受樣品個體形態特征發育階段的影響和限制從

。,、,DNA

水平為引發食物中毒或相關研究的鵝膏菌的物種鑒別提供依據

。

本文件的制定目的是為致命鵝膏等種劇毒鵝膏菌的物種鑒別提供統一的操作程序使其鑒別實

3,

現標準化從而顯著提升蘑菇中毒事件的檢測鑒別和防控能力

,、。

Ⅳ

T/CIS67002—2021

3種劇毒鵝膏菌的物種鑒別

PCR擴增-Sanger測序法

1范圍

本文件給出了種劇毒鵝膏菌物種鑒別的擴增測序法

3PCR-Sanger。

本文件適用于致命鵝膏Amanitaexitialis灰花紋鵝膏Amanitauliinea和裂皮鵝膏

()、(fg)

Amanitarimosa的物種鑒別

()。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

分析試驗用水規格和試驗方法

GB/T6682—2008

轉基因產品檢測實驗室技術要求

GB/T19495.2—2004

實驗室質量控制規范食品分子生物學檢測

GB/T27403—2008

動物制品中動物源性檢測基因條碼技術測序法

GB/T35918—2018Sanger

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

鵝膏菌amanita

隸屬于真菌界擔子菌門擔子菌綱傘菌目鵝膏菌科鵝膏屬的真菌

、、、、、。

32

.

Sanger測序法Sa