Q/LB.□XXXXX-XXXXDB43/TXXXX—2025目次TOC\o"1-1"\h前言 II1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 14方法原理 15試劑與材料 16儀器與設備 27樣品 28測定步驟 39結果計算和表述 510檢測方法的靈敏度、準確度和精密度 5附錄A（資料性）甲霜靈及其代謝物標準溶液特征離子質量色譜圖 7前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由湖南省農業農村廳提出。本文件由湖南省農業標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：湖南省水產科學研究所、農業農村部漁業產品質量檢驗測試中心（長沙）、澧縣農產品質量安全檢測中心。本文件主要起草人：萬譯文、楊霄、何詠、雷琴、李小玲、崔先鋒、尹升福、索紋紋、陳湘藝、曾春芳、劉伶俐、黃華偉、謝玉昆、洪波。 水產養殖環境（水體、底泥）中甲霜靈及其代謝物的測定液相色譜-串聯質譜法范圍本文件描述了水產養殖環境（水體、底泥）中甲霜靈及其代謝物的液相色譜-串聯質譜測定方法。本文件適用于水產養殖環境（水體、底泥）中甲霜靈及其代謝物的測定。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法GB17378.5海洋監測規范第5部分：沉積物分析SC/T9102.3漁業生態環境監測規范第3部分：淡水術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。方法原理水樣經二氯甲烷提取，N-丙基乙二胺凈化；底泥樣品冷凍干燥，經1%甲酸-乙酸乙酯提取，采用混合型強陰離子交換固相萃取小柱富集與凈化，液相色譜-串聯質譜儀測定，內標法定量。試劑與材料試劑水：GB/T6682規定的一級水。乙腈（CH3CN）：色譜純。二氯甲烷（CH2Cl2）：分析純。乙酸乙酯（CH3COOC2H5）：色譜純。甲酸（HCOOH）：色譜純。氨水（NH3?H2O）：分析純，濃度為25%～28%。溶液配制1%甲酸-二氯甲烷溶液：移取10mL甲酸，加入990mL二氯甲烷中，混勻。1%甲酸-乙酸乙酯溶液：移取10mL甲酸，加入990mL乙酸乙酯中，混勻。1%氨水溶液：移取10mL氨水，加入990mL實驗用水中，混勻。5%甲酸-乙腈溶液：移取25mL甲酸，加入475mL乙腈中，混勻。20%乙腈溶液：移取20mL乙腈，加入80mL實驗用水，混勻。0.1%甲酸溶液：移取1mL甲酸，加入實驗用水，定容至1000mL，混勻。標準品甲霜靈（Metalaxyl,C15H21N4O,CAS號：57837-19-1）。甲霜靈酸（Metalaxylacid,C14H19N4O2,CAS號：87764-37-2）。氘代甲霜靈（Metalaxyl-D6,C9H21C136N4O,CAS號：65854-76-4）。溶液配制混合標準儲備液（100μg/mL）：稱取甲霜靈、甲霜靈酸標準品各10mg，精密稱定，用乙腈溶解并定容于100mL棕色容量瓶，配制成濃度為100μg/mL的標準儲備液，于-18℃以下避光保存，有效期6個月。內標儲備液（100μg/mL）：稱取甲霜靈-D6標準品各10mg，精密稱定，用乙腈溶解并定容于100mL棕色容量瓶，配制成濃度為100μg/mL的內標儲備液，于-18℃以下避光保存，有效期6個月。混合標準中間液（10.0μg/mL）：準確移取1mL混合標準儲備液，于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，混勻，于-18℃以下避光保存，有效期1個月。內標中間液（10.0μg/mL）：準確移取1mL內標儲備液，于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，混勻，于-18℃以下避光保存，有效期1個月。混合標準使用液（0.10μg/mL）：準確移取1mL標準中間液于100mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，混勻，于4℃以下避光保存，現配現用。內標使用液（0.10μg/mL）：準確移取1mL內標中間液于100mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，混勻，于4℃以下避光保存，現配現用。材料混合型強陰離子交換固相萃取小柱：150mg/6mL，或者相當者。聚四氟乙烯濾膜：0.22μm。玻璃纖維濾膜：0.45μm。N-丙基乙二胺：40μm～60μm粒徑范圍，100?平均孔徑。儀器與設備液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源。分析天平：感量0.01g和0.00001g。冷凍干燥機。渦旋混合器。高速離心機：轉速不低于8000r/min。超聲波清洗器。固相萃取裝置，帶真空泵。氮吹儀。樣品樣品采集水樣和底泥樣品按照SC/T9102.3規定的方法進行采集。試樣制備水樣采樣量應不少于1L，經0.45μm玻璃纖維濾膜過濾，置于棕色樣品瓶中，0℃～4℃避光保存，一周內完成分析。底泥樣品采樣量應不少于500g，于-20℃預冷凍24h，經冷凍干燥機（-50℃，真空度<20Pa，冷凍干燥10h）凍干，剔除石塊和植物體等異物，用研缽研磨后過孔徑100目網篩，置于棕色樣品瓶中，0℃～4℃避光保存，一個月內完成分析。測定步驟提取水準確移取100mL水樣，置于分液漏斗中，加入20mL1%甲酸-二氯甲烷，再加入100μL內標使用液，震蕩提取5min，靜置分層，收集下層清液于雞心瓶中。加入20mL1%甲酸-二氯甲烷，重復提取一次。合并提取液，45℃旋蒸至近干，加入1mL20%乙腈溶液溶解，溶液轉移至2mL離心管，加入100mgN-丙基乙二胺，渦旋混合1min，于4℃10000r/min離心10min，取上清液過0.22μm有機相微孔濾膜，供液相色譜串聯質譜儀測定。底泥準確稱取制備的底泥樣品2g（精確至0.01g），置于50mL離心管中，加入100μL內標使用液和5mL水，渦旋混合1min，靜置30min，然后加入15mL1%甲酸-乙酸乙酯溶液渦旋混合2min，超聲提取10min，于4℃4000r/min離心5min，取上清液。殘渣加入10mL1%甲酸-乙酸乙酯溶液，重復提取一次。合并提取液，45oC氮氣吹干，加入5mL乙腈和250μL氨水，渦旋混合2min，備用。用5mL乙腈和5mL1%氨水溶液預活化固相萃取小柱。取備用液過柱，保持柱流速小于1.5mL/min，再用5mL1%氨水溶液和5mL乙腈淋洗，棄去流出液，用4mL5%甲酸-乙腈溶液洗脫，收集洗脫液，于45oC氮氣吹至近干，加入1mL20%乙腈溶液溶解，過0.22μm有機相微孔濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。底泥含水率測定按照GB17378.5規定的方法進行測定。標準曲線制備分別移取標準使用液和內標使用液，用乙腈配制成甲霜靈及其代謝物的濃度為0.50μg/L、1.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L，氘代甲霜靈濃度為10.0μg/L的系列標準工作液，供液相色譜-串聯質譜儀測定。以待測物和內標物特征離子質量色譜峰峰面積比值為縱坐標、對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程和相關系數。測定液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18(100mm×2.1mm，粒徑2.6μm)，或相當者；流動相：A為乙腈，B為0.1%甲酸-水溶液。梯度洗脫條件見表1；進樣量：5μL；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃。流動相梯度洗脫條件時間minA%B%05.095.01.295.05.02.095.05.02.15.095.04.05.095.0質譜參考條件質譜參考條件如下：離子源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM）；噴霧電壓：5.5kV。脫溶劑氣溫度：550℃；多反應監測母離子、子離子、去簇電壓和碰撞能量見表2。多反應監測母離子、子離子、去簇電壓和碰撞能量化合物名稱母離子m/z子離子m/z去簇電壓V碰撞能量eV甲霜靈280.2220.1a10015192.110020甲霜靈酸266.1220.1a10016192.110020氘代甲霜靈286.2198.210022a為定量離子。定性測定在相同測試條件下，試樣中待測物的保留時間與標準工作液中待測物的保留時間一致，偏差在±2.5%以內，且試樣中待測物定性離子的相對豐度與濃度相當的標準溶液對應的定性離子的相對豐度一致。其允許偏差應符合表3的要求。定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度，%＞50＞20～50＞10～20≤10允許的相對偏差，%±20±25±30±50定量測定按8.5.1和8.5.2設定儀器條件，取標準工作溶液、試樣溶液、空白試樣溶液等體積進樣測定，內標法定量。標準工作溶液和試樣溶液中目標物的響應值均應在儀器檢測線性范圍內。甲霜靈及其代謝物標準溶液特征離子質量色譜圖參見附錄A。空白實驗按照8.1～8.4相同的測定步驟進行空白試樣（見7.3）的測定。結果計算和表述水樣中甲霜靈及其代謝物含量水樣中甲霜靈及其代謝物含量按式（1）計算。計算結果應扣除空白值，保留2位有效數字。 X1=Ci×VV式中：X1——試樣中甲霜靈及其代謝物的含量，單位為微克每升（μg/L）；Ci——從標準工作曲線得到的待測物溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——試樣最終定容體積，單位為毫升（mL）；V0——試樣體積，單位為毫升（mL）。底泥中甲霜靈及其代謝物含量底泥中甲霜靈及其代謝物含量按式（2）計算。計算結果應扣除空白值，保留2位有效數字。 X2=Ci×Vm×(1?w)式中：X2——試樣中甲霜靈及其代謝物的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；Ci——從標準工作曲線得到的待測物溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——試樣最終定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質量，單位為克（g）；w——試樣含水率，單位為質量分數（%）檢測方法的靈敏度、準確度和精密度靈敏度本方法在水產養殖環境水中甲霜靈及其代謝物的檢出限為0.05μg/L，定量限為0.1μg/L；在水產養殖環境底泥中甲霜靈及其代謝物的檢出限