病毒感染的檢查方法

與防治原則

病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：

1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學(xué)診斷采雙份血清病毒感染的檢查方法與防治原則二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)（cell

culture）

雞胚接種（egginoculation）

動物接種（animalinoculation）病毒感染的檢查方法與防治原則二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2-3代指標(biāo)陰性病毒陰性病毒感染的檢查方法與防治原則（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）

分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）病毒感染的檢查方法與防治原則病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒感染的檢查方法與防治原則1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織塊分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

病毒感染的檢查方法與防治原則特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點：①對多種病毒敏感②不帶異種蛋白(人源性)③不帶病毒，無致瘤潛能④可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高②繁殖能力高，傳代時間長③有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染的檢查方法與防治原則2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）嗜神經(jīng)病毒

病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的檢查方法與防治原則2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復(fù)雜病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的檢查方法與防治原則

3.動物接種

應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒病毒感染的檢查方法與防治原則1．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鑒定

病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的檢查方法與防治原則①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)病毒感染的檢查方法與防治原則麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)病毒感染的檢查方法與防治原則③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)病毒感染的檢查方法與防治原則腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體病毒感染的檢查方法與防治原則(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？埃可病毒CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)埃可病毒(+)病毒感染的檢查方法與防治原則(4)細(xì)胞代謝改變

細(xì)胞代謝變慢

pH變化減慢病毒感染的檢查方法與防治原則2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大病毒感染的檢查方法與防治原則3.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

病毒感染的檢查方法與防治原則(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）

——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序病毒感染的檢查方法與防治原則（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗（plaqueformationtest）

3.50％組織細(xì)胞感染量（50％tissueculture

infectiousdose,TCID50）感染性病毒量病毒感染的檢查方法與防治原則(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定基因測序和生物對比病毒感染的檢查方法與防治原則三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學(xué)調(diào)查等病毒感染的檢查方法與防治原則1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用病毒感染的檢查方法與防治原則2.補體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補體抗體特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。病毒感染的檢查方法與防治原則四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）病毒感染的檢查方法與防治原則（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體病毒感染的檢查方法與防治原則（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序病毒感染的檢查方法與防治原則（三）早期抗體檢測可診斷急性感染特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的特異性預(yù)防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清（biologicalproducts）免疫細(xì)胞細(xì)胞因子

防治和診斷感染性疾病病毒感染的檢查方法與防治原則滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品病毒感染的檢查方法與防治原則二、人工被動免疫常用生物制品免疫球蛋白血清丙種球蛋白細(xì)胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞

——LAK細(xì)胞

病毒感染的檢查方法與防治原則病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物干擾素和干擾素誘生劑中草藥基因