ICS65.020.30CCSB4444廣東省地方標準DB44/T2481—2024實驗用牛管理規范Specificationsforexperimentalcattlemanagement廣東省市場監督管理局發布DB44/T2481—2024目次前言.................................................................................II1234范圍...............................................................................1規范性引用文件.....................................................................1術語和定義.........................................................................1總體要求...........................................................................2基本要求.......................................................................2人員...........................................................................3管理體系文件...................................................................3設施與環境.........................................................................3分類...........................................................................3生產設施基本要求...............................................................3實驗設施基本要求...............................................................3環境技術指標...................................................................4籠具圍欄.......................................................................5料盤...........................................................................5福利用品.......................................................................5實驗用牛質量管理...................................................................6微生物與寄生蟲學等級...........................................................6檢測指標和項目.................................................................6檢測程序.......................................................................7檢測方法.......................................................................7檢測規則.......................................................................7結果判定.......................................................................8動物實驗管理.......................................................................8通用要求.......................................................................8遵循福利倫理原則...............................................................8福利倫理審查...................................................................8麻醉、止痛和鎮靜...............................................................8安樂死.........................................................................8動物運輸...........................................................................8廢棄物處理.........................................................................956789附錄A（資料性）實驗用牛病原微生物和寄生蟲的檢測方法................................10附錄B（資料性）實驗用牛常用麻醉、止痛和鎮靜藥物....................................11參考文獻.............................................................................12IDB44/T2481—2024前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由廣東省科學技術廳提出并組織實施。本文件由廣東省實驗動物標準化技術委員會（GD/TC93）歸口。本文件起草單位：廣東省實驗動物監測所、華南農業大學、深圳漢諾醫療科技有限公司。本文件主要起草人：魏遠征、賈坤、李軼江、陳小曲、李守軍、葉建平、王靜、潘金春、張鈺。IIDB44/T2481—2024實驗用牛管理規范1范圍本文件規定了實驗用牛的生產和開展動物實驗的總體要求、設施與環境、實驗用牛質量管理、動物實驗管理、動物運輸、廢棄物處理等要求。本文件適用于實驗用牛的生產和使用管理。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T14924.2實驗動物配合飼料衛生標準GB14925實驗動物環境及設施GB18871電離輻射防護與輻射源安全基本標準GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T27416實驗動物機構質量和能力的通用要求GB/T34791實驗動物質量控制要求GB/T35823實驗動物動物實驗通用要求GB/T35892實驗動物福利倫理審查指南GB/T39760實驗動物安樂死指南GB/Z34792實驗動物引種技術規程NY/T1242奶牛場HACCP飼養管理規范3下列術語和定義適用于本文件。1DB44/T2481—2024用于科學研究、教學、檢驗檢測以及其他科學實驗的牛。實驗用牛生產設施breedingfacilityforexperimentalcattle用于實驗用牛生產的建筑物和設備的總和。實驗用牛實驗設施experimentalfacilityforexperimentalcattle以研究、試驗、教學、生物制品和藥品及相關產品生產、檢驗檢測等為目的而進行實驗用牛試驗的建筑物和設備的總和。普通環境conventionalenvironment通過人工控制，滿足普通級實驗動物生產或使用要求的各種因素總和。[來源：GB14925—2023,3.4]屏障環境barrierenvironment滿足無特定病原體（specificpathogenfree，SPF）級實驗動物生產或使用要求的各種因素總和。[來源：GB14925—2023,3.5]普通級實驗用牛普通實驗用牛conventional（CV）experimentalcattle不攜帶所規定的對動物和（或）人健康造成嚴重危害的人獸共患病原體和動物烈性傳染病病原體的實驗用牛。除普通級實驗用牛應排除的病原體外，不攜帶對動物健康危害大和（或）對科學研究干擾大的病原4實驗用牛生產區與畜牧養殖區應相對分開，并做好實驗用牛生產繁殖記錄和系譜檔案整理，保實驗用牛生產引種參照GB/Z34792的規定執行，符合核心育種場管理規范要求。選擇行業認可按照引進牛的品種要求設立牛群結構、飼養密度，開展種公母牛、犢牛、育成牛和成年牛的飼用于開展動物實驗的牛應來源于培育和飼養的動物群體，保障動物質量，防止人獸共患病。飼料應滿足實驗用牛的正常生理需求，衛生指標應符合GB/T14924.2要求。進入屏障環境的飼料應經消毒滅菌處理。2DB44/T2481—20244.1.84.1.94.1.10動物飲水應符合GB14925飲水的要求。開展動物實驗應符合GB/T35823的要求。遵循福利倫理原則。開展動物實驗的環境設施應符合GB14925要求。負壓屏障設施應符合病原微生物實驗室安全管理條例及相關標準要求。人員人員應符合GB/T27416和GB/T34791規定。管理體系文件機構宜按照GB/T27416規定建立管理體系文件。5設施與環境分類按照設施的使用功能，分為實驗用牛生產設施和實驗設施。按照空氣凈化的控制程度，實驗用牛環境分為普通環境和屏障環境，見表1。表1實驗用牛的環境分類環境分類使用功能適用動物等級普通級普通環境屏障環境—生產、實驗、檢疫生產、實驗、檢疫實驗、檢疫生產場區選擇和規劃設計應符合NY/T682的規定，場區周圍環境應符合NY/T1167、NY/T3467屏障環境生產設施應滿足動物生產繁殖特性，工藝布局宜包括隔離檢疫室、緩沖間、風淋室、育種室、擴大群飼養室、生產群飼養室、待發室、清潔物品貯存室、消毒后室、走廊。宜遠離有嚴重空氣污染、振動或有噪聲干擾的鐵路、碼頭、飛機場、交通要道、工廠、貯倉、屠宰場、堆場等區域。實驗室外環境整潔，便于清掃和消毒。排水暢通，無廢物堆積和污水積存。應有防止野生動物進入的裝置。實驗設施排水口還應采取防止害蟲進入的措施。設施走廊凈寬宜不小于2.0m。門大小應滿足設備進出和日常工作需要，凈寬宜不小于1.2m或使用雙開門。排水溝、槽、管坡度應保證排水通暢，無污物積存。排水管道管徑不宜小于150mm。3DB44/T2481—20245.3.2總體布局5.3.2.1應根據實驗用牛的生理需要和行為特征，設計建造適合其居住的設施，并能控制人員和動物進出。一般分為前區、實驗區和輔助區。5.3.2.2前區：宜包括辦公室、接待室、檔案資料室、維修室、庫房、飼料室、配電室、一般走廊和動物裝卸平臺等。5.3.2.3實驗區：宜包括緩沖間、風淋室、檢疫間、隔離室、操作室、手術室、飼育間、清潔物品貯存室、消毒后室、走廊。5.3.2.4輔助區：宜包括倉庫、洗刷消毒室、安樂死區域、廢棄物處理室（設備）、解剖室、機械設備室、淋浴間、工作人員休息室、更衣室等。5.3.2.55.3.2.65.3.2.75.3.2.85.3.2.9控制。動物實驗設施應與動物生產設施分開設置。普通級動物的隔離檢疫間應與動物實驗區分開設置。生產設施和實驗設施宜設置隔離室，用來獨立飼養觀察受傷和患病的動物。實驗設施排水口應采取防止害蟲進入的措施。飼料和墊料儲藏室應實行環境控制，防止寄生蟲污染和野生動物進入，并進行必要的溫濕度5.3.2.105.3.2.115.3.2.125.3.2.13廢物存放處理間（設備）應滿足動物尸體等廢物的處理、存放需要。必要時，飼養間可設置動物活動空間。開展放射性實驗，設施布局及管理應符合GB18871要求。開展動物生物安全實驗，設施布局及管理應符合GB19489和GB50346的要求。環境技術指標實驗用牛的環境技術指標應符合表2的要求。表2溫度/℃16～2820～26相通區域靜壓差/Pa，≥氣流速度/（m/s），≤換氣次數/（次/h），≥空氣潔凈度級別/級3照度/lx正壓屏障環境的單走廊設施應保證動物生產區、動物實驗區壓力最高；雙走廊或多走廊設施應保證潔凈走廊的壓力高于動物生產區、動物實驗區，且動物生產區、動物實驗區的壓力高于污物走廊。4DB44/T2481—2024表2實驗用牛的環境技術指標（續）所有負壓屏障環境應保證動物實驗區壓力最低。離乳前犢牛飼養間或飼養區域溫度應控制在30℃以上。注1：表中“—”表示不作要求。注2：氨濃度指標為有實驗用牛時的指標。注3：空氣潔凈度、沉降菌平均濃度為靜態時的指標。注4：檢測項目按照GB14925執行。5.4.2屏障環境設施的潔凈輔助區環境指標應符合GB14925的要求。設備環境技術指標應按GB14925所列方法檢測。檢測指標包括設備內部技術指標和設備所處5.4.3房間的溫度、相對濕度和噪聲。籠具圍欄5.5.15.5.2籠具圍欄應符合實驗用牛的生理、健康及福利要求，滿足GB14925籠具的要求。實驗用牛籠具圍欄應符合表3的要求。表3實驗用牛籠具圍欄最小尺寸飼養數量/頭體重/kg≤75底板面積/（m/頭）22.1675～200200～350350～500500～650≥6504.326.483.65DB44/T2481—20246實驗用牛質量管理微生物與寄生蟲學等級實驗用牛按微生物、寄生蟲學等級分類分為普通級和無特定病原體級。檢測指標和項目6.2.1臨床檢查可根據需求選擇外觀、血常規、血生化、影像等檢查方法，實驗用牛臨床檢查應無異常。6.2.2檢測項目實驗用牛病原微生物及寄生蟲檢測項目按表2的要求。表4實驗用牛病原微生物及寄生蟲檢測項目動物等級檢測項目檢測要求口蹄疫病毒Foodandmouthdiseasevirus布魯氏菌Brucella▲●▲●●●○○○○○▲▲●●●●●●●●棘球蚴Echinococcus弓形蟲Toxoplasmagondii隱孢子蟲Cryptosporidium普通級結核分枝桿菌Mycobacteriumtuberculosis炭疽芽孢桿菌Bacillusanthracis鉤端螺旋體Leptospira伯氏疏螺旋體Borreliaburgdorferi貝氏柯克斯體Coxiellaburnetii6DB44/T2481—2024表4實驗用牛病原微生物及寄生蟲檢測項目（續）動物等級檢測項目檢測要求賈第蟲Giardia●●●○○○○○錐蟲Trypanosome蠕蟲Helminths藍舌病病毒Bluetonguevirus無特定病原體級牛流行熱病毒Bovineephemeralfevervirus牛結節性皮膚病病毒Lumpyskindiseasevirus阿卡斑病毒Akabanediseasevirus惡性卡他熱病毒Malignantcatarrhalfevervirus絲狀支原體絲狀亞種小型菌落（SC型）Mycoplasmamycoidessubsp.mycoidesSC肺支原體Mycoplasmapneumonia○○注1：●必須檢測，要求陰性；▲必須檢測，普通級可以免疫，無特定病原體級不能免疫；○必要時檢測。注2：必須檢測項目：指在進行實驗用牛質量評價、等級確定時必須檢測的項目。注3：必要時檢測項目：指相關行政部門要求時，本病流行時、進出口時，或特殊實驗要求時需要檢測的項目。注4：因動物疫病防控需要對布魯氏菌進行免疫的，普通級可以免疫，無特定病原體級不能免疫。普通級實驗用牛每6個月應至少檢測1次；無特定病原體級實驗用牛每3個月應至少檢測1次。應選擇大于3月齡的實驗用牛。根據實驗用牛群體大小，取樣數量見表5。表5動物送檢容器應按動物級別要求編號和標識，包裝好，安全送達實驗室，并附送檢單，寫明7DB44/T2481—2024采樣方法應按照NY/T541進行。6.5.2.4結果判定結果判定按照DB44/T2482執行。7動物實驗管理通用要求動物實驗管理按照GB/T35823執行。遵循福利倫理原則7.2.17.2.27.2.37.2.4使用實驗用牛應符合“替代、減少、優化”原則。使用合格的實驗用牛，保障人和動物的健康。在生產、使用和運輸過程中應當維護實驗用牛福利，關愛實驗用牛不得虐待實驗用牛。采取有效措施，保障實驗用牛處于舒適、健康、快樂等自然生活狀態的五項自由，包括免于饑渴的自由，免于不適的自由，免于痛苦、傷害和疾病的自由，表達主要天性的自由，免于恐懼和焦慮的自由。7.2.57.2.6在不影響實驗結果判定的情況下，盡可能減少實驗用牛的痛苦或縮短動物承受痛苦的時間。在對實驗用牛進行手術或其他活體操作時，應進行有效的麻醉、鎮靜或止痛；實驗用牛處于手術后、患病等疼痛、痛苦狀態時應實施有效的治療、止痛；處死實驗用牛時應實施安死術。按照GB/T35892有關規定，對使用實驗用牛的必要性、合理性和規范性進行檢查和審定。麻醉、止痛和鎮靜應選用藥用級化合物，選用非藥用級化合物的，應通過福利倫理審查。麻醉劑種類分為注射麻醉劑和氣體麻醉劑。注射麻醉劑適用于短期手術，氣體麻醉劑適用于較長時間手術。使用氣體麻醉劑前通常使用注射麻醉劑誘導麻醉，再使用氣體麻醉劑維持麻醉。氣體麻醉不宜作為首選麻醉方式單獨使用。止痛藥一般用于減輕動物疾病或手術后疼痛的嚴重程度和持續時間。根據動物疼痛級別、藥物鎮靜劑主要用于動物化學保定、手術前期麻醉等過程，可以減少動物焦慮、恐懼和過度活動。鎮靜劑與麻醉劑聯合使用時，可增強肌肉放松、無意識和鎮痛。常用麻醉、止痛和鎮靜藥物見附錄B。安樂死88DB44/T2481—20249廢棄物處理按照GB14925廢棄物處理規定執行。9DB44/T2481—2024附錄A（資料性）實驗用牛病原微生物和寄生蟲的檢測方法實驗用牛病原微生物和寄生蟲的檢測方法見表A.1。表A.1實驗用牛病原微生物和寄生蟲的檢測方法病原體推薦檢測標準檢測方法口蹄疫病毒布魯氏菌GB/T27528GB/T18646、SN/T1088NY/T1466核酸檢測抗體檢測、核酸檢測、病原分離抗體檢測、抗原檢測核酸檢測、抗體檢測鏡檢棘球蚴弓形蟲NY/T573隱孢子蟲NY/T1949結核分枝桿菌炭疽芽孢桿菌鉤端螺旋體伯氏疏螺旋體貝氏柯克斯體體外寄生蟲牛病毒性腹瀉-粘膜病毒牛傳染性鼻氣管炎病毒副結核分枝桿菌多殺性巴氏桿菌胎兒彎曲桿菌牛白血病病毒衣原體GB/T18645NY/T561抗體檢測、核酸檢測、γ干擾素檢測核酸檢測、抗原檢測鏡檢、核酸檢測抗原檢測、核酸檢測抗原檢測、抗體檢測肉眼觀察、鏡檢抗體檢測、核酸檢測核酸檢測SN/T1717SN/T3392SN/T1087GB/T18448.1GB/T18637、SN/T1129GB/T27981GB/T27637GB/T27530GB/T18653SN/T131510DB44/T2481—2024附錄B（資料性）實驗用牛常用麻醉、止痛和鎮靜藥物實驗用牛常用麻醉、止痛和鎮靜藥物見表B.1。表B.1實驗用牛常用麻醉、止痛和鎮靜藥物類別使用方式呼吸常用藥品名異氟烷（isoflurane）、七氟烷（sevoflurane）麻醉前給藥一般使用α－腎上腺素能受體激動劑（如：甲苯噻嗪（xylazine）、美托咪啶（medetomidine）、地托咪啶（detomidine）等）、乙酰丙嗪（acepromazine）、抗膽堿能藥物（如：阿托品（atropine）等）、水合氯醛（chloralhydrate）、苯二氮卓類（如：地西泮（diazepam）等）等藥物。麻醉劑誘導麻醉藥一般使用巴比妥類（如：戊硫代巴比妥（thiopental）、戊巴比妥（pentobarbital）、硫戊巴比妥（thiamylal）等）、異氟烷（isoflurane）、氯胺酮（ketamine）、愈創木酚甘油醚（glycerylguaiacolate）等。注射維持麻醉可分為靜脈麻醉、呼吸麻醉、靜脈和呼吸復合麻醉三種方式，可選擇藥物較多，主要為氯胺酮（ketamine）、α-腎上腺素能受體激動劑、局部麻醉藥等。孕牛禁用α－腎上腺素能受體激動劑藥物。異氟烷（isoflurane）、七氟烷（sevoflurane）主要為阿片類（如：嗎啡（morphine）、布托啡諾（butorphanol）、哌替啶（meperidine）等），α－腎上腺素能受體激動劑（如：甲苯噻嗪（xylazine）、美托咪啶（medetomidine）、地托咪啶（detomidine）等），非甾體類抗炎藥如：水楊酸（salicylicacid(aspirin)、氟胺煙酸葡胺（flunixinmeglumine）等）。主