DB23/T××××—××××PAGE2PAGEIIXXXX-XX-XX實施黑龍江省市場監督管理局發布XXXX-XX-XX發布水稻回交轉育技術操作規程????主要起草單位：黑龍江省農業科學院耕作栽培研究所XXXX-XX-XX實施黑龍江省市場監督管理局發布XXXX-XX-XX發布水稻回交轉育技術操作規程????主要起草單位：黑龍江省農業科學院耕作栽培研究所聯系人：唐傲聯系電話子郵箱：neweric@126.comDB23/TXXXX—XXXXDB23黑龍江省地方標準ICS65.020.20B05DB23/TXXXX-XXXXPAGEI前言本標準依據GB/T1.1-2009編寫規則起草。本標準由黑龍江省農業農村廳提出。本標準由黑龍江省農業標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：黑龍江省農業科學院耕作栽培研究所、中國科學院遺傳與發育生物學研究所本標準主要起草人：來永才、朱禎、孟英、王鋒、唐傲、張磊、張喜娟、李平、陳在杰、董文軍、劉猷紅。水稻回交轉育技術操作規程1范圍本標準規定了水稻回交轉育技術的術語和定義、親本選擇、雜交方法、回交轉育及生產檔案。本標準適用于水稻回交轉育技術。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T17316水稻原種生產技術操作規程NY/T1433水稻品種鑒定技術規程SSR標記法DB23/T1929常規水稻品種純度檢測SSR方法DB23/T1671.3億畝生態高產標準農田水稻生產技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1回交轉育兩親本雜交后，其雜交后代再與親本之一進行連續多次的雜交，通過對回交后代的選擇把親本的目標性狀導入另一親本的育種方法。3.2輪回親本用于多次回交的親本，是目標性狀的接受者，又稱受體親本。3.3非輪回親本只在第一次雜交時應用的親本，是目標性狀的提供者，又稱供體親本。3.4分子標記輔助選擇利用與目標性狀基因緊密連鎖或表現共分離關系的分子標記，在群體中對個體基因型進行選擇。4親本選擇4.1輪回親本選擇輪回親本選擇當地適應性強、產量高、綜合性狀較好，經數年改良后仍有發展前途的推廣品種。4.2非輪回親本選擇非輪回親本應具備輪回親本所不具備的目標性狀，該性狀遺傳力強，無不良性狀連鎖，單基因控制或少數主效基因控制的簡單性狀為佳，其他性狀無嚴重缺陷。5雜交方法5.1親本開花期的調節根據不同親本的生育期，通過調整播期或分期播種等方式，使雜交親本的花期相遇。5.2去雄在雜交母本上選擇稻穗并剪除上部已開花的穗粒和最下端的穗粒，留中間部位的10個～20個穗粒，每個穗粒剪去外穎上端的三分之一，然后用鑷子摘除6個花藥，待所留穗粒全部去雄完畢后套袋。5.3授粉去雄的母本稻穗，應在當日或次日進行人工授粉。當父本稻穗進入開花期時，取下正開花的父本稻穗，將花粉抖撒入授粉袋內。授粉完畢后，掛牌寫明親本名稱、授粉日期。5.4收獲雜交籽粒成熟后，應及時按組合單獨脫粒收獲，統計數量后填寫記錄并保存。6回交轉育6.1基本程序6.1.1技術流程回交轉育的技術流程圖見附錄A。6.1.2親本雜交輪回親本與非輪回親本雜交，成熟后雜交粒全部收獲，脫粒，記錄，保存，即得到雜種一代種子。6.1.3連續回交當目標性狀是由顯性基因控制時，在雜種一代和每次回交后代中選擇具有目標性狀的單株，直接與輪回親本回交。當目標性狀是由隱性基因控制時，則將雜種一代和每次回交后代分別自交一次，使隱性的目標性狀表現出來，再選擇具有目標性狀的個體繼續回交?；亟坏耐瑫r記錄每一世代目標性狀的遺傳分離情況，以確認目標性狀的遺傳效應。6.1.4自交純化在回交到適宜世代后，還需自交2～3代，使回交后代的目標性狀從雜合狀態通過自交純化，獲得性狀穩定的株系。穩定株系與輪回親本遺傳背景的相似度可根據NY/T1433提供的方法進行分子鑒定。6.2回交次數和群體規模6.2.1回交次數回交次數以輪回親本的特征特性基本得到恢復為準。親本間差異小時，回交次數可少些，若目標性狀基因與不良基因連鎖，應增加回交次數。一般結合分子標記輔助選擇，進行4～5次即可。回交群體中輪回親本的基因恢復頻率P1和從輪回親本導入基因的純合體比率P2，可根據式1和式2計算：P式中：P1為輪回親本的基因恢復頻率；n為回交次數；P式中：P2為從輪回親本導入基因的純合體比率；n為回交次數；r為雜種的雜合基因對數；6.2.2回交群體的規模為保證回交的植株帶有需要轉移的目標性狀基因，每一回交世代必須種植足夠的株數，可根據式3計算：m式中：m為所需種植數量；α為幾率水準；p為在雜種群體中合符需要的基因型期望比率；不同目標性狀基因對數，在無連鎖情況下，每個回交世代需要種植的最小植株數見附錄B。6.3回交后代的鑒定與選擇6.3.1選擇原則在回交后代中，選擇具有目標性狀且農藝性狀與輪回親本盡可能相似的單株進行回交。6.3.2農藝性狀特征輪回親本和回交后代的主要農藝性狀特征田間記載項目參考GB/T17316執行，并按所記錄的內容進行對比鑒定。6.3.3回交后代的分子標記輔助選擇基本要求需已知控制目標性狀的基因或與之緊密連鎖的標記，且分型標記來自于該基因內部或與之緊密連鎖的側翼標記?；蚧驑擞浳稽c來源宜選擇公開文獻中報道的，或已公開并獲使用許可的專利；也可是實施單位前期研究獲得的目標性狀的基因或標記。DNA提取、擴增和產物檢測按照DB23/T1929提供的方法進行。選擇方法根據回交后代群體目標性狀的基因分型結果，保留攜帶目標性狀基因的單株用于回交或自交。6.4材料種植和田間管理親本和回交后代材料采取人工每穴單株種植，群體種植的數量根據6.2.2公式和田間實際條件計算，育苗和田間管理參照DB23/T1671.3執行。7生產檔案應建立水稻回交轉育田間檔案，內容包括：親本信息、回交世代材料信息、鑒定選擇結果、種植數量、雜交時間、雜交粒數量、田間管理詳情和收獲期等。

附錄A（規范性附錄）回交轉育的技術流程回交轉育的技術流程見圖1、2。圖1單顯性基因的回交轉育示意圖

圖2單隱性基因的回交轉育示意圖

附錄B（規范性附錄）回交中所需要的植株數回交所需要的植株數見表1。表1回交所需要的植株數需要轉移的基因數12345