ICS11.220CCSB411310IDB1310/T272—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由廊坊市農業農村局提出。本文件起草單位：三河市金源禽業有限公司、三河市農業農村局。本文件主要起草人：劉佳、張海燕、張凌鳳、陳雪梅、李玉瑩、張軍英、馬振剛、司文輝、王萃、于明輝。DB1310/T272—20221蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測技術規程本文件規定了蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測技術中的術語和定義、樣本抽取、實驗準備、實驗方法、結果判定和免疫抗體合格判定等內容。本文件適用于廊坊市轄區內采用卵黃進行蛋禽（雞、鴨、鵝）H7亞型禽流感滅活疫苗免疫抗體檢測。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18936高致病性禽流感診斷技術GB/T30642食品抽樣檢驗通用導則DB13/T946-2008蛋禽H5亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測技術規程3術語和定義DB13/T946—2008界定的術語和定義適用于本文件。4樣本抽取人員要求抽樣人員不少于2人，并經過專業培訓，掌握抽樣程序和技術要求。抽樣時需穿工作服、一次性鞋套、口罩、手套，做好人員防護。樣本要求抽取的禽蛋要具有代表性，以一棟禽舍或同一批次禽群為抽樣單元，隨機抽取蛋禽免疫接種H5+H7亞型禽流感滅活疫苗21d后所產的新鮮禽蛋。抽樣方式4.3.1籠養蛋禽禽舍的首端、中端、尾端，雞籠的每一層多點抽樣。4.3.2非籠養蛋禽和蛋庫抽樣按照GB/T30642規定的程序和方法執行，確保抽樣的公正性、真實性。2將抽取的樣品放置蛋托內避免樣品破損，應貯藏在陰涼、干燥、通風、良好的場所。不得與有毒、滴頭、微量振蕩器、低速離心機、液體快速混合器、1.5ml離心管、30ml容量瓶、60ml容量瓶。0.9%生理鹽水、SPF雞紅細胞混懸劑(1%)、禽流感病毒H7亞型HI抗原、禽流感病毒H7亞型陽在樣品管中加入0.5ml生理鹽水(0.9%),再吸取0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻制成卵黃檢樣備用。min,3000r/min離心5min,取上清液備用。操作方法按GB/T18936執行。用536.2.2卵黃氯仿萃取測定法6.2.2.1適用范圍在卵黃直接稀釋測定法檢測出現跳管或測不出抗體時，采用卵黃氯仿萃取法檢測。操作方法按GB/T18936執行。用5.2.2中制備的檢樣代替血清進行檢測。檢測時設標準陽性血清和陰性血清對照。7結果判定7.1試驗結果成立條件只有陰性對照孔血清滴度不大于22,陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結果才有效。7.2HI滴度的計算方法以完全抑制4個HAU抗原的樣本最高稀釋倍數作為HI滴度。樣本制備過程中卵黃的稀釋倍數和加入氯仿量都計入該樣本的稀釋倍數。7.3判定方法7.3.1卵黃直接稀釋測定法結果判定將“檢樣制備”過程中樣本的稀釋倍數計入終點滴度判定，即：微最反應板上血凝抑制的終點滴度加一個滴度為該樣本的HI抗體效價，終點滴度為零時則不再加。舉例：微量反應板上血凝抑制的終點滴度是2?,則該樣本HI抗體效價為2?。7.3.2卵黃氯仿萃取測定法結果判定將“檢樣制備”過程中樣本的稀釋倍數計入終點滴度判定，即：微量反應板上血凝抑制的終點滴度加兩個滴度為該樣本的HI抗體效價，終點滴度為零時則不再加。舉例：微量反應板上血凝抑制的終點滴度是2?,則該樣本HI