PAGEPAGE14第1課時大腸桿菌的培育和分別[學習目標]1.進行大腸桿菌的擴增，利用液體培育基進行細菌培育的操作。2.進行大腸桿菌的分別，用固體平面培育基進行細菌的劃線培育。3.說明大腸桿菌培育的條件和試驗原理。一、微生物培育的基本條件1.微生物(1)概念：結構簡潔、形體微小的單細胞、多細胞或沒有細胞結構的低等生物。(2)用途：很多種抗生素來源于放線菌和霉菌；酒由酵母發酵產生；腐乳由紅曲霉和毛霉發酵制成；微生物能用于治理環境污染，在新能源領域也將發揮巨大作用。2.培育基(1)概念：培育基是微生物生存的環境和養分物質。(2)分類：培育基按物理性質常可分為固體培育基和液體培育基，一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽四類養分物質，另外還需滿意微生物生長對pH、特殊養分物質和氧氣的要求。通常細菌培育基要用蛋白胨和酵母提取物來配制，還要加入肯定量的氯化鈉以維持肯定的滲透壓；霉菌培育基一般用無機物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。(3)酸堿性：細菌通常要求在中性偏堿的環境中生長，霉菌要求在中性偏酸的環境中生長；因此，在制備培育基時需調整培育基的酸堿度。特殊提示有關培育微生物所需養分的三點提示(1)不同微生物對養分的需求不同，所以培育不同的微生物所須要的養分可能不同。(2)對異養微生物來說，含C、H、O、N的有機物既是碳源又是氮源、能源。(3)培育微生物時養分物質要協調。養分物質過少不能滿意微生物的養分須要，過多對微生物的生長有抑制作用。3.滅菌操作(1)常見滅菌方法①對于培育皿、試管、三角瓶、鑷子等常采納高壓蒸汽滅菌法滅菌。②對于不能加熱滅菌的化合物，如尿素等，只能用G6玻璃砂漏斗過濾，但玻璃砂漏斗運用前也要在121℃下用紙包好滅菌。③試驗操作過程中，一般采納灼燒的方法對接種環進行滅菌。(2)高壓蒸汽滅菌操作的要求①滅菌前各種用品均需用牛皮紙或報紙包好，在121℃下滅菌15min，試驗過程中所需的棉花不能用脫脂棉，因為其易吸水，吸水后簡潔引起污染。②如培育基中有葡萄糖，為防止其分解碳化，要用500_g/cm2壓力(90℃以上)滅菌30min。歸納總結1.培育基的類型劃分標準培育基種類特點用途按物理狀態液體培育基不加凝固劑擴大培育或工業生產半固體培育基加少量凝固劑而呈半固體狀態視察微生物的運動、分類鑒定固體培育基加入凝固劑，如瓊脂、明膠、硅膠等微生物分別、鑒定、活菌計數、保藏菌種按功能選擇培育基允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻擋其他微生物生長培育分別特定的微生物鑒別培育基依據微生物的代謝特點，在培育基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物按化學成分自然培育基含化學成分不明確的自然物質工業生產合成培育基培育基的成分已明確分類、鑒別2.無菌操作，既包括各種器皿必需是無菌的，也包括各種培育基必需是無菌的，同時還要求在接種時，不能帶有其他雜菌，所以在試驗過程中，應時刻保持這種無菌意識。例1(2024·浙江學軍中學月考)下列關于培育基的說法，不正確的是()A.培育基配制的原則一是目的要明確，二是養分要協調、三是pH要相宜B.配制培育基時還要考慮微生物對特殊養分物質的要求，否則微生物可能不能生長或生長極差C.固體培育基中加入少量水即可制成液體培育基D.選擇培育基是允許特定種類微生物生長，但抑制或阻擋其他微生物生長的培育基答案C解析培育基配制的原則一是目的要明確，弄清培育基的所屬類型，二是養分要協調，符合目的微生物的生長需求，三是pH要相宜，A正確；有的微生物對養分物質具有特殊的要求，配制培育基時還要考慮微生物對特殊養分物質的要求，否則微生物可能不能生長或生長極差，B正確；固體培育基中去除凝固劑(如瓊脂、明膠等)即可制成液體培育基，C錯誤；選擇培育基是指在微生物學中，允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻擋其他種類微生物生長的培育基，目的是從眾多微生物中分別所須要的微生物，D正確。例2(2024·溫州高二檢測)下列關于滅菌的敘述，正確的是()A.用于細菌等微生物培育的培育基都必需用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌B.錐形瓶、培育皿、移液管等器具的高壓蒸汽滅菌時間一般為15min(121℃條件下)C.超凈工作臺或接種箱用紫外燈滅菌30min即可D.滅菌后的培育基、器具就已經達到了完全無菌答案B解析培育基通常可以進行高壓蒸汽滅菌，若培育基中有碳酸氫鈉、尿素等高溫易分解的成分，就不能用此方法，A項錯誤；超凈工作臺或接種箱用紫外燈滅菌30min，同時還需打開過濾風，C項錯誤；滅菌后的培育基、器具不肯定達到了完全無菌，而且要防止二次污染，D項錯誤。方法技巧三種常用滅菌方法的比較滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌時間滅菌后處理高壓蒸汽滅菌培育基、玻璃器皿等121℃，1kg/cm2壓力(若培育基中含有葡萄糖，為防止其碳化，90℃以上，500g/cm2壓力)15min(若含有葡萄糖，滅菌時間30min)試驗用具在60～80℃烘箱中烘干；培育基冷卻待用灼燒滅菌接種環、接種針或其他金屬用具；玻璃刮刀在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒燒紅(或玻璃刮刀上的酒精燃盡)防止過熱殺死目的菌種，冷卻后運用過濾滅菌不能加熱滅菌的化合物，如尿素培育基等G6玻璃砂漏斗過濾尿素濾液過濾完畢玻璃砂漏斗用1mol/L的HCl浸泡，抽濾去酸后蒸餾水洗至中性，干燥后保存二、細菌的培育與分別1.細菌的分別方法(1)劃線分別法：通過接種環在固體培育基表面連續劃線的操作。由于劃線過程中，接種環上的菌液漸漸削減，因此劃線最終部分的細菌間距離加大，經過培育可獲得單菌落。(2)涂布分別方法：用此法分別時，須要先將培育的菌液稀釋，通常稀釋10－5～10－7倍。取0.1mL稀釋度不同的菌液，加在培育皿的固體培育基上，用玻璃刮刀涂布在培育基平面上，然后進行培育。通常以每個培育皿中有20個以內的單菌落最為合適。(3)兩種分別法的比較：劃線分別法，方法簡潔；涂布分別法，單菌落更易分開，但操作困難些。2.大腸桿菌的培育和分別(1)試驗內容：將大腸桿菌擴大培育和劃線分別，即用LB液體培育基擴大培育大腸桿菌，培育后再在LB固體平面培育基上劃線進行分別，隨后培育基上就會形成一個個單獨的菌落。(2)試驗步驟培育基滅菌↓倒平板↓接種↓劃線分別↓培育視察↓菌種保存將50mLLB液體培育基和50mLLB固體培育基及培育皿高壓蒸汽滅菌將培育基分別倒入4個滅菌后的培育皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培育基的三角瓶中接種大腸桿菌，培育12h用接種環在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培育基的平板上連續劃線，蓋好培育皿將培育皿倒置(蓋在下面)，放在37℃恒溫培育箱中培育12～24h后，可看到在劃線的末端出現不連續的單個菌落在無菌操作下將單菌落用接種環取出，再用劃線法接種在斜面上，37℃培育24h后，置于4℃冰箱中保存

歸納總結1.劃線分別法的操作步驟2.涂布分別法的操作步驟(1)操作圖示(2)相關說明①將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101～106的依次編號。②用移液管吸取1mL培育的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。③從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復②步的混勻操作。依次類推，直到完成最終一支試管的稀釋。例3(2024·浙江效實中學期中)如圖表示利用劃線分別法分別和純化大腸桿菌的部分操作步驟，下列相關敘述正確的是()A.步驟①倒平板操作時，只須要在超凈臺中不須要在酒精燈火焰旁進行B.步驟②③運用的工具是接種環，接種前需在明火上燒紅后冷卻C.步驟④恒溫培育箱培育后的結果說明整個過程中蘸取菌液4次D.該方法使單菌落更簡潔分開，但操作困難些答案B解析即使在超凈臺中，步驟①倒平板操作時，也須要在酒精燈火焰旁進行，A錯誤；步驟②③中接種環都須要進行灼燒滅菌，即在火焰上灼燒，待冷卻后才可以蘸取菌液進行平板劃線，B正確；劃線分別法中只蘸取菌液1次，C錯誤；平板劃線法操作簡潔便利，但是單菌落不易分別，D錯誤。例4(2024·嘉興高二檢測)圖甲、圖乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關問題：(1)圖甲是利用__________法進行微生物接種，圖乙是利用______________法進行微生物接種。(2)這兩種方法所用的接種工具分別是______________和__________；在接種過程中對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是______________和酒精消毒。(3)下圖是采納上述接種方法接種后培育的效果圖解，其接種方法是________(填“圖甲”或“圖乙”)。(4)下列關于微生物培育和分別的敘述不正確的是________。A.利用圖乙所示接種法可以分別微生物但不能對微生物進行計數B.接種時連續劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落C.利用圖甲所示接種法接種過程中，每次劃線前后都要對接種環進行滅菌D.圖乙所示接種法中運用的接種工具須保存在70%的酒精中答案(1)劃線分別涂布分別(2)接種環玻璃刮刀灼燒滅菌(3)圖乙(4)A解析(1)分析圖示可知，圖甲為用劃線分別法進行微生物接種，圖乙是利用涂布分別法進行微生物接種。(2)前者利用的工具是接種環，后者利用的工具是玻璃刮刀。對于接種環而言，滅菌的操作方法是灼燒，玻璃刮刀通常浸泡在70%酒精中消毒。(3)題圖中，菌落勻稱分布，分別效果較好，是涂布分別法操作的結果。(4)采納涂布分別法，可以通過培育基表面的菌落數，對微生物進行計數，但采納該方法計數通常比實際菌落數偏低，A項錯誤。方法技巧劃線分別法與涂布分別法的比較項目劃線分別法涂布分別法原理連續劃線。由于劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次劃線從上一次劃線的末端起先，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步削減，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面，進行培育。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培育皿表面形成單個菌落操作工具接種環玻璃刮刀運用要求用時需灼燒放置在70%酒精中，用時需灼燒特點操作簡潔，但是單菌落不易分別操作困難，單菌落易分別相同點使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培育基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種1.推斷正誤：(1)純化菌種時，為了得到單菌落，常采納的接種方法有劃線分別法和涂布分別法()(2)在瓊脂固體培育基上長出的單個菌落含有多種細菌()(3)單菌落的分別是消退雜菌污染的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株最簡便的方法之一()(4)接種環在每次轉移菌種之前都須要進行高壓蒸汽滅菌，以殺滅接種環上的雜菌()(5)依據微生物對養分物質的需求，配制相應的培育基，如“細菌喜葷，霉菌喜素”，經高壓蒸汽滅菌之后還要調整pH()(6)有些化合物不能加熱，如尿素等需采納玻璃砂漏斗進行過濾滅菌，常用的有G5或G6玻璃砂漏斗()(7)培育微生物的培育基分裝到培育皿后進行滅菌()答案(1)√(2)×(3)√(4)×(5)×(6)×(7)×2.(2024·西湖區高二檢測)金黃色葡萄球菌有很強的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒。下列有關接種金黃色葡萄球菌的試驗敘述錯誤的是()A.將灼燒的接種環伸入試管內，先接觸長菌多的部位B.取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C.對接種環進行灼燒處理D.接種后還要將試管口滅菌加塞答案A解析接種環伸入試管后應先接觸未長菌的部位，待接種環冷卻后再接觸長菌多的部位。3.(2024·浙江效實中學檢測)在分別、純化大腸桿菌試驗中，劃線接種(甲)、培育結果(乙)如圖所示。有關敘述錯誤的是()A.接種前應對培育基進行高壓蒸汽滅菌B.連續劃線的目的是獲得單個細菌形成的菌落C.接種過程中至少須要對接種環灼燒5次D.甲中a區域為劃線的起始位置答案D解析培育基一般用高壓蒸汽滅菌法滅菌，A項正確；菌液經過連續劃線，菌液中的菌體越來越少，最終簡潔形成單菌落，B項正確；在每次劃線前后都要對接種環進行滅菌，因此依據圖中劃線依次(d→c→b→a)，整個劃線過程中至少須要對接種環灼燒5次，C項正確；每次劃線的菌種來自上一區域的末端，因此劃線的起始區域菌落多，由圖乙可知，甲中d區域菌落多，為劃線的起始位置，D項錯誤。4.下列關于微生物的培育和分別的敘述中，不正確的是()A.細菌能在液體培育基中以二分裂方式快速擴增B.噬菌體或大腸桿菌可在蛋白胨培育基中增殖C.滅菌的目的是殲滅與培育菌競爭的雜菌D.涂布分別法分散細菌得到單菌落的效果更好答案B解析噬菌體屬于病毒，營寄生生活，不能在蛋白胨培育基中增殖。5.大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中大約含有109個，且能夠與致病菌混雜生長。假如食品和飲用水中出現大腸桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶上致病菌，因而常將大腸桿菌的數量作為食品衛生的檢測指標之一。請據此回答下列問題：(1)測定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的數目，常用涂布分別法。該方法首先配制LB________培育基，進行高壓蒸汽滅菌后冷卻至60℃，在____________旁倒在培育皿中形成平板；對奶茶樣品進行肯定倍數的稀釋，取0.1mL奶茶稀釋液，加在培育皿的固體培育基上，用__________涂布在培育基平面上，然后進行培育；視察統計培育皿中________數目；該數據比實際數值要________(填“高”或“低”)，緣由是_______________________________________________________________________________________________________。試驗完成后須要對培育基進行________處理，然后才能倒掉。(2)若要對上述培育基中的菌種進行擴大培育，則需配制LB________培育基，滅菌后，將__________在酒精燈火焰上燒紅后冷卻，然后蘸取單菌落中的菌體接種到新的培育基中，在相宜環境中培育________h即可。答案(1)固體酒精燈火焰玻璃刮刀菌落低培育基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落滅菌(2)液體接種環12解析(1)微生物的分別通常用固體培育基。為防止雜菌污染，要在酒精燈火焰旁倒平板。在用涂布分別法分別細菌時，為了使細菌勻稱涂布在固體培育基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培育基上，通過視察菌落數推算細菌數目。培育基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落，因此視察到的菌落數可能比實際菌落數低。為了防止試驗菌污染環境，試驗完成后須要對培育基進行滅菌處理，然后才能倒掉。(2)對微生物進行擴大培育，通常運用LB液體培育基。一般用接種環轉移帶菌的培育物。接種時，先將接種環在酒精燈火焰上燒紅后冷卻，然后蘸取帶菌的培育物，接種到新的培育基中，在液體培育基中，相宜條件下培育12h。題組一微生物的養分與培育基1.要從多種細菌中分別某種細菌，培育基要用()A.固體培育基B.液體培育基C.加青霉素的培育基D.加入高濃度食鹽的培育基答案A解析分別微生物應運用固體培育基。2.牛肉膏蛋白胨培育基中加入瓊脂這一志向的凝固劑，下列關于瓊脂的說法不正確的是()A.不會被所培育的微生物分解利用，對所培育的微生物無毒害作用B.在微生物生長溫度范圍內保持固體狀態C.瓊脂凝固點低，利于微生物的生長D.瓊脂在滅菌過程中不會被破壞，透亮度好，凝固力強答案C解析在液體培育基中加入凝固劑如瓊脂后，制成瓊脂固體培育基，它是試驗室中最常用的培育基之一，固體培育基中可形成肉眼可見的單個細胞繁殖而來的子細胞群體，即菌落，用于微生物的分別、計數和菌種鑒定等。瓊脂作為一種志向的凝固劑，是由其性質確定的，瓊脂不會被微生物利用且對微生物無毒害作用，在滅菌過程中不會被破壞，透亮度好，凝固力強。瓊脂在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，所以在微生物生長溫度范圍內保持固體狀態。題組二無菌操作3.下列操作與消毒滅菌無關的是()A.接種前用肥皂清洗雙手，再用酒精擦拭雙手B.接種前用火焰灼燒接種環C.培育基在60℃左右時擱置斜面D.在酒精燈的火焰旁完成倒平板的操作答案C4.培育微生物時必需進行無菌操作，下列消毒滅菌方法中，常用于各種器皿滅菌的是()A.70%酒精浸泡 B.紫外線照耀C.高壓蒸汽法 D.5%次氯酸鈉溶液浸泡答案C解析玻璃刮刀采納70%酒精浸泡消毒；殺滅空氣中的微生物常采納紫外線照耀；各種器皿通常采納高壓蒸汽滅菌法滅菌；5%次氯酸鈉溶液浸泡常用于植物切段消毒。5.防止雜菌入侵，獲得純凈的培育物，是探討和應用微生物的前提。下列敘述錯誤的是()A.試驗室里可以用紫外線或化學藥物進行消毒B.接種環、接種針等金屬用具，干脆在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌C.在試驗室中，切不行吃東西、喝水，離開試驗室時肯定要洗手，以防止被微生物感染D.運用后的培育基丟棄前肯定要進行滅菌處理，以免污染環境答案B解析對接種環等金屬用具進行灼燒滅菌，應放在酒精燈火焰的充分燃燒層即外焰處。題組三大腸桿菌的培育與劃線分別6.(2024·湖州一中期末)下列有關劃線分別操作的敘述，錯誤的是()A.必需運用固體培育基B.必需在酒精燈火焰旁接種C.必需將接種后的培育皿倒置培育D.必需將接種前的培育皿、培育基、待分別微生物等進行滅菌處理答案D解析用劃線分別法分別微生物，必需采納固體培育基，A項正確；劃線分別和涂布分別操作都須要在酒精燈火焰旁進行，以防止雜菌污染，B項正確；劃線分別和涂布分別接種操作后，須要將培育皿倒置，以防止皿蓋上的水滴滴入培育基造成污染，C項正確；分別操作前需對培育基和培育皿等滅菌，但是待分別微生物不能進行滅菌處理，D項錯誤。7.(2024·金華模擬)要篩選得到純凈的菌種，通常在固體培育基上劃線分別，下列操作正確的是()A.每次劃線時，接種環都需蘸菌液一次B.劃線分別時，須要把接種環深化到培育基中進行接種C.在超凈臺中接種時要在酒精燈火焰旁進行D.劃線分別后將培育皿正放在恒溫培育箱中培育答案C解析采納劃線分別時，菌種只蘸取一次，A項錯誤；劃線分別時，接種環在培育基表面進行劃線操作，B項錯誤；微生物培育的關鍵是無菌操作，因此，在超凈臺上接種時，須要在酒精燈火焰旁進行，以防止空氣中微生物的污染，C項正確；劃線分別結束后，應將培育皿倒置于恒溫培育箱中培育，D項錯誤。8.下列劃線分別的圖解中，正確的是()答案C解析劃線分別的劃線有很多要求。A的劃線方法不對，而B錯在劃線2的起點，D項錯在4與1交叉了。題組四涂布分別法9.漆酶屬于木質素降解酶類，在環境修復、農業生產等領域有著廣泛用途。下圖是分別、純化和保存漆酶菌株的過程，相關敘述正確的是()A.生活污水中含有大量微生物，是分別產漆酶菌株的首選樣品B.篩選培育基中須要加入漆酶，通過菌落特征挑出產漆酶的菌落C.在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化D.斜面培育基中含有大量養分物，可在常溫下長期保存菌株答案C解析漆酶降解木質素，則漆酶菌株多存在于木質素含量豐富的場所，生活污水中含有大量微生物，但不肯定含有產漆酶的菌株，A項錯誤；產漆酶菌株可降解木質素，可在篩選培育基中加入木質素來篩選產漆酶的菌株，篩選時可通過菌落特征挑出產漆酶的菌落，B項錯誤；在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化，C項正確；斜面培育基應在4℃環境下保存，D項錯誤。10.涂布分別法是微生物培育中的一種常用的接種方法。下列相關敘述錯誤的是()A.操作中須要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培育基表面C.不同濃度的菌液均可在培育基表面形成單個的菌落D.操作過程中對培育基和涂布器等均需進行嚴格滅菌處理答案C解析涂布分別法包括系列稀釋和涂布平板兩個過程，涂布平板之前須要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋，A項正確；涂布平板時，須要將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培育基表面，B項正確；只有稀釋度足夠大的菌液才能在培育基表面形成單個的菌落，C項錯誤；操作過程中對培育基和涂布器等均需進行嚴格滅菌處理，以防止雜菌污染，D項正確。11.(2024·江蘇，31節選)酵母的蛋白質含量可達自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業廢甲醇作為碳源進行培育，這樣既可削減污染又可降低生產成本。探討人員擬從土壤樣品中分別該類酵母，并進行大量培育。下圖所示為操作流程，請回答下列問題：(1)配制培育基時，依據培育基配方精確稱量各組分，將其溶解、定容后，調整培育基的________，剛好對培育基進行分裝，并進行____________滅菌。(2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培育皿中，在步驟③中將溫度約______(在“25℃”“50℃”或“80℃”中選擇)的培育基倒入培育皿混勻，冷凝后倒置培育。(3)挑取分別平板中長出的單菌落，按步驟④所示進行劃線。下列敘述合理的有____________(多選)。a.為保證無菌操作，接種針、接種環運用前都必需滅菌b.劃線時應避開劃破培育基表面，以免不能形成正常菌落c.挑取菌落時，應挑取多個菌落，分別測定酵母細胞中甲醇的含量d.可以通過逐步提高培育基中的甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株答案(1)pH高壓蒸汽(濕熱)(2)50℃(3)a、b、d解析(1)配制培育基時，進行計算、稱量、溶解、定容后，需先調pH再分裝到錐形瓶中進行高壓蒸汽滅菌。(2)倒平板時的培育基溫度約為50℃，冷凝后倒置培育。(3)平板劃線時，接種針、接種環運用前和每次劃線后都須要進行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染，a正確；劃線時不能劃破培育基表面，否則不能形成正常菌落，b正確；挑取菌落時，應挑取多個不同的菌落，分別測定酵母細胞中蛋白質含量，c錯誤；逐步提高培育基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，d正確。12.下列是有關大腸桿菌的培育試驗，請回答問題：(1)配制培育大腸桿菌的培育基時，依據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培育基中加入蛋白胨和__________作為養分物質，為維持肯定的滲透壓，常需加入肯定量的__________________。(2)大腸桿菌培育和分別的試驗中，在________________中進行擴大培育，培育液經________后，在LB固體培育基上進行__________，并將培育皿____________放在恒溫培育箱中培育，可以獲得如圖效果。(3)通常可以依據__________的形態、大小等特征對獲得的純菌種進行初步的鑒定。(4)下列關于“大腸桿菌培育和分別”的操作中，敘述正確的是________。A.高壓蒸汽滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種工具經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D.用記號筆標記培育皿中菌落時，應標記在皿底上答案(1)酵母提取物NaCl(2)LB液體培育基稀釋涂布分別倒置(3)菌落(4)D解析(1)配制培育大腸桿菌的培育基時，依據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培育基中加入蛋白胨和酵母提取物作為養分物質，為維持肯定的滲透壓，常需加入肯定量的NaCl。(2)大腸桿菌培育和分別的試驗中，在LB液體培育基中進行擴大培育，培育液經稀釋后，在LB固體培育基上進行涂布分別，并將培育皿倒置放在恒溫培育箱中培育。(3)通常可以依據菌落的形態、大小等特征對獲得的純菌種進行初步的鑒定。(4)高壓蒸汽滅菌加熱結束，等待壓力表指針回