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菌種凍存方法甘油冷凍管保存法用無(wú)菌接種環(huán)刮取平板或瓊脂斜面的培養(yǎng)物，放入裝有無(wú)菌純化水的試管中，通過(guò)接種環(huán)與試管壁間的摩擦，使細(xì)菌充分?jǐn)U散到純化水中，制備成菌懸液。向已制備好的菌懸液中加入等體積的無(wú)菌甘油（濃度20%），即為10%甘油菌懸液，輕輕振搖，充分混合后，分裝于無(wú)菌小試管或凍存管，冷凍保存。液體石蠟保存法1無(wú)菌液體石蠟的制備選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟，121℃30min壓力蒸汽滅菌后，置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分，備用。2液體石蠟管的制備將菌種穿刺接種于半固體高層培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)結(jié)束后，用無(wú)菌吸管吸取上述無(wú)菌液體石蠟至培養(yǎng)好的菌種管內(nèi)，并使石蠟高出菌種表面約1cm，使菌體與空氣隔絕，并將試管直立，置于-20℃冷凍或冷藏保存。真空冷凍干燥法準(zhǔn)備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，可用長(zhǎng)頸球形底安瓿管或管狀安瓿管，將安瓿管清洗干凈，烘干，管口塞好脫脂棉塞，121℃滅菌30min，備用。菌懸液的制備及分裝在無(wú)菌條件下，用2mL～3mL脫脂牛乳將生長(zhǎng)良好的純菌培養(yǎng)物從斜面上洗脫下來(lái)，制成菌懸液，分裝入安瓿管，每支安瓿管分裝0.1mL～0.2mL。預(yù)凍-80℃預(yù)凍1h～2h。冷凍干燥將冷凍后的安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi)，開(kāi)始冷凍干燥，時(shí)間一般為8h～20h。終止干燥時(shí)間根據(jù)下列情況判斷：a)安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀；b)真空度接近空載時(shí)的最高值；c)選用1～2支對(duì)照管，其中加水與菌懸液同量，若對(duì)照管中水份已干燥，視為干燥完結(jié)。WS/T683—2020封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管繼續(xù)抽氣，約10min即可達(dá)到26.7Pa（0.2mmHg）。于真空狀態(tài)下，以煤氣噴燈的細(xì)火焰在安瓿管頸中央進(jìn)行封口。保藏安瓿

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