1997年，我國政府首次批準商業化種植轉基因抗蟲棉。到2015年，我國已育成轉基因抗蟲棉新品種100多個，減少農藥用量40萬噸，增收節支社會經濟效益450億元。你知道轉基因抗蟲棉抗蟲的機制是什么嗎?

P77從社會中來轉基因抗蟲棉與普通棉花

.

表達Bt基因Bt基因

重組DNA

分子

抗蟲棉

4.目的基因的體的構建基因表達載2普通棉花

(無抗蟲特性)3.將目的基因導入受體細胞導入

棉花細胞1.目的基因的篩選與獲取蘇云金桿菌與載體拼接提取第3章基因工程第2節基因工程的基本操作程序高二生物組本節主要解決的困惑1.利用PCR獲取和擴增目的基因2.基因表達載體的構建過程原核細胞真核細胞不同點編碼區是連續_

的編碼區是間隔

的、不連續的相同點都由能夠編碼蛋白質的編碼區和具有調控作用的非編碼區組成的編碼區：編碼蛋白質的合成非編碼區：不能編碼蛋白質，調控遺

傳信息的表達包括：編碼區上游編碼區下游非編碼區非編碼區編碼區(轉錄區)啟動子終止子非編碼區→非編碼區編碼區(轉錄區)啟動子終止子轉錄

轉錄起點

終點原核細胞基因的結構示意圖轉錄

轉錄起點

終點真核細胞基因的結構示意圖知識回顧1:基因的結構知識回顧1:基因的結構名稱功能位置序列特征轉

錄

因

子

結

合對

g

e

n

e

表

達

的

影

響啟動子啟動gene的轉錄gene的5'端上游具有特定的序列特征，如

原核生物的啟動子具有-10和-35區域，終止子

具有特定的終止信號與RNA聚合酶及其他轉錄因子結合正向調控gene表達終止子終止gene的轉錄gene的3'端下游不需要負向調控gene表達內含子在轉錄后被剪接掉，

不參與編碼蛋白質gene內部，被外顯子分隔內含子通常在5’和3'端具

有剪接位點，而外顯子則包含編碼序列不需要兩者兼有外顯子編碼蛋白質的序列，轉錄后保留在mRNA

中gene內部，編碼區域的一部分不需要兩者兼有增強子增強特定gene的轉錄

活性可以位于gene的任何位置，包

括上游、下游或內部含有特定的調控序列，可

以與轉錄因子結合與增強子結合蛋白(如轉錄激huo因子)

結

合正向調控gene表達沉默子降低特定gene的轉錄活性可以位于gene的任何位置，包括遠高gene的區域與沉默因子結合負向調控gene表達需要細胞提供能量需要解旋酶的作用結果：氫鍵斷裂，雙鏈打開游離的脫氧核苷酸5'DNA解

旋

酶合成子鏈21=2#

#

Z2=4知識回顧2:DNA的復制過程DNA聚

合

酶新合成的子鏈DNA

聚

合

酶#####z2=8解

旋知識回顧3:基因的表達細胞質細胞核內含子

外顯子轉錄RNA

加

工AAAAAAAA翻譯DNAmRNA蛋白質真核細胞與原核細胞中基因表達過程示意圖mRNAmRNA蛋白質DNARNA轉錄翻譯1轉錄時，DNA鏈完全解開嗎?整個DNA都轉錄邊解旋邊轉錄?轉錄不是轉錄整個DNA,是轉錄其中要表達的基因，以基因的一條鏈為模板，2不同基因的模版鏈是否相同?3.同種生物的不同細胞中，由于基因的選擇性表達，mRNA的種類和數量

一般是不相同的，但tRNA和rRNA的種類一般沒有差異。基因B點撥提升13'5'基因A不同基因模板鏈不同模板鏈

非模板鏈5'3'基因C深度思考【思考1】:如果把一個真核生物的基因導入原核細胞中表達，

一

定會產生原來的蛋白質嗎?①原核生物細胞里沒有相應的

酶

來去除內含子；②原核生物沒有真核的蛋白質

加工系統(如內質網、高爾基

體

等

)真核基因：編碼區(外顯子+內含子)前

體mRNA一般不能產生原來的蛋白質內含子

外顯子

內含子

外顯子MMM轉錄相應酶去除內含子成

熟mRN

成熟翻譯

mRNAA

Eise加工蛋白質多肽鏈深度思考【思考2】:如果把真核基因導入原核細胞中表達，不考慮蛋白質加工的

問題，如何產生與原來結構相同的蛋白質?內含子

外顯子

內含子外顯子代

nWnwwwn

真核基因：編碼區(外顯子+內含子

轉錄

轉錄前

體mRNA這種雙鏈DNA

是不含內含子

的

DNA,

叫

做cDNADNA雙鏈相應酶

去除內含子成熟mRNA把真核基因的cDNA

導入到原核細胞中表達。提

取mRN

逆轉錄酶DNA

酶

單鏈

單

鏈與生物抗逆性相關的基因

(Bt

抗蟲基因)與優良品質相關的基因與生物藥物和保健品相關的基因(

胰島素、干擾素基因)與毒物降解相關的基因與工業用酶相關的基因等(

一

)

從基因文庫中獲取；3.目的基因獲取方法：

(二)通過DNA合成儀直接合成；(三)利用PCR技術擴增；寰目的基因的篩選與獲取1.

目

的

基

因：在基因工程的設計和操作中，用于改變受體細胞性狀或得預期表達產物等的基因，主要指的是編碼蛋白質的基因，也可以是一些具有調控作

用的因

子。涵：心12.

實

例

：①O霧(一)從基因文庫中獲取目的基因

(未知序列)1.

基因文庫概念：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導入到受體菌的群體中

儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。2.

基因文庫類型：

基因組文庫

(包含一種生物的所有基因)部分基因文庫(包含一種生物的一部分基因)(cDNA文庫)某種生物某個時期的mRNA反轉錄cDNA與運載體連接導入受體菌群體部分基因文庫

(cDNA

文庫)某生物體內全部DNA限制酶許多DNA片段與運載體連接導入受體菌群體基因組文庫(二)人工合成目的基因(已知序列)1.

前提：基因比較小、核苷酸序列已知2.

方法：通過DNA合成儀用化學方法直接合成目的基因DNA

合

成

儀DNA復制所需的基本條件參與的組分在DNA復制中的作用解旋酶(體外用高溫代替)打開DNA雙鏈DNA兩條母鏈提供DNA復制的模板4種脫氧核苷酸合成DNA子鏈的原料DNA聚合酶催化合成DNA子鏈與兩條母鏈結合的2種引物使DNA聚合酶能夠從引物3′端連接脫氧核苷酸作用1.

概

念

：PCR

是聚合酶鏈式反應的縮寫。它是一項根據DNA半保留復制的原理，在體外提供參與DNA復制的各種組分

與反應條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術。2.方式：

以指數方式擴增，即_

2

n_(n為擴增循環的次數)困惑點一：利用PCR獲取和擴增目的基因3.條件：思考以下問題，小組合作交流，派代表展示成果，時間3min。(1)什么是引物?

DNA復制時為什么需要引物?是指兩段與待擴增的DNA序列互補的一小段DNA或RNA。在DNA

擴增時，DNA

聚合酶不能從頭開始合成DNA,只能從引物的3′端延伸(1

)

設計一對與目的基因兩側的部分脫氧核苷酸序列互補配對的引物

(

保證以DNA的兩條鏈為模板進行擴增):①為方便構建重組質粒，需在引物5'端添加適當的限制酶的識別序列/酶切位點

；②為保證目的基因與載體正向連接，常在兩種引物上設計不同的酶切位點；③為避免引物自身折疊，設計引物時需避免引物之內部形成堿基互補配對。④為避免引物自連，設計引物時需避免引物之間形成局部堿基互補配對。PCR過程中，DNA雙鏈解開是在高溫下完成的，不需要解旋酶；由于PCR過程溫度較高，所以需要能耐高溫的DNA

聚合酶。合作交流探究要求：4.利用PCR

獲取和擴增目的基因過程3'

85°℃a變性(90℃-95℃):雙鏈DNA模板在熱作用下，

氫鍵

斷裂，形成單鏈DNAb.

復性

(復性55℃-60℃):系統溫度降低，引物與DNA模板結合形成局部雙

鏈50℃

(5)復性溫度與設計的引物(長度、堿基組成)有關：①

長度相同但G—C

含量高的引物需要設定的復性溫度較高;②若復性溫度過高，則會破壞引物與模板的結合，

可

能

導致PCR

反應得不到任何擴增產物。Taq酶引

物

1

退火溫度低會造成非特異性條帶72℃c

.

延

伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下，合成與模板互補的

DNA

鏈_。Taq酶引物2DNA

引

物比較項目細胞內DNA復制PCR技術區

別解旋方式解旋酶催化DNA在高溫下變性解旋場所主要在細胞核內細胞外(主要在PCR擴增儀內)酶解旋酶、DNA聚合酶等熱穩定的DNA聚合酶(Taq酶)溫度細胞內溫和條件控制溫度，需在不同溫度下進行結果合成整個DNA分子擴增特定的DNA片段或基因聯系①模板：均需要脫氧核苷酸雙鏈作為模板②原料：均為四種脫氧核苷酸(dATP、dTTP、dGTP、dCTP)③酶：均需DNA聚合酶④引物：都需要引物，使DNA聚合酶從引物開始進行互補鏈的合成知識小結：PCR

技術與細胞內DNA復制的比較5'72℃左右，新DNA合成3'5'5’5'3'5'3'[5'90℃以上，

DNA

雙鏈解開

50℃左右，引物與DNA

結合5'第一次循環5'5'高溫變性、低溫復性第二二次循環3'5'3'5'第

一

次

循

環3'5'高溫變性、低溫復性中

溫

延

伸中

溫

延

伸DNA

變性再與引物復性

合成DNAetc.ete.etc.etc.etc,etc.etc.etc.樣

品DNA

變

性

再與引物復性引物引物待擴增的DNA(2)圖形顯示一輪循環產生的子鏈長度小于模板鏈的長度，到第三輪循環時，才開始出現2個兩條脫氧核苷酸鏈等長的子代DN

A。DNA

變

性再與引物復性

合成DNA合

成DNA弟

T牝

發

制(Z

東

從

鏈

廠

第

乙

牝

發

制

(4

東

從

鏈

廠

第

○

機

友

制

0

示

從

旺復

制

次

數工23D

N

A

分

子

數248含

引

物

的D

N

A

分

子

數248含

其

中

一

種引

物

的

D

N

A

分子數1=21-13=22-17=23-1同

時

含

兩

條

引

物

的

D

N

A

分子數0=21-22=22-26=23-2共

消

耗

引

物

的分子數2=22-26=23-214=2?-2含

脫

氧

核

苷酸

鏈

等

長

的

D

N

A

分

子

數0=21-20=22-42=23-6點撥提升1:PCR中的數量關系例

1

6

利用PCR

將某小段含目的基因的

DNA分子擴增循環n

次，則

BA.

需要已知目的基因的全部序列以便設計引物B.共需2"+1-2個引物參與子代

DNA

分子的合成C.應向反應體系中加入解旋酶、

DNA

聚合酶、緩沖液等D.

理論上第4輪循環產物中含兩種引物的DNA

片段占15/16

解析

?只需要已知目的基因兩端的序列便可設計引物，

A錯

誤；擴增循環n

次，需一種引物的數量為2”-1,常規

PCR

共需

兩種引物的數量為2×(2”-1)=2"+1-2,B

正確；不需向PCR的反應體系中加入解旋酶，C

錯誤；理論上第4輪循環產物中含兩種引物的

DNA

片段占(2?-2)/16=7/8,D錯誤。答案?B學以致用1表達特定性狀位于基因的首端，是RNA聚合酶結合位點，

基因轉錄的開始位于基因的末端，終止轉錄檢測目的基因是否導入受體細胞(

抗生素抗性基因)e、復制原點：

DNA聚合酶結合位點2.基因表達載體的構建過程困惑點二：基因表達載體的構建(

核

心

)探究要求：

合作交流

思考基因表達載體的組成的相關問題，小組合作交流，派代表展示成果，時間3min。a.目的基因b.啟動子c.終止子d.

標記基因表達載體終止子復制原點抗生素基因1.基因表達載體的組成插人基因啟動子啟動子、2.基因表達載體的構建過程質粒標記基因--(1)用一定的限制酶

切割質粒，使其出現一個切口，露出黏性末端。(2)用同一種限制酶

切斷目的基因，使其產生

相同的黏性末端_。終止子目的基因復制原點限制酶切割位點C限制酶

獲取目的基因D

連接酶重組

DNA

分子限制酶基因表達載體構建模式圖(3)再加入適量DNA

連接酶，將切下的目的基因片段插入質粒的切

口處，形成了一個重組DNA

分子(重組質粒)。限制酶切割位點DNA連

接

酶重組DNA分子連接酶重組DNA

分子

(重組質粒)DNA分

子限制酶處理兩個切口獲得目的基因目的基因限制酶切割位點限制酶質粒同

種一個切口兩個黏性末端2.基因表達載體的構建過程啟動子

、標記基因一限制酶切割位點終止子獲取目的基因復制原點限制酶質粒【思考1】使用一種DNA

限制酶進行切割，是否只會得到目的基因與載體結合的這一種重組DNA?目的基因自連自連片段間的

質粒與質粒連接載體

連接目的基因與目的基因連接質粒自連目的基因與質粒連接目的基因L22深度思考211'2'212'深度思考【思考2】如何防止目的基因和質粒的自身環化以及目的基因的反防止質粒重新環

化防止質粒與目的基因反向連接防止目的基因自

身環化向連接?EcoR

I8g/nG自的基因(4

AGRAGA

…終止子oeCCTTAAG.雙酶切表達載體表達載體…6復制原點復制

原點EcoR

IBglⅡ生基因①

載體與表達載體的區別：二者都有標記基因和復制原點兩部分DNA片段。表達載體在載體基礎上增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結構。②

工具酶：

限制酶、

DNA連接酶兩種酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵。③啟動子、終止子對于目的基因表達必不可少。④目的基因不能單獨進入受體細胞，

必需以表達載體的方式攜帶進去。游離的DNA片段進入受體細胞，一般會直接被分解，就算可以進行轉錄并翻譯成蛋白

質，游離的DNA片段也無法隨著細胞分裂而進行復制，導致子代細胞中不再含有目的基因。若將目的基因插入載體，由于載體可以在細胞內復制，隨著細胞分裂，

載體會帶著目的基因存在于每個子代細胞中。這

樣

，基因工程才有意義。點撥提升2且

的

越

因切

因方向宣露粒

壓

粒復原

點未導入、晶

命

覆I

·螺擬

核

DN大

腸

桿

菌

2圖

4

.

2

0

亞

組

質

粒子A

大腸桿首茜中并進行飾選載體上的標記基因一般是某種抗生素的抗性基因，

而受體細胞沒有抵抗該抗生素的能力。將含有某抗生素抗性基因的載體導入受體細胞，抗性

基因在受體細胞內表達，受體細胞對該抗生素產生抗性。在含有該抗生素

的培養基上，

能夠生存的是被導入了載體的受體細胞。(1)

大

腸

桿

菌1:

未

吸

收任何質粒。(

2

)大

腸

桿

菌2:

吸收

了

重

組質

粒

。(3

)天

腸

桿

菌3

:

吸

收了空

質粒。點撥提升3:重組載體的篩選原

點魯十啟

眼終止上。制n的1制n2擬二大

腸桿擬

核NA菌

1窟

檢雙

華限

n

是的

因am2核IN菌

3復

制

原重組

質大

腸

桿庭動DN粒制粒粒切切息質點吉鹵的(2)藍白斑篩選法：這種方法是目前實驗至經常使用的方法，原理說起來有點麻煩，但

操作很簡單。我們選用的質粒，除了有Amp2外，還有一個LacZ

基因。

LacZ

基因編碼的

β-半乳糖苷酶，該酶可以將X-gal

降解為X和gal

。X-gal

就是5-溴-4-氯-3-吲哚-

β-D-

吡喃半乳糖苷。X-gal

本身無色，被β

-半乳糖苷酶水解得到5-溴-4氯-3-羥基-吲哚和

半乳糖。5-溴-4-氯-3-羥基-吲哚本身無色，但在空氣中會自發二聚并氧化為5,5'-二溴-4,4'-

二氯靛染料，是一種不溶的深藍色產物。半乳糖本身無色。我們的目的基因一定要插入LacZ基因的內部，即由于目的基因的插入，要將LacZ

基

因破壞掉。這樣，我們只需要將得到的大腸桿菌涂布在含有氨芐青霉素以及X-gal

的培養

基上：①大腸桿菌1被氨芐青霉素殺死了；②大腸桿菌2由于LacZ

基因已經被破壞了，所以無法降解X-gal,形成白色的菌落；③大腸桿菌3由于沒有目的基因插入，

LacZ

基因可以表達，所以可以降解X-gal,

形成藍色的菌落，如圖24.21所示。其次，如何區分大腸桿菌2和大腸桿菌3的問題。我們常用的做法有兩種：雙抗篩選法和藍白斑篩選法。(1)雙抗篩選法：這種方法是傳統的方法，其原理很簡單，操作稍麻煩。我們選用的質

應，除了有Am?外，還有一個抗生素的抗性基因，如四環素的抗性基因TeP

。

將我們的

的基因插入其中一個標記基因的內部，如Te2基因的內部。由于目的基因的插入，導致

Te2

基因被破壞了，也就不再能夠賦予宿主細胞抗四環素的能力了。所以現在的情況是：①大腸桿菌1既不能抗氨芐青霉素，也不能抗四環素；②大腸桿菌2只能抗氨芐青霉素；③大腸桿菌3既能抗氨芐青霉素，也能抗四環素。所以我們可以把得到的大腸桿菌涂布在含有氨芐青霉素的培養基上，大腸桿菌1無法生長，得到的菌落是大腸桿菌2或大腸桿菌3。然后我們把這些菌落原位轉印到含有四環

素的培養基上，有些菌落可以生長(大腸桿菌3),有些菌落無法生長(大腸桿菌2)。我們

需要的就是在氨芐青霉素的培養基上可以生長而在四環素的培養基上無法生長的那些大腸

桿菌。藍色菌落舍掉，白色菌落有的是需要的菌落，有的并不是所需菌落，所以后續一般還需要PCR等方式確認。我

們

需

要

的是大腸桿

菌

2,

那么

如

何將大腸

桿菌1和大腸桿菌3

淘

汰

掉

?首

先

,我們

要把大腸桿菌1和大腸桿菌2

以及大腸桿菌3

進行區分。這

個很簡單

的,因

為

我們的質粒上攜帶有標記基因，如圖24.20中

所

示的氨芐

青霉

素

的抗

性

基因AmpR。這個

基

因

的

存在

，就可以賦

予它的

宿主細胞

一

種能夠

多抵抗氨芐青霉素

的

能力

,

即能

夠在含有的

能

力

。

所

以

我

們

可

以

把

得

到

的

全

部大

腸

桿

菌

稀

釋

涂

布

在

含

有桿

菌

1

無法

生

長

，

生

長

出

來

的

菌

落

不是大腸

桿

菌2就是大腸芐青

p

的*

菌

3的

培

培

養霉

選。生

大養

基基

上長

腸素

擇上

，學以致用21.如圖是利用基因工程技術培育轉基因植物，生產可食用疫苗

的部分過程示意圖，其中PstI

、Smal

、EcoRI

、Apal

為四種

限制酶。下列說法錯誤的是(

C)A.

圖示對質粒和目的基因切割用到了兩種限制酶B.

抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細胞篩選出來C.構建基因表達載體時需要用到限制酶Sma

1D

.

除圖示組成外，表達載體中還應該含有啟動子和終止子等結構PstI

Smal抗原基因質粒EcoRIPstlSmal

EcoRI

Apal含抗原基

因的DNA抗卡那霉

素基因表達

載體1.轉

化

：目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩

定

和表達_

的過程將目的基因導入

農桿菌轉化法(最多)植物細胞花粉管通道法2.方

法

將

因胞導入

一顯微注射將

基因導入

感受態細胞(Ca+

處理)微生物細胞目的法細基動目第三步：將目的基因(重組質粒)導入受體細胞

探究要求：

合作交流

思考有關轉化的相關問題，小組合作交流，派代表展示成果，時間3min。使用Ca2+

處理可使細胞處于一種能吸收周圍環境中DNA

分子的生理狀態。

(感受態細胞)過程Ca2+處

理

感受態

表達載體與感受細胞

細胞

態細胞混合微生物作為受體細胞的優點：繁殖快，單細胞，遺傳物質相對較少

，易于培養操作Ca2+轉化法(導入微生物)感受態細胞吸

收DNA分子為什么常選用受精卵作為受體細胞呢?取受精卵

顯微注射

胚胎移植①體積大，易操作。②全能性高，易培養成完整個體。操作程序：提純基因表達載體顯微注射法(導入動物細胞)病毒介導法(主要用于導入動物細胞)科學家也用病毒DNA與目的基因一起構建的載體，去感染受體動物

細胞，也能使目的基因導入動物細胞內。如用腺病毒載體，搭載新冠

病毒S基因，進入人體內，使人體產生對S蛋白的免疫記憶。Htecu

naW1Veool腺

病

毒

包

裝

腺病毒感染細

胞0會Cehct

bat

ce10

dsy三

AdenoinesHest-cels△mNcalntegrabaoCAuF日↓△①用微量注射器將含目的基因的

DNA溶液直接注入子房中

；②在植物授粉后一定時間內，

剪去柱

頭，將DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通過花粉管通道進入胚囊。花粉管通道法(我國獨創)適用生物：開花植物農桿菌轉化法

農桿菌細胞內含有的Ti質粒上的T-DN

A

可轉兩次轉化移至受體細胞，并且將其整合到該受體細胞染

色體DNA

上目的基因兩次拼接將目的基因插入

染色體的DNA中植物組織培養T-DNA構建基因表達載體(Ti質

粒

)轉入重組

農桿菌

Ti質粒表現出新性

狀的植株導入植物細胞

、知識小結：受體細胞的選擇①轉基因植物用

體細胞(葉、芽、根)或受精卵

;②轉基因動物用

受精卵(一般不能用體細胞);

原因是：受精卵有發育的全能性

。③微生物常用大腸桿菌、酵母菌

等。微生物作為受體細胞的優點

是_繁殖快，單細胞，遺傳物質相對較少，易于培養操作

_。④要合成糖蛋白、有生物活性的分泌蛋白等則受體細胞為真核細胞

原因是_

分泌蛋白等需內質網、高爾基體等的加于⑤一定不能用哺乳動物成熟的紅細胞，原因是

無核，無器，不能合成蛋白質

。細胞種類植物細胞動物細胞微生物細胞常用方法農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法顯微注射技術Ca2+處理法受體細胞體細胞或受受精卵原核細胞轉

化

過

程精卵以農桿菌轉化法為例：將

目

的

基

因

插入

T

i

質

粒

的T

-

D

N

A

上

→

農

桿菌

→

導

入

植

物

細

胞

→

整

合

到受

體

細

胞

的

D

N

A上→表達將含有目的基因的表達載體

提純→取受精

卵→顯微注射→受精卵發育

→獲得具有新性狀的動物Ca2+處理細胞

→感受態細胞→重組表達載體與感受態細胞混合→感受態細胞吸收DNA分子基因槍技術：又被稱為生物彈道技術

或微粒轟擊技術，是用火

藥爆炸或者高壓氣體加

速將包裹了DNA的球狀金

粉或者鎢粉顆粒直接送

入完整的組織或者細胞

中的一種技術。它是基

因轉移技術中的一種方

法。其基本原理就是采用一

種微粒加速裝置，使裹著

外源基因的微米級的金

或鎢(它們比重大，而且

化學性質都很穩定)顆粒

獲得足夠的動量打入靶

細胞或組織。目的基因導入受體細胞點撥提升41.在將目的基因導入受體細胞的相關操作中，敘述正確的是(

A.導入植物細胞時均采用農桿菌轉化法B.轉基因動物的獲得多數運用基因槍法C.大腸桿菌作為受體細胞時通常需要使用Ca2+

處理D.導入目的基因的動物受精卵在培養液中發育成轉基因動物學以致用3定?2.是否可以確定目的基因一定能夠進行表達?3.是否可以確定得到了新的性狀?不一定!按前面三個步驟進行了操作，1.是否可以確定目的基因進入了受體細胞并能維持穩如何判斷?目的基因

轉

錄

是

否

插

入mRNA翻譯蛋白

質

個

體類型檢測內容方法結果顯示分子水

平檢測目的基因是否插入受體細胞染色體的DNA上DNA分子雜交技術(DNA和DNA之間)是否顯示出雜

交帶(分子探

雜交后顯是否轉錄出mRNA分子雜交技術(DNA和mRNA之間)同上(分子探

雜交后顯是否翻譯出蛋白質抗原一抗體雜交同上個體水平鑒定包括抗蟲或抗病的接種實驗，以確定是否有抗性以及抗

性程度；基因工程產品與天然產品進行活性比較，以確

定功能是否相同等第四步：目的基因的檢測與鑒定針

與DNA

示出來)針

與mRNA

示出來)知識拓展：基因探針(1)定義：是一段帶有檢測標記(

熒光或同位素標記),且順序已知的，與目的基因能互補的核酸序列

(DNA或RNA)。(2)特點：①應是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理成單鏈。②應帶有容易被檢測的標記。它可以包括整個基因，也可以僅僅是

基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之轉而來的RNA。(3)核酸雜交：互補的兩條核酸單鏈通過復性形成雙鏈的過程。可以用于檢測目的基因：將待測DNA與目的基因探針混合，

如果發生了核酸雜交，則說明有目的基因。①

.檢測轉基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因方法1:

PCR擴增

原理：

DNA半保留復制方法2:

DNA分子雜交技術

原理：

堿基互補配對基本思路：1.制作出與目的基因序列相同的有同位素標記的DNA片段

(基因探針),

并

用PCR擴增

；2.提取受體細胞全部DNA并用PCR擴增，與基因探針置于同一培養液；3.

高溫變性處理，使之全部變為單鏈，觀察是否出現雜交DNA片段。第四步：目的基因的檢測