任務一器官培養（一）莖段培養

任務二器官培養（二）植物的再生培養

任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養常見植物組配方法與易發問題處理項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務一器官培養（一）

一般掌握離體根培養的取材部位和培養基的選擇；掌握莖尖培養的種類和操作步驟；掌握莖段培養中材料的選擇、處理及培養基的調整；知識目標123能夠根據不同植物及種類選擇合適的外植體進行啟動培養；能夠根據不同的植物器官及器官狀態，選擇合適的滅菌劑和適宜的滅菌時間，對外植體進行表面處理與滅菌；會通過觀察試管苗的長勢，大體判斷采取何種措施改善培養條件；熟練外植體滅菌的工藝操作流程；熟練各種試管苗繼代培養過程中的切割方式與技術；熟練無菌操作技術。技能目標123456學習提示多動手，勤實踐；多比較，多聯想，勤歸納；手、口、腦并用，學做合一。理論閱讀

植物器官培養主要是指離體的根、莖、葉、花器和果實、種子的無菌培養，是植物組織培養中最主要的一個方面。植物器官培養不僅是研究器官生長、營養代謝、生理生化、組織分化和形態建成的最好材料和方法，而且具有重要的應用價值。理論閱讀實際應用

植物器官培養可利用莖、葉和花器培養建立的試管培養物，進行名優特新品種的快速繁殖；利用莖尖培養可以得到脫毒試管苗，解決品種的退化問題，提高產量和品質；將植物器官作誘變處理，利用器官培養可得到突變株，進行細胞的突變育種。實際應用

離體根培養是進行根系生理和代謝研究最優良的實驗體系。因為根系生長快，代謝強，變異小，能根據研究需要，改變培養基的成分來研究其營養吸收、生長和代謝的變化。在工廠化生物反應器系統中通過工藝調控實現大規模根培養，不受環境和季節的限制，隨時隨地生產根培養物，進行藥物、微量活性物質及一系列次生代謝產物的工廠化生產。另一方面，由根細胞可再生成植株用于生產實踐。第一節根的培養一、根無性繁殖系的建立1.外植體

根的培養材料一般來自無菌種子發芽產生的幼根或植株根系經滅菌處理后的切段。2.根無性繁殖系的建立

將種子進行表面消毒，在無菌條件下萌發，待根伸長后從根尖一端切取長1.2cm的根尖（或植株的根系經表面滅菌后）接種于培養基中。這些根的培養物生長甚快，幾天后發育出側根。待側根生長約一周后，即切取側根的根尖進行擴大培養，它們又迅速生長并長出側根，又可切下進行培養，如此反復，就可得到從單個根尖衍生而來的離體根的無性繁殖系。這種根可用來進行根系生理生化和代謝方面的實驗研究。油棕根培養（引自劉進平，2005）油棕根培養（引自劉進平，2005）二、培養方法一、植株再生培養根的離體培養也可以用來再生植株。第一步誘導形成愈傷組織；第二步在再分化培養基上誘導芽的分化，在愈傷組織上分化成小植株。

需要注意的是，愈傷組織如果先分化形成根則往往抑制芽的形成。再生培養流程再生培養流程圖再生培養視頻

視頻

二、固氮培養

通過分離和培養具有固氮作用的根瘤菌，接種到禾谷類等作物的試管苗根系中，可以實現谷物直接利用生物固氮的捷徑。通過選擇有效的適當濃度的誘瘤劑誘導根瘤菌侵入試管苗根部結瘤固氮，固氮菌接種時要給根系創造傷口，以利于根瘤菌的侵入。接種根瘤菌形成的根瘤具有一定的固氮活性并向宿主提供氮素，能促進植株生長和氮營養的改善，無論在株高、鮮重和葉綠素含量都有提高。

二、培養方法三、影響因素1.植物種類2.培養基多為濃度低的White培養基，許多植物在1/2MS培養基上能生根。糖的使用濃度應稍低，如玫瑰生根蔗糖為2%。3.生長物質培養基中添加適宜濃度的生長素有利于根的形成和生長，常用生長素為IAA、NAA、IBA，濃度范圍一般為0.0-1.0mg/L。三、影響因素4.pH根的培養適宜的pH范圍為5.0~6.0，5.光照大多數人認為，黑暗有利于根的形成。試管苗的生根一般無需考慮光照的影響，有時加一點活性炭可減弱光照，對植物的生根比較有利。6.溫度生根溫度一般控制在16~25℃。第二節莖尖培養

意義：莖尖不僅生長速度快、繁殖率高、不易產生遺傳變異，而且是獲得無病毒苗木的有效途徑，故莖尖培養是植物組織培養最常用的試材之一。類型：莖尖培養分為微莖尖培養和普通莖尖培養。微莖尖指帶有1～2個葉原基的生長錐，其長度不超過0.5mm。普通莖尖指較大的莖尖（如幾mm到幾十mm）、芽尖及側芽。這里主要講普通莖尖培養。這種培養技術簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短。一、普通莖尖培養1.取材

挑選雜菌污染少，生長不久的莖尖。木本植物可在取材前對莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶雜菌。用于普通莖尖培養，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。莖尖取材示意圖外植體采集與處理視頻外植體采集與處理視頻

莖尖的解剖構造（引自劉進平，2005）莖尖的解剖構造一、普通莖尖培養2.滅菌將采到的莖尖切成0.5～1.0cm長，并將大葉除去，休眠芽預先剝除鱗片。將莖尖置于流水沖洗2～4小時(視干凈程度），再在70%的酒精中處理10-30秒，然后在稀釋5～

10倍的次氯酸鈉（商品次氯酸鈉為10%）中浸10～15分鐘，最后用無菌水沖洗3～

4次，或者用0.1～

0.2%的氯化汞滅菌5～

10分鐘，無菌水沖洗5次以上。莖尖滅菌外植體滅菌視頻外植體滅菌視頻一、普通莖尖培養

3.接種

為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為0.5cm左右大小。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而發生褐化，使培養基變褐，影響材料的成活。所以在接種時，不能用生銹的解剖刀，動作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時間，也可配制1～5%Vc液，將切下的莖尖材料浸入處理一下。接種視頻接種視頻一、普通莖尖培養

4.培養（1）培養基多數莖尖培養采用MS作為基本培養基或改良MS培養基。培養基中生長素是必須的，如2,4-D，IAA，NAA等，一般用0.1mg/L左右，高于此濃度，往往產生畸變芽或形成愈傷組織。莖尖在培養過程中會出現生長太慢、生長太快和生長正常等三種類型。

桑樹莖尖萌發

桑樹莖尖萌發

楊樹頂芽萌發成叢生芽楊樹頂芽萌發成叢生芽

一、普通莖尖培養

4.培養（2）初代培養

莖尖的初代培養主要是通過適宜的培養條件刺激頂芽和腋芽的生長。外植體啟動生長的關鍵主要是培養基的激素配比與濃度，一般應使用較高濃度的細胞分裂素和較低濃度的生長素，解除頂端優勢的抑制作用，生長素濃度過高容易產生愈傷組織。初代培養視頻初代培養視頻一、普通莖尖培養

4.培養

（3）繼代培養

莖尖長成的新梢，可切成若干小段，轉入到增殖培養基中。長大后又可切成小段，再轉入新培養基，這樣一代一代繼續下去，便建立和維持了莖尖無性繁殖系。繼代培養的激素濃度要降低或用MS0培養基。有時也可邊進行繼代培養邊進行誘導生根。取比較長的新梢（如2cm以上）轉入生根培養基，余下較短的新梢繼續進行繼代培養。繼代培養視頻繼代培養視頻一、普通莖尖培養

4.培養（4）誘導生根誘導生根多采用1/2MS培養基，即MS培養基的各種組成成份用量均減半的培養基。并加入一定的生長素類調節物質，如NAA、IBA等。也可將切下的新梢基部浸入50或100ppm的IBA溶液中處理4～8小時，然后轉移到無激素的生根培養基中。注意較高濃度的生長素對生根有抑制作用。生根培養視頻生根培養視頻單芽莖段微繁示意圖

單芽莖段微繁示意圖單芽莖段增殖示意圖單芽莖段增殖示意圖叢生芽微繁示意圖（引自劉進平，2005）叢生芽微繁示意圖叢生芽增殖示意圖叢生芽增殖示意圖（5）培養條件

每天照光16小時，照度1500～3000Lx即可，溫度通常為25±2℃。一般莖尖培養在40天左右可長成新梢，進行繼代培養。4.培養一、普通莖尖培養5．馴化移栽

生根培養一個月左右，多數新梢即可獲得生長健壯而發達的根系。移植時可根據生根情況來進行。若發現新梢基部生有較濃密的不定根，長度在1cm以內，就可移栽入土。移栽時通過幾天的煉苗過程，從試管中取出小植株，輕輕洗掉培養基。栽后給予較高的空氣濕度條件。一、普通莖尖培養馴化視頻馴化視頻

首先營養缽的培養土要澆透水，所放置的床面也要澆濕，然后搭小拱棚，以減少水分的蒸騰，初期要常噴霧處理，保持拱棚薄膜上有水珠出現。當發現小苗有生長趨勢，可逐漸減少濕度將拱棚兩端打開通風，并且減少噴水次數。使小苗適應濕度較小的條件。以后揭去拱棚的薄膜，并給予水分控制，少澆水或不澆水，促進小苗長得粗壯。馴化移栽

最適宜的溫度是16～20℃，春季地溫較低時，可用電熱線來加溫。光照管理上，初期可用較弱的光照，在小拱棚上加蓋遮陽網或報紙等，以防陽光灼傷小苗和增加蒸騰作用，后期可直接利用自然光照。為了提高馴化效率，可用育苗盤進行馴化生根，選擇2cm左右孔徑的育苗盤即可?？籽ㄑb入蛭石：珍珠巖：草炭土為1︰1︰0.5的基質。馴化移栽第三節莖段培養

莖段培養是指對植物帶有一個以上芽的外植體（包括塊莖、球莖、鱗莖的幼莖切段）進行培養的技術。莖段培養的主要目的是進行植物的離體快速繁殖。莖段培養用于快速繁殖的優點在于：培養技術簡單易行、繁殖速度較快；芽生芽方式增殖的苗木質量好，且無病、變異小、性狀均一等。第三節莖段培養一、無菌培養物的建立1.取材

取生長健壯無病蟲的當年生幼嫩枝條或鱗莖盤，去掉葉片，剪成3～4cm的小段。取材時注意莖的基部比頂部切段、側芽比頂芽的成活率低，所以應優先利用頂部的外植體，但由于每個新梢僅一個頂芽，也可利用腋芽，莖上部的腋芽培養效果較好。還應注意盡量在生長期取芽，如蘋果在3～6月取材的成活率為60%，7～11月下降到10%，12～2月都在10%以下。一、無菌培養物的建立

取材視頻取材視頻2.滅菌

20分鐘，如果材料表面有絨毛應在消毒劑中滴加1-2滴土溫—20或80。因材料老嫩和蠟質多少而定時間。最后用無菌水沖洗數次以致干凈，否則植物材料會受殘留滅菌劑的危害。一、無菌培養物的建立滅菌視頻滅菌視頻3.接種

消毒好的莖段用鋒利的解剖刀或剪刀剪去兩端消毒劑殺傷的部位，分切成單芽小段接種于預先配好的誘導側芽萌發的培養基中，一般每瓶接種一塊外植體，防止交叉感染。一、無菌培養物的建立接種視頻接種視頻二、培養方法和程序1.培養

最常用的基本培養基為MS培養基，加入3%蔗糖，用0.7%的瓊脂固化。培養條件保持25℃左右，給予充分的光照和光期。經培養后莖段的切口特別是基部切口上會長出愈傷組織，呈現稍許增大，而芽開始長長，有時會出現叢生芽，從而得到無菌苗。

二、培養方法和程序

月季莖段側芽萌發（引自譚文澄、戴策剛，1991）月季莖段側芽萌發

在莖段培養中，促進腋芽增殖用6-BA是最為有效的。生長素雖不能促進腋芽增殖，但可改善苗的生長。GA對芽的伸長有促進作用。繼代擴繁是莖段培養的主要一步。這可由二種途徑解決：一是促進腋芽的快速生長；二是誘導形成大量不定芽。二、培養方法和程序莖段快繁方式模式圖

第一種途徑的好處是不會產生變異，能保持品種優良特性，且方法簡便，可在各種植物上使用。每年從一個芽可擴繁增殖10萬株以上。莖段快繁方式模式圖第二種途徑（誘導形成大量不定芽）有時會產生變異。

繼代增殖過程所用培養基和生長調節劑與初代培養相同，有時會稍低。二、培養方法和程序

生根培養主要是降低或除去細胞分裂素而加入生長素。由于在苗增殖時施用了較高濃度的細胞分裂素，其苗中保持著一定的量，因此在生根培養中不需要加細胞分裂素。生長素的濃度，NAA一般為0.01～1.0mg/L，IBA和IAA可稍高。

生根培養時最好在培養基中加0.3%活性炭，以促進生根。二、培養方法和程序二、培養方法和程序2.移植

這是組織培養的關鍵一環。試管苗是在恒溫、濕度飽和、營養豐富、激素適當和無菌條件下生長的。植物的組織發育程度不高，植株幼嫩，表皮角質層變薄，抵抗力減弱。移植是一個由異養轉變為自養的過程。因此，在馴化時要進行煉苗。然后洗凈瓊脂，小心移栽，初期濕度要大，基質通氣良好，保濕保溫，更要精心管理等。二、培養方法和程序二、培養方法和程序馴化移栽視頻移栽成活大田定植二、培養方法和程序為什么說植物器官培養是組織培養的一個最重要的方面？器官培養包括哪些類型？植物的離體根培養有何意義？普通莖尖培養時，怎樣取材和處理外植體？莖尖培養過程中會出現什么現象？怎樣解決？莖段培養與莖尖培養有什么主要區別？12345思考練習莖尖生長出現癥狀及原因

莖尖在培養過程中出現生長太慢的癥狀及可能原因：癥狀：接種后莖尖不增大，只是莖尖逐漸變綠，出現綠色小點，細胞逐漸老化而進入休眠狀態，或者逐漸變褐死亡。原因：生長素濃度太低，或是溫度過低或過高；莖尖生長出現癥狀及原因

莖尖在培養過程中出現生長太快的癥狀及可能原因：癥狀：接種后莖尖迅速增大，在莖尖基部產生愈傷組織，并迅速增殖，而莖尖不伸長，久之莖尖也形成愈傷組織，從而喪失發育成苗的能力。原因：一是生長素濃度過高，引起細胞瘋狂分裂而導致愈傷組織的形成。二是光照太弱或溫度太高。

莖尖在培養過程中生長正常癥狀：

原因：接種后莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色逐漸變綠，并逐漸伸長，葉原基發育成可見的小葉，進而形成小苗。

莖尖生長出現癥狀及原因任務一器官培養（一）莖段培養任務二器官培養（二）植物的再生培養任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養常見植物組配方法與易發問題處理項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務二器官培養（二）植物的再生培養

掌握離體葉片的培養步驟；掌握花器和種子的選擇、處理；一般掌握胚胎培養的類型與各自的注意事項。123能夠根據不同植物及種類選擇合適的外植體進行啟動培養；能夠根據不同的植物器官及器官狀態，選擇合適的滅菌劑和適宜的滅菌時間，對外植體進行表面處理與滅菌；會通過觀察試管苗的長勢，大體判斷采取何種措施改善培養條件；熟練外植體滅菌的工藝操作流程；熟練各種試管苗繼代培養過程中的切割方式與技術；熟練無菌操作技術。123456

葉的組織培養再生成植株的方式有二種：一種是直接誘導形成芽，另一種是先誘導形成愈傷組織，再經愈傷組織分化成植株。后一種方式比較普遍。第四節葉的培養一、培養程序和方法1.取材與滅菌

取植物的幼嫩展開葉片沖洗干凈，用70%酒精漂洗約10秒，再在1-2%次氯酸鈉中浸10～15分鐘，或在0.1%升汞中浸5～8分鐘，用無菌水沖洗數次，無菌的干濾紙上吸干水分。對一些粗糙或帶茸毛的葉片要延長滅菌時間。一般地說，同一葉片的柵欄組織比海綿組織處于較成熟狀態。2.接種

把滅菌過的葉組織切成約0.5cm見方小塊或薄片（如葉柄和子葉），接種在MS或其它培養基上。培養基中附加BA1～3mg/L，NAA0.25～1mg/L，有些植物的葉片需要加2，4-D0.5-1.0mg/L。葉片的切割方式3.培養

葉接種后培養條件為每天10～12小時光照，光強1500～3000Lx。培養約2周至4周，葉切塊開始增厚腫大，進而形成愈傷組織。這時應轉移到再分化培養基上進行分化培養，分化培養基的細胞分裂素含量為2mg/L左右，約10天左右，愈傷組織開始轉綠出現綠色芽點，繼續培養將發育成無根苗。幼葉比成熟葉易培養，子葉比葉片易培養。其次要添加適當的生長素和細胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。驅蚊草葉片愈傷組織分化出芽

影響的主要因素是激素的種類和濃度。但葉片的培養常常需要多種激素的配合使用，不同培養階段需要更換不同的激素組合。如杏離體葉培養使用1/2MS培養基，ZT與2，4-D的組合可誘導愈傷組織的產生，BA與NAA的組合可從愈傷組織中誘導不定芽的產生。但有些植物比較簡單，可以一步直接產生芽，如驅蚊草在MS+6-BA0.5-1.0+IAA0.1-0.2mg/L中可以直接使葉片產生愈傷組織并分化出芽。二、影響離體葉培養的因素視頻4-2-1再生培養一、花器官培養二、種子培養第五節花器和種子培養

花器官培養是指對植物的整朵花或花的組成部分（如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等）的無菌培養。一、

花器官培養1．取材從健壯植株上取未開放的花蕾，已經開花的不宜用，因為消毒困難。先用75%酒精消毒約30秒鐘，再用次氯酸鈉浸10～15分鐘，取出用無菌水沖洗數次[或氯化汞]。2．接種培養

用整個花蕾培養時，只要把花梗插入培養基中。若用花器的某個部分，則分別取下，切成小片，放入培養基中。要把花器官部分培育成小植株，要加入生長素和細胞分裂素，誘導形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養成植株。如菊花的花瓣切片接種在含6-BA

2mg/L、NAA

0.2mg/L的MS培養基上，在26℃、1500Lx光照，每天光照10小時，培養約2周，形成少量愈傷組織。再經1個月就分化出綠色芽點。非洲菊花托形成愈傷組織非洲菊花托分化出芽接種后生長

種子培養是指對受精后發育完全的成熟種子和發育不完全的未成熟種子的無菌培養。利用種子培養可以打破種子休眠，特別對一些休眠期長的植物，可以作為大量生產試管苗的好材料，它具有植株分化容易，無菌操作方便等特點。二、種子培養

1．種子滅菌

種皮厚或不飽滿的種子，宜用0.1%升汞消毒10～20分鐘。幼嫩的或發育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15～30分鐘。若種子上有絨毛或蠟質，應先用95%酒精或吐溫--40處理，提高消毒效果。對殼厚難萌發的種子，可去殼培養。

馬藺種子的去殼培養2．培養基

若以促進種子萌發為目的的種子培養，培養基的成分要求較簡單，可不加或少加生長激素。當然，對某些發育不全的無胚乳的種子培養，應提供適當的生長激素。種子培養的糖濃度可稍低，一般1～3%。3．接種培養

種子培養的接種較容易，把種子按每瓶3～5粒放入培養瓶中，均勻排列，放在20～28℃的條件下暗培養，發芽后盡快轉移光下，要求1000～2000Lx光強，每天光照10小時。一、胚胎培養的意義二、胚珠、子房和胚乳的培養

第六節胚培養１．克服遠緣雜種的不親和性

２．使胚發育不全的植物獲得后代３．打破種子休眠，縮短育種年限一、胚胎培養的意義培養部位取材時間培養基及培養條件胚珠球形胚Nistch，White，2，4-D，BA，IAA子房開花前1-5天N6，Nistch，2，4-D，BA，IAA胚乳授粉后4～8天MS、White，0.5-3mg/L的BA及少量NAA二、胚珠、子房和胚乳的培養

胚與胚乳所處的位置花器官培養通常指花的哪些部分培養？常用的基本培養基是什么？植物胚胎培養分為哪些類型？各有何特點和要求？胚胎培養有何重要意義？1234Theend!任務一器官培養（一）莖段培養任務二器官培養（二）植物的再生培養任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養常見植物組配方法與易發問題處理項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務三培養物的不良表現及改進措施知識目標植物組織培養培養物的不良表現及改進措施任務講解一、初始培養階段

二、繼代培養階段三、生根階段1.培養物水浸狀、變色、壞死、莖斷面附近干枯

可能原因：表面殺菌劑過量，消毒時間過長，外植體選用不當（部位或時期）。一、初始培養階段

調換其他殺菌劑或降低濃度，縮短消毒時間，試用其他部位，生長初期取材。

改進措施：改進措施2.培養物長期培養幾乎無反應

可能原因：基本培養基不適宜，生長素不當或用量不足，溫度不適宜。2.培養物長期培養幾乎無反應原因

改進措施：

更換基本培養基或調整培養基成分，尤其是調整鹽離子濃度，增加生長素用量，試用2,4-D，調整培養溫度。3.愈傷組織生長過旺、疏松，后期水浸狀

可能原因：激素過量，溫度偏高，無機鹽含量不當。

改進措施：

減少激素用量，適當降低培養溫度，調整無機鹽（尤其是銨鹽）含量，適當提高瓊脂用量增加培養基硬度。4.愈傷組織太緊密、平滑或突起，粗厚，生長緩慢

可能原因：細胞分裂素用量過多，糖濃度過高，生長素過量。

改進措施：

減少細胞分裂素用量，調整細胞分裂素與生長素比例，降低糖濃度。5.側芽不萌發,皮層過于膨大,皮孔長出愈傷組織

可能原因:枝條過嫩,生長素、細胞分裂素用量過多。改進措施：減少激素用量，采用較老化枝條。1.苗分化數量少、速度慢、分枝少、個別苗生長細高

可能原因：細胞分裂素用量不足，溫度偏高，光照不足。二、繼代培養階段

改進措施：

增加細胞分裂素用量，適當降低溫度，改善光照，改單芽繼代為團塊（叢芽）繼代。2.苗分化過多，生長慢，有畸形苗，節間極短，苗叢密集，微型化

可能原因：細胞分裂素用量過多，溫度不適宜。

減少或停用細胞分裂素一段時間，調節溫度。

改進措施：3.分化率低,畸形,培養時間長時苗再次愈傷組織化

可能原因:減少生長素用量，適當降溫。改進措施：生長素用量偏高,溫度偏高。4.葉粗厚變脆可能原因：

改進措施：

適當減少激素用量，避免葉片接觸培養基。

生長素用量偏高，或兼有細胞分裂素用量偏高。5.再生苗的葉緣、葉面等處偶有不定芽分化出來

可能原因：細胞分裂素用量偏高，或表明該種植物適于該種再生方式。

改進措施：

適當減少細胞分裂素用量，或分階段地利用這一再生方式。6.叢生苗過于細弱，不適于生根或移栽

可能原因：細胞分裂素濃度過高或赤霉素使用不當，溫度過高，光照短，光強不足，久不轉移，生長空間窄。

改進措施：

減少細胞分裂素用量，免用赤霉素，延長光照時間，增強光照，及時轉接，降低接種密度，更換封瓶紙的種類。7.幼苗淡綠，部分失綠

可能原因：無機鹽含量不足，PH值不適宜，鐵、錳、鎂等缺少或比例失調，光照、溫度不適。

改進措施：

針對營養元素虧缺情況調整培養基，調好PH值，調控溫度、光照。8.幼苗生長無力、發黃落葉、有黃葉、死苗夾于叢生苗中

可能原因：瓶內氣體狀況惡化，PH值變化過大，久不轉接導致糖已耗盡，營養元素虧缺失調，溫度不適，激素配比不當。8.幼苗生長無力、發黃落葉、有黃葉、死苗夾于叢生苗中

改進措施：

及時轉接、降低接種密度，調整激素配比和營養元素濃度，改善瓶內氣體狀況，控制溫度。改進措施1.培養物久不生根，基部切口沒有適宜的愈傷組織

可能原因：生長素種類、用量不適宜；生根部位勇氣不良；生根程序不當；PH值不適，無機鹽濃度及配比不當。三、生根階段

改進措施：

改進培養程序，選用適宜的生長素或增加生長素用量，適當降低無機鹽濃度，改用濾紙橋液培養生根等。2.愈傷組織生長過快、過大，根莖部腫脹或畸形，幾條根并聯或愈合。可能原因：生長素種類不適，用量過高，或伴有細胞分裂素用量過高，生根誘導培養程序不對。

改進措施：

調換生長素種類或幾種生長素配合使用，降低使用濃度，附加VB2或PG等減少愈傷，改變生根培養程序等。植物組織培養不同生長階段，都有哪些不良表現，可能原因是什么，它們改進的措施有哪些？Theend!任務一器官培養（一）莖段培養任務二器官培養（二）植物的再生培養任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養常見植物組配方法與易發問題處理項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務四花卉的組織培養掌握百合生物學特性和快速繁殖方法；掌握蘭科植物組培的大致過程；掌握胡蝶蘭花梗組培的方法。123大花蕙蘭的繼代增殖示意圖任務導入第一節百合的組織培養第二節蘭花的組織培養技術第三節蝴蝶蘭的培養

全世界已發現百合約89余種，主要分布地區是中國、日本、北美和歐洲等溫帶地區。北美百合協會將百合園藝品種劃分為10個種系，觀賞栽培的主要是4個種系，即亞洲百合雜種系；茶香百合雜種系；東方百合雜種系；麝香百合雜種系。株形端正，花色清白給人以清純、高雅的印象，是切花中的佳品。第一節百合的組織培養第一節百合的組織培養第一節百合的組織培養

我國近年來，昆明、上海、深圳的百合切花生產發展較快，已形成三大生產基地。目前國內切花栽培的百合大多是亞洲型，主要從荷蘭、日本引進，經過幾年的栽培試驗，已篩選出一批適合我國生產的品種。第一節百合的組織培養一、形態特性和生物學習性

百合是百合科百合屬植物的統稱，為多年生的草本植物。鱗莖無皮，廣卵形，直徑5~8cm，白色或黃白色，莖高30~90cm，直立，葉多而散生，披針形，光滑?；▎紊驍祷M向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒狀，有清香。花被先端外卷，花被筒深處淡綠色。百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鱗莖發育膨大。二、繁殖方法1.分球百合老鱗莖(母球)生長過程中，于莖軸上逐漸形成小鱗莖，稱"莖生小球"，經一年栽培，可分生1~3個甚至7~9個小球，適當深栽及摘除花蕾，均有助于子球發生，小鱗莖待明春播于苗床，大者1年，小者培養2~3年可當種球。2.鱗片扦插取成熟健壯的老鱗莖，陰干數日后剝下鱗片，斜插于濕潤木屑或顆粒泥炭中，溫度以20~25℃為適，一般8~9月插，經2~4個月生根發葉，并在鱗片基部生長出小磷片，基質含水量在60％~80％，前期高水分，后期低水分，過分濕潤易腐爛。為防止病菌感染，應盡量除去外層鱗片，1片鱗片可獲50～60個子球，自鱗片扦插、生根、發芽至植株開花，一般需2~3年。三、百合的組織培養

百合的組織培養繁殖自20世紀70年代后期開始，日本人以葉片為外植體誘導出大花卷丹的小植株，我國于80年代初由蘭洲百合的花藥、花絲等培育出完整小植株。80年代以后，培養出去病毒的百合種苗和通過胚培養獲得遠緣雜交的新品種。1.花器的組織培養(1)取材和滅菌采取開花前數日的花蕾?；ɡ俚谋砻嬗镁凭珳缇僭诰凭珶羯献茻龜得腌?，以后放在無菌培養皿內剝開花蕾，花絲，子房，花柱等分別切取3～5mm長，接種到培養基上。也可用花瓣和萼片培養。

(2)培養基及培養條件采用MS，KC等培養基，蔗糖濃度以7.0％為適，這樣發芽和子球形成率可達90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保溫20℃。

培養條件

花柱、花梗、莖段等用MS+IAAl+BA0.2培養基，葉片用MS+NAAI+BA0.1；分化植株時，MS+NAA2+IBA0.4+Kt0.05，培養基內均加蔗糖3％和瓊脂0．7％，pH值5.8—6.5。

(3)生長情況花器部位從百合花器不同部位的培養來看，以花絲的部位為好，成活率很高，發芽較多，再是子房和花柱部分?？蓮母鞑课话l芽，形成子球，通常是經過兩個途徑，一個是從切中處形成愈傷組織，以后再發芽；再是從切口直接產生芽。麝香百合花器培養得到的植株，生長約6個月即可開花，未發現不正常現象，只是母株的花較大，且全株無病毒癥狀。

百合鱗片等培養，對于擴大培養材料來源，加快繁殖速度和培養得到無病毒苗等皆有重要意義。2.鱗片組織培養

初代培養：

由于其鱗莖材料都生長在土中，受土壤微生物的影響，所以污染率相當高。為此外植體消毒要嚴加注意，可應用幾種消毒劑并用的方法。取0．5cm2鱗片小塊接人MS+2，4-D1+IAAI+Kt0．5誘導培養基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光強1200Lx條件下培養。

接種后2周，即有98％左右的鱗片切塊在近軸面或邊緣上有淡黃色的不定芽原基呈環狀突起，多數每塊上有2~4個，這些不定芽原基繼續生長4周后，可形成中間抽出綠色的白色小鱗莖，在小鱗莖基部發生一些粗壯的根。將幼苗切成1.5~2cm長的片斷，接種到誘導愈傷組織的培養基上。3周后葉子的基部、葉脈、葉緣上均可誘導出一團團淡黃色的愈傷組織。初代培養

繼代培養（分化培養）可用MS+NAA2+IBA0．4+Kt0.05培養基。將愈傷組織轉移到分化培養基上，10周后，愈傷組織逐漸膨大，分化出許多大小不等的鱗莖，并在小鱗莖的基部長出許多粗壯的根。有少數的小鱗莖中間可長出綠芽。將小鱗莖分離出以后，留下的愈傷組織轉移到相同的新鮮分化培養基上，一段時間后仍能分化出小鱗莖。

試管苗移栽時首先應把根部的培養基清洗干凈。移栽前，放在4~10℃低溫條件下鍛煉2～3周，這樣移栽后的幼苗生長更加健壯。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基質，育苗盤必須清洗消毒。同時，移栽后注意濕度管理，相對濕度控制在80％~90％。同時要防止烈日曝曬，后期幼苗不宜澆水過多，并及時噴灑藥劑預防病蟲危害。繼代培養（分化培養）

百合切花栽培中首先要解決的技術問題是：避免因球根的休眠而導致發芽率不高及盲花。由于同一圃場生產的球根，其休眠狀態各種各樣，尤其休眠深的球根，僅靠貯藏無法打破休眠。

需要人工打破休眠

四、打破休眠的方法1.冷藏

13～15℃預冷，3～5℃冷藏6-7周。2.溫水浸泡開始于48℃的溫水中，每隔2～3min提起再泡入，反復2～3次，然后在45℃溫水中浸泡1h。嚴格掌握水溫。3.激素處理采用1000xGA溶液浸泡，為避免發根阻礙，可先將球根倒置浸泡一半，而后恢復正常位置予以靜置。四、打破休眠的方法第二節蘭花的組織培養技術

蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無法大量繁殖生產，而且由于長期進行無性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長。

法國Morel(1952年)等以大麗花莖尖進行培養試驗，得到了無病毒植株。后來他觀察到虎頭蘭的莖尖在無菌培養基上能形成扁圓形的小球體，這些小球體與種胚發育成的原球體非常相似，故稱為原球莖。原球莖增殖很快，并可形成幼苗。這一方法和技術很快在蘭花生產上得到了廣泛的應用，成為“蘭花工業”。

蘭花培養成功的關鍵，首先是形成無性繁殖系原球莖。國蘭原球莖的增殖國蘭原球莖發芽圖

蘭科植物可以培養的部位主要是頂芽和側芽，個別可從葉片培養得植株。

1.新芽的莖尖莖尖是細胞分裂最旺盛的部分，也是培養成功率最高的部位。

2.花梗當蘭花開花約一個月后，剪取其花梗頂端及若干個花梗腋芽。一、培養部位1.芽的準備和滅菌取2～6cm大小切取下來，流水沖洗，并把最外面的1～2片苞葉去掉，再用10％次氯酸鈉或漂白粉溶液(10g漂白粉溶解于140ml水中，充分攪拌勻后，靜置約20min，取上清液)中浸10～15min。剝離和切割。容易產生褐變的，在切割時應將芽放在無菌水中操作，這樣會比在空氣中褐變的機會少些。以消除病毒為目的時要盡量小些，可以小到0.1mm：若以繁殖為目的，培養物可在2～5mm左右。二、莖尖的選取、滅菌和接種2.接種

莖尖接種以固體培養基為好，但因屬而異，如蕙蘭屬在液體培養基培養形成原球莖后則用固體培養基進行繼代培養，而卡德蘭屬和石斛屬這一類易變褐枯死的屬，以在液體培養基為好。2.接種3.繼代培養接種后1～2個月培養的莖尖即可形成原球莖球狀體，以后即發芽生根長葉。應在其發芽前把它切成小塊進行轉移，讓它繼續不斷地形成原球莖球狀體。這樣連續的進行繼代培養，短時間可以得到大量的原球莖球狀體。4.培養基對于許多蘭花來說，MS培養基最好。另外KnudsonC(KC)培養基也不錯。

5.試管苗的移栽苗有3～4葉大小，根2～3條時可移植。(1)從試管內取的苗用水將瓊脂沖洗掉，沖洗不徹底會發生霉菌腐爛。(2)經水沖洗的苗放在舊報上，吸干水分陰晾1h再定植。(3)管理上，50％的弱光，溫度20～25℃，保持一定的濕度，不能完全密閉，也要注意通風。根在開始生長后可1周澆一次1000倍的復合肥料。第三節蝴蝶蘭的培養(1)將芽除去葉后，用水沖洗，10％的漂白粉滅菌15min。除去葉原基后，用5％的漂白粉滅菌l0min，以后用無菌水沖洗3~5次。(2)切取莖尖和各葉基部的腋芽，約2~3mm大小，接種到培養基中。(3)培養基采用VW培養基，添加15％CM進行液體培養，或進行固體培養。1.莖尖的培養莖尖圖示(4)培養條件為溫度25℃，光照強度2000Lx，照明16～24h。液體培養基用60r／min的速度進行振蕩培養，培養7～10d再轉移到新的培養基，培養1個月后轉移到固體培養基。在這種條件下培養1個月即可形成原球莖球狀體，以后再進行繼代培養，不斷繁殖原球莖球狀體。1.莖尖的培養(1)采芽將帶腋芽的花梗進行沖洗，用10％的漂白粉溶液表面滅菌20min，除去腋芽的苞葉，再在5％的漂白粉溶液中表面滅菌3min，無菌水沖洗凈。

(2)不帶花梗組織，僅取腋芽，接種到培養基上。2.花梗腋芽的培養蝴蝶蘭圖示(3)培養基和培養條件：誘芽培養基：MS+BA3誘導原球莖：MS+BA5+NAA0.5增殖：MS+BA3+NAA0.2+炭1.5克/L生根：1/2MS+BA1+NAA0.5PH：5.4培養條件是光照強度2000Lx，光照時間每天13h，保持恒溫25℃。2.花梗腋芽的培養條件

生根之前可以進行過渡培養，不加激素。試管苗的移栽用苔蘚作基質。2.花梗腋芽注意事項

百合的生物學特性怎樣?怎樣用鱗莖進行組織培養?

蘭科植物培養過程包括哪幾個環節?

蝶蘭怎樣用花梗組織培養方法繁殖?123Theend!任務一器官培養（一）莖段培養任務二器官培養（二）植物的再生培養任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務五水果作物的組織培養

掌握草莓微莖尖培養的大致過程，了解鑒定草莓無毒病苗的方法；掌握莖尖培養的種類和操作步驟；掌握莖段培養中材料的選擇、處理及培養基的調整；123第一節草莓的組織培養第二節葡萄的組織培養第三節無花果的組織培養第一節草莓的組織培養視頻4-6-1草莓組培流程

草莓為重要的漿果植物，栽培分布很廣，其總產量在漿果類中僅次于葡萄，居世界第二位。草莓果實柔軟多汁，含豐富的糖、酸、礦物質，維生素等。草莓可鮮食，也可加工成果醬，果酒等。其顏色鮮艷，是良好的配餐食品。一、形態特性和生物學特性

草莓繁殖容易，結果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光溫室，使草莓的成熟期大大縮短，從11月份到次年的6月份，都有新鮮的草莓上市，填補了水果的淡季市場。一、形態特性和生物學特性

草莓屬多年生草本植物，植株矮小，呈半平臥叢狀生長，須根系，在土壤中分布較淺。草莓的莖呈短縮狀，分地上和地下部分，地上短縮莖節間極短，節密集，其上密集輪生葉片，葉腋部位著生腋芽。1.形態特性1.形態特性

地下短縮莖為多年生，是貯藏營養物質的器官，也可發育成不定根。匍匐莖是草莓的特殊地上莖，是其營養繁殖器官，莖細，節間長，一般座果后期發生。葉屬于基生三出復葉，呈螺旋狀排列，在當年生新莖上總葉柄部與新莖連接部分，有兩片托葉頂端膨大，圓錐形且肉質化。1.形態特性

離生雄蕊20～35枚。雌蕊離生，呈螺旋狀排列在花托上，數目從60～600不等。花序為二歧聚傘花序至多歧聚傘花序。果實為假果，主要是花托膨大肉質化形成，瘦果以聚合果形成生于花托上。果實成熟時果肉紅色，粉紅色或白色。1.形態特性

草莓根系在土壤溫度達到2℃時開始活動，在10℃時開始形成新根，根系生長的最適溫度為15～20℃，秋季溫度降低到7～8℃時生長減弱。春季氣溫達5℃時植株開始萌芽，莖葉開始生長。草莓的根系分布較淺，加上植株矮小，葉片較大，因此蒸發量大。在整個生長季節，葉片幾乎都在不斷地進行老葉死亡、新葉發生的過程，葉片更新頻繁。2.生物學習性2.生物學習性

草莓是喜光植物但又比較耐陰。光照充足，植物生長旺盛，葉片顏色深，花芽發育好，能獲得較高的產量。相反光照不良，植株生長勢弱，葉柄及花序柄細。葉片色淺，花朵小，果實小，著色不良。2.生物學習性

這些特點，決定了草莓對水分要求較高，但在不同的生長發育時期，對水分的要求不同。開花期土壤的含水量應不低于最大田間持水量的70%。果實膨大及成熟期土壤含水量應不低于80%，而秋季9、10月份，土壤持水量達60%即可，草莓不耐澇，要求土壤既有充足的水分供應，又要有良好的通氣條件。草莓對土壤適應性強，在各種土壤上都能生長。但由于是淺根性作物，要求肥沃、疏松、透水、通氣的中性微酸性或微堿性土壤。2.生物學習性1.熱處理脫毒將草莓植株在40～41℃溫度下處理4～6周，然后取微莖尖培養。二、草莓脫毒苗的培養二、草莓脫毒苗的培養

(1)初代培養：下午取草莓匍匐莖上的頂芽，用自來水流水沖洗2～4h，然后剝去外層葉片，在無菌條件下，用0.5%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，并不停地攪動促進藥液的滲透。在無菌條件和解剖顯微鏡下剝取莖尖分生組織，以帶有一個葉原基的莖尖為度。0.2mm的莖尖無病毒率可達到100%，但接種后的成活率下降，并延長培養時間。2.微莖尖脫毒2.微莖尖脫毒

莖尖分離后，迅速接入MS+BA0.25+NAA0.25或MS+BA0.5+NAA0.2培養基中。培養條件為22～25℃，光照16～18h，3000lx。經2～3個月的培養，可生長分化出芽叢。注意在低溫和短日照下，莖尖有可能進入休眠，所以較高的溫度和充足的光照時間必須保證。2.微莖尖脫毒

(2)繼代培養

把芽叢割成芽叢小塊，轉入MS+BA0.5+NAA0.01培養基中,待苗長大到1～2cm時，可將芽叢小塊分成單株，再轉入前述的分化培養基中，又會重復上述過程，達到擴大繁殖的目的。2.微莖尖脫毒(3)生根培養

1/2MS+IBA0.1生根。

(4)馴化用鑷子把草莓苗從試管瓶中取出，洗掉根系附帶瓊脂培養基。事先備好8×8cm或6×6cm的塑料營養缽，內裝等量的腐殖土和河砂。栽前壓實，澆透水，用竹簽在缽中央打一小孔，將試管苗插入其中，壓實苗基部周圍基質，栽后輕澆薄水，以利幼苗基部和基質密合。要“深栽淺埋”，即根要深栽、根莖略高于地面。2.微莖尖脫毒

栽后的試管苗要培養在濕度較大的空間內，一般加設小拱棚保濕，并經常澆水，以增加棚內濕度，以見到塑料薄膜內表面分布均勻的小水珠為宜。約過7～10d后。當檢查有一定的根系生出，可逐漸降低濕度和土壤含水量，進入正常幼苗的生長發育管理階段。2.微莖尖脫毒

花藥培養操作簡單，因經愈傷組織途徑，再分化得到的即為無病毒苗，所以可免去病毒鑒定工作。3．花藥培養

（1）取材與培養取花粉發育單核期的花蕾，置于潔凈培養皿中，內放一層濾紙，滴蒸餾水數滴保濕。將處理放入3～4℃冰箱中低溫保存3～4d。經預處理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分鐘，取出放入新配制的飽和漂白粉上清液中消毒10min，用無菌水沖洗3次。然后在超凈工作臺上剝取花藥，立即接種?；ǚ郯l育時期可采用醋酸洋紅壓片鑒定?；ㄋ幣囵B

培養基為MS+2，4-D0.4+IAA2。去分化階段培養條件為24～26℃，10h/d，1500lx,20d后可產生乳白色的愈傷組織。（1）取材與培養

（2）植株分化將誘導出的花藥愈傷組織轉移到1/2MS基本培養基，添加GA0.5，BA0.5和三十烷醇4。愈傷組織經培養后很快轉綠，以后微帶淡紫紅色，15d后在表面分化出半球形小突起，轉為綠色。20d后分化出幼葉、幼莖，并有不少突起物，以后陸續分化出新梢。（2）植株分化

草莓花藥培養得到的為無病毒苗，而用生長點培養得到的植株，則必須經過病毒鑒定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用于生產。四、草莓無病毒苗的鑒定四、草莓無病毒苗的鑒定

草莓病毒主要有四種，為斑駁病毒，皺葉病毒，脈結病毒和輕型黃邊病毒。因草莓的病毒通過汁液接種不感染，所以通常采用小葉嫁接法來進行鑒定。1.草莓病毒的種類1.草莓病毒的種類

首先從被鑒定的草莓采集長成不久的新葉，除去兩邊的小葉，中央的小葉帶1～1.5cm的葉柄，把它削成楔形作接穗。而指示植物則除去中間的小葉，在葉柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用線把接合部位包扎好。為了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。為保證成活，在2周內，可罩上塑料袋，置于半見光的場所。約經2周時間，撤去塑料袋。若帶有病毒，嫁接后1～2個月，在新展開的葉、匍匐莖或老葉上會出現病癥。1.草莓病毒的種類指示植物待鑒定植物病毒鑒定示意圖指示植物嫁接后的植物接穗病毒鑒定示意圖

1.防止蚜蟲的危害草莓無病毒苗的繁殖重要的是要防止無病毒苗的再度污染。由于草莓病毒主要是蚜蟲傳播的，所以要搞好防蚜蟲工作。草莓病毒通過蚜蟲吸吮汁液而得到傳播，短時間即可完成。防治時可使用馬拉松乳劑，氧化樂果乳劑等接觸殺蟲劑，防治期5~6月，9～10月，特別是9～10月一次，可防止蚜蟲的越冬。為保證種苗的無病毒，在原種種苗生產階段，應在隔離網室中進行。傳播草莓病毒的蚜蟲較小，可以通過大于1mm網眼，故應采用0.4～0.5mm大小的規格，其中以300號防蟲網為好。五、草莓無病毒苗的繁殖和利用

2．繁殖程序及提高繁殖率的措施草莓無病毒苗的繁殖程序可分五步，包括：脫病毒鑒定生產出無毒苗、原種種苗培養、原種種苗繁殖、良種種苗繁殖，生產用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔離室中進行，后一步在露地進行。為提高無病毒母株的繁殖株數可采用赤霉素處理和摘蕾的方法。在5月上旬和6月上旬分兩次進行。摘蕾可減輕母株的營養負擔，促進匍匐莖的大量發生，田間地每一株可繁殖150~200株。五、草莓無病毒苗的繁殖和利用第二節葡萄的組織培養組培苗葡萄的組培苗

葡萄在全世界的果品生產中，產量及栽培面積一直居于首位。其果實除作為鮮果食用外，主要用于釀酒，還可制成葡萄汁、葡萄干和罐頭等加工品。葡萄不僅味美可口，而且營養價值較高。成熟的漿果中含有15%～25%的葡萄糖和果糖以及多種對人體有益的礦物質和維生素。一、形態特征和生物學習性一、形態特征和生物學習性

(1)形態特性葡萄屬落葉木質藤本植物，葡萄地上部分的莖細長柔弱，髓部較大，組織較疏松。節上具有卷須，使新梢可以纏繞其他樹木或支架上向上攀援。葉近圓型或卵型，3～5裂，基部心形。圓錐花序。一、形態特征和生物學習性

(2)生物學習性：葡萄是深根性作物，大多數情況下，根系垂直分布最密集的范圍，是在20～80cm的深度內，但在不同的栽培管理條件下，根系的分布也將隨著發生變化。葡萄的根富含肉質，髓射線發達，能貯藏大量的有機營養物質，如糖、蛋白質和單寧等。葡萄的枝蔓上很容易產生不定根，故在生產上多采用扦插法繁殖。在大氣潮濕的情況下，枝蔓上往往長出氣生根。葡萄原產于溫帶地區，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，大部分歐洲種葡萄的根系在－5～7℃時即受凍，某些美洲種能忍受－11～12℃左右的低溫。一、形態特征和生物學習性

1.選材接種從田間生長旺盛的葡萄新梢頂端取1～2㎝的莖尖。除去幼葉后在5%次氯酸鈉溶液中浸泡2～3min，消毒滅菌，以后用無菌水沖洗3次，再在0.1%升汞溶液中浸泡約2min，以后用無菌水沖洗4次。在無菌條件下分離出約2㎜長的莖尖，接種到培養基上。二、葡萄的組織培養二、葡萄的組織培養2.培養基葡萄莖尖分化培養基以MS培養基（無機鹽減半為好），再添加BA1～2，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，瓊脂0.6%。二、葡萄的組織培養3.莖尖的分化葡萄1～2㎜莖尖接種后成活率較高，接種成活的莖尖1個月左右開始分化幼葉和側芽，2個月左右，由于側芽的不斷增生，形成芽叢。由于不同品種對BA和NAA的反應不同，故生長有明顯區別，巨峰、大粒白香蕉、赤霞珠等品種，由于頂端優勢強，側芽生長勢弱，故增殖率低，但成苗率高；白羽、貴人香等大多數品種側芽分生能力強，可在幼莖上多次分枝，故成苗率低。二、葡萄的組織培養

4.莖尖苗的生長在莖尖分化培養中產生的成苗率低和成苗困難，密集生長的芽叢，可將分化培養基中的BA濃度減低至0.5，同時添加GA30.2，則經1個月的培養，就可長成2~3㎝高的幼莖。此外黑暗處理對幼莖的伸成，提高成苗率，也有明顯的效果。二、葡萄的組織培養

5、生根與移栽切取2～3cm的莖尖苗，接種到MS+IAA0.4+NAA0.05培養基中，進行生根培養，1～2周后幼苗開始生根，1個月形成完整的根系，同時具備5～6片新葉。移栽時洗去根上的培養基，栽到蛭石基質內，使根系具有良好的通氣條件，蓋上塑料薄膜，經7～10d鍛煉適應后可去掉，移栽成活率在90%左右。二、葡萄的組織培養

提高葡萄試管苗移栽成活率要注意：1、幼苗生長要健壯；2、要保持空氣濕度；3、根際通氣良好；4、要盡量減少雜菌污染；5、澆灌的溶液濃度不能過高。二、葡萄的組織培養

葡萄受到26種病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的長勢減弱，產量降低，果實的糖分含量減少，風味變劣。葡萄卷葉病是危害最大的病毒病，在不同品種上表現不同，但多數葉片變紅，自基部起向內卷，似革質增厚，粗糙易脆；有的葉脈綠色，葉肉黃色；有的品種則表現矮化。此病可減產10～50%，造成果實糖分含量降低，成熟期推遲2周，紫葡萄果色變綠。現在已廣泛用莖尖組織培養和熱處理結合的方法來培育葡萄無病毒苗。莖尖脫毒的方法也兼有短期大量繁殖的作用，所以應用上具有很大的意義。三、葡萄無病毒苗的培養1、熱處理理脫毒

2、組織培養脫毒技術從被病毒感染的植株上取材，在5℃下冷藏保存。以后在25℃，相對濕度80%，16h的長日照條件下水培。再從長出新芽經消毒后切取莖尖進行培養，大小約0.2～0.3mm（帶一個葉原基）。實驗結果以1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，瓊脂6.0，pH5.8為好。三、葡萄無病毒苗的培養

3、無病毒苗的大量繁殖處于小葉展開期的材料，莖葉常集中在一起，成為叢狀，可以一個個進行分離，再接種到1/2MS培養基上，添加IAA0.2，BA1，KT0.6，腺嘌呤4.0，蔗糖15g/L的培養基，即可使小葉展開、伸長，得到植株。這樣反復繼代培養，可繁殖得到大量的無病毒苗。三、葡萄無病毒苗的培養第三節無花果的組織培養第三節無花果的組織培養新疆無花果無花果圖無花果圖1、形態特征無花果為?？?、無花果屬的落小喬木，是一種亞熱帶果樹，葉掌狀3～5裂，大而粗糙，背面被柔毛。花單性，隱于囊狀總花花托內，果實由總花托和其他花器官組成，呈扁圓狀或卵形，成熟后頂端開裂，肉質柔軟，味甜。具有觀賞和藥用兼備的價值。一、特性和生物學習性一、特性和生物學習性2、生物學特性用無性繁殖法繁殖的無花果，通常于栽植后2～3年開始結果。6～7年進入盛果期。以后樹冠不斷擴大，產量逐漸增長，經濟年限可延續40～70年，甚至100年。無花果的生長勢很強。幼樹的新梢或徒長枝年生長量可達到2m以上。無花果不耐寒，冬季溫度達-12℃時新梢頂端就開始受凍死亡。無花果能耐較高的溫度而不致受害。一、特性和生物學習性

由于無花果扦插繁殖成活率低，用帶腋芽的莖段培養成完整植株，可以為大量繁殖提供途徑。無花果繁殖的方法是將采來的健壯的嫩莖削去大葉片，留下帶腋芽的莖段，切成3～4cm長的小段，用流水沖洗3h,以清除表面污染物。然后放入75%酒精中，再用0.1%氯化汞消毒7～10分鐘，最后用無菌水沖洗4～5次，在無菌條件下將莖段橫切成長約1cm，按原生長方向接種到MS+BA0.5～1.0長芽培養基中。二．無花果的莖段培養二．無花果的莖段培養8天后外植體接觸培養基的一端切口周圍長出嫩綠色、質地緊密的愈傷組織，同時腋芽展開，愈傷組織和腋芽的誘導率均為100%。叢生芽增殖培養基MS+BA1～2+NAA0.1-0.2中。腋芽萌生成綠色簇生狀，每個腋芽上可生出15～28個芽叢，逐漸長成苗叢。當一部分芽長高至2～3cm時，切取單苗轉移到生根培養基上MS+NAA0.2上，11天左右開始生根。20d左右長成具有根系的完整植株，這時可取出移栽，成活率達98%。二．無花果的莖段培養

培養溫度23～31℃，12～14h/d，光照強度為1700～2400LX左右。若要繼代培養，只需將小苗剪下，用莖尖或帶腋芽的莖段接種到叢生芽增殖培養基上，即可得到以上的結果。二．無花果的莖段培養簡述草莓微莖尖培養的大致過程。簡述莖尖培養的種類和操作步驟。簡述莖段培養中材料的選擇、處理及培養基的調整

123Theend!任務一器官培養（一）莖段培養任務二器官培養（二）植物的再生培養任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養常見植物組配方法與易發問題處理項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務六植物的液體培養

一般掌握液體培養基與固體培養基的區別；掌握液體培養基的配制方法及流程；

掌握馬鈴薯莖段液體接種的流程及要點。知識目標123能夠根據不同植物及種類選擇液體培養；能夠根據不同的植物器官及器官狀態，進行液體培養；會通過觀察試管苗的長勢，大體判斷采取何種措施改善培養條件；熟練液體培養組培苗的轉接操作流程；熟練各種試管苗繼代培養過程中的切割方式與技術；技能目標12345學習提示多動手，勤實踐；多比較，多聯想，勤歸納；手、口、腦并用，學做合一。理論閱讀

植物液體培養主要在植物細胞培養中應用廣泛，主要是離體條件下將愈傷組織或其他易分散的組織置于液體培養基中，將組織振蕩分散成游離的懸浮細胞，通過繼代培養使細胞增殖來獲得大量細胞群體。液體培養可分為靜止培養和振蕩培養等兩類。靜止培養不需要任何設備，適合于某些原生質體和輕質植物莖段的培養。振蕩培養需要搖床或轉床等設備使培養物和培養基保持充分混和以利于氣體交換。

液體培養有以下優點：（1）增加培養細胞與培養液的接觸面，改善營養供應；（2）可帶走培養物產生的有害代謝產物，避免有害代謝產物局部濃度過高等問題；（3）保證氧的充分供給。所以，液體培養的生長條件比固體培養有很大的改善。實際應用

植物莖段的液體培養基同固體培養基的種類及成分大體一致，唯一不同在于固體培養基含有瓊脂等作為支撐物，液體培養及不含瓊脂等。

第一節液體培養基的配制一、根無性繁殖系的建立1.外植體

根的培養材料一般來自無菌種子發芽產生的幼根或植株根系經滅菌處理后的切段。2.根無性繁殖系的建立

將種子進行表面消毒，在無菌條件下萌發，待根伸長后從根尖一端切取長1.2cm的根尖（或植株的根系經表面滅菌后）接種于培養基中。這些根的培養物生長甚快，幾天后發育出側根。待側根生長約一周后，即切取側根的根尖進行擴大培養，它們又迅速生長并長出側根，又可切下進行培養，如此反復，就可得到從單個根尖衍生而來的離體根的無性繁殖系。這種根可用來進行根系生理生化和代謝方面的實驗研究。油棕根培養（引自劉進平，2005）二、培養方法一、植株再生培養根的離體培養也可以用來再生植株。第一步誘導形成愈傷組織；第二步在再分化培養基上誘導芽的分化，在愈傷組織上分化成小植株。

需要注意的是，愈傷組織如果先分化形成根則往往抑制芽的形成。再生培養流程再生培養視頻

視頻4-1-1再生培養

二、固氮培養

通過分離和培養具有固氮作用的根瘤菌，接種到禾谷類等作物的試管苗根系中，可以實現谷物直接利用生物固氮的捷徑。通過選擇有效的適當濃度的誘瘤劑誘導根瘤菌侵入試管苗根部結瘤固氮，固氮菌接種時要給根系創造傷口，以利于根瘤菌的侵入。接種根瘤菌形成的根瘤具有一定的固氮活性并向宿主提供氮素，能促進植株生長和氮營養的改善，無論在株高、鮮重和葉綠素含量都有提高。

二、培養方法三、影響因素1.植物種類2.培養基多為濃度低的White培養基，許多植物在1/2MS培養基上能生根。糖的使用濃度應稍低，如玫瑰生根蔗糖為2%。3.生長物質培養基中添加適宜濃度的生長素有利于根的形成和生長，常用生長素為IAA、NAA、IBA，濃度范圍一般為0.0-1.0mg/L。三、影響因素4.pH根的培養適宜的pH范圍為5.0~6.0，5.光照大多數人認為，黑暗有利于根的形成。試管苗的生根一般無需考慮光照的影響，有時加一點活性炭可減弱光照，對植物的生根比較有利。6.溫度生根溫度一般控制在16~25℃。第二節莖尖培養

意義：莖尖不僅生長速度快、繁殖率高、不易產生遺傳變異，而且是獲得無病毒苗木的有效途徑，故莖尖培養是植物組織培養最常用的試材之一。類型：莖尖培養分為微莖尖培養和普通莖尖培養。微莖尖指帶有1～2個葉原基的生長錐，其長度不超過0.5mm。普通莖尖指較大的莖尖（如幾mm到幾十mm）、芽尖及側芽。這里主要講普通莖尖培養。這種培養技術簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短。一、普通莖尖培養1.取材

挑選雜菌污染少，生長不久的莖尖。木本植物可在取材前對莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶雜菌。用于普通莖尖培養，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。莖尖取材示意圖視頻4-1-2外植體采集與處理視頻外植體采集與處理視頻

莖尖的解剖構造（引自劉進平，2005）一、普通莖尖培養2.滅菌將采到的莖尖切成0.5～1.0cm長，并將大葉除去，休眠芽預先剝除鱗片。將莖尖置于流水沖洗2～4小時(視干凈程度），再在70%的酒精中處理10-30秒，然后在稀釋5～10倍的次氯酸鈉（商品次氯酸鈉為10%）中浸10～15分鐘，最后用無菌水沖洗3～4次，或者用0.1～0.2%的氯化汞滅菌5～10分鐘，無菌水沖洗5次以上。莖尖滅菌視頻4-1-3外植體滅菌外植體滅菌視頻一、普通莖尖培養

3.接種

為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為0.5cm左右大小。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而發生褐化，使培養基變褐，影響材料的成活。所以在接種時，不能用生銹的解剖刀，動作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時間，也可配制1～5%Vc液，將切下的莖尖材料浸入處理一下。視頻4-1-4接種接種視頻一、普通莖尖培養

4.培養（1）培養基多數莖尖培養采用MS作為基本培養基或改良MS培養基。培養基中生長素是必須的，如2,4-D，IAA，NAA等，一般用0.1mg/L左右，高于此濃度，往往產生畸變芽或形成愈傷組織。莖尖在培養過程中會出現生長太慢、生長太快和生長正常等三種類型。

桑樹莖尖萌發

桑樹莖尖萌發

楊樹頂芽萌發成叢生芽楊樹頂芽萌發成叢生芽

一、普通莖尖培養

4.培養（2）初代培養

莖尖的初代培養主要是通過適宜的培養條件刺激頂芽和腋芽的生長。外植體啟動生長的關鍵主要是培養基的激素配比與濃度，一般應使用較高濃度的細胞分裂素和較低濃度的生長素，解除頂端優勢的抑制作用，生長素濃度過高容易產生愈傷組織。視頻4-1-5初代培養初代培養視頻一、普通莖尖培養

4.培養

（3）繼代培養

莖尖長成的新梢，可切成若干小段，轉入到增殖培養基中。長大后又可切成小段，再轉入新培養基，這樣一代一代繼續下去，便建立和維持了莖尖無性繁殖系。繼代培養的激素濃度要降低或用MS0培養基。有時也可邊進行繼代培養邊進行誘導生根。取比較長的新梢（如2cm以上）轉入生根培養基，余下較短的新梢繼續進行繼代培養。視頻4-1-6繼代培養繼代培養視頻一、普通莖尖培養

4.培養（4）誘導生根誘導生根多采用1/2MS培