免疫定性實驗

性能驗證比對性能驗證術(shù)語與定義概述目錄概述免疫定性檢驗1、定義：免疫檢驗只提供兩種反應結(jié)果的檢測方法，即反應/無反應、陽性/陰性或者是/否的實驗。2、共同特點：陽性結(jié)果只說明分析信號超過了分析閾值（檢出限）或臨界值（臨界值的設定給出簡要的敏感性和特異性組合），陰性結(jié)果則相反。

3、類型：純定性免疫檢驗半定量（滴度）的免疫檢驗以定量方式報告定性結(jié)果的免疫檢驗4、主要檢測項目：ELISA、免疫組化、自身免疫抗體常用的如間接免疫熒光法（IIF）、免疫印跡法（Western-blot或LIA-ANAs)、酶免疫斑點法、部分化學發(fā)光等實驗。有關(guān)術(shù)語和定義1、5%95%濃度區(qū)間(C5C95interval)臨界值附近的分析物濃度，在此區(qū)間之外的檢測到的濃度結(jié)果始終為陰性（濃度<C5）或始終為陽性（濃度>C95）。(注：C5即僅有5%被檢樣本可被判斷為陽性時的分析物濃度，C95即有95%被檢樣本可被判斷為陽性時的分析物濃度。）2、診斷準確度標準是使用某一個/一類方法來判斷待研究特性存在與否的當前最佳可用標準。（這類方法可以是實驗室檢查、影像學檢測、病理學檢查、隨訪信息在內(nèi)的臨床信息。）1）隨著分析系統(tǒng)的發(fā)展，診斷準確度標準可以發(fā)生改變。2）診斷準確度標準不考慮候選方法的結(jié)果。3）診斷準確度標準可以評估指定方法組合的綜合積分，進行最終的陽性/陰性分類3、檢測限：由給定測量程序得到的測得量值，對于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α時，聲稱不存在該成分的誤判概率為β。【術(shù)語“分析靈敏度”有時代表檢測限，但這樣的用法現(xiàn)在不鼓勵】。

檢出限主要包括：檢測低限：是具有定性含義的檢測低限(lowerlimitofdetection，LLD)。是基于零濃度基礎上，用于區(qū)分從無到有的分析能力，即用于評價一個檢測系統(tǒng)測定原本體內(nèi)不存在的物質(zhì)的分析能力。如一些病毒和藥物濃度的測定。生物檢測限：是具有定量含義的生物檢測限，它更真實地反映實際檢測限濃度水平樣本的不確定度。功能靈敏度：功能靈敏度是反映方法能可靠測定的最低濃度，對腫瘤標志物等檢測有重要意義。4、臨界值：

鑒別樣品，作為判斷特定疾病、狀態(tài)或被測量存在或不存在的界限的量值。5、分析靈敏度：

測量示值變化除以相應的被測量值變化所得的商（有的定義為：檢測系統(tǒng)可檢測出的最低分析物濃度）6、分析特異性：測量系統(tǒng)的能力。用指定的測量程序，對一個或多個被測量給出的測量結(jié)果互不依賴也不依賴于接受測量的系統(tǒng)中的任何其它量。

7、診斷靈敏度：

體外診斷檢驗程序可以識別與特定疾病或狀態(tài)相關(guān)的目標標志物存在的能力（在目標標志物已知存在的樣品中也定義為陽性百分數(shù)）。診斷靈敏度=100×TP/（TP+FN）

TP:真陽性值數(shù)

FN:假陰性值數(shù)8、診斷特異性：體外診斷檢驗程序可以識別特定疾病或狀態(tài)相關(guān)的目標標志物不存在的能力。診斷特異性=100×TN/（TN+FP）

TN:真陰性值數(shù)

FP:假陽性值數(shù)9、測量重復性（批內(nèi)重復性試驗）在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和相同地點，并且在短時間段內(nèi)對同一或相似被測對象重復測量。10、測量再現(xiàn)性（日內(nèi)重復性試驗）在包括了不同地點、不同操作者、不同測量系統(tǒng)的測量條件下對同一或相似被測對象重復測量的測量精密度。11、中間測量精密度（天間重復性試驗）在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同的地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內(nèi)的重復測量，但可包含其它相關(guān)條件的改變。12、預測值亦稱預告值，它是表示試驗能作出正確判斷的概率。有陽性預測值和陰性預測值之分。

陽性預測值：是指真陽性人數(shù)占試驗結(jié)果陽性人數(shù)的百分比，表示試驗結(jié)果陽性者屬于真病例的概率。陽性預測值=真陽性／（真陽性十假陽性）×100%

陰性預測值：是指真陰性人數(shù)占試驗結(jié)果陰性人數(shù)的百分比，表示試驗結(jié)果陰性者屬于非病例的概率。陰性預測值=真陰性／（真陰性十假陰性）×100%13、似然比(LR)表達的是患某種疾病的患者所測定不同結(jié)果范圍中，患該病與不患該病的比值。在只有陽性、陰性結(jié)果時，一般分陽性似然比及陰性似然比兩種。

陽性似然比：真陽性率(TPR)與假陽性率(FPR)的比值即為陽性似然比(+LR)。可用以描述當某就診者的該診斷性試驗結(jié)果為陽性時，其患病與不患病的機會比。顯然陽性似然比的值越高，檢驗結(jié)果陽性時，診斷為某病的概率越大，該檢測方法確診疾病的能力就越強。其陽性似然比的計算公式為：陽性似然比=真陽性率／假陽性率=靈敏度／（1-特異度）陰性似然比：假陰性率(FNR)與真陰性率(TNR)的比值即為陰性似然比(-LR)。可用以描述當某就診者的該診斷性試驗結(jié)果為陰性時，其患病與不患病的機會比。顯然陰性似然比越小，則檢驗結(jié)果陰性時，患某病的概率越小，該檢測方法排除疾病的能力就越好。其陰性似然比的計算公式為：陰性似然比=假陰性率／真陰性率=（1-靈敏度）／特異度性能驗證實驗室進行性能驗證的時機新檢驗程序常規(guī)應用之前任何嚴重影響檢驗程序分析性能的情況發(fā)生后，儀器啟用前（包括但不限于儀器主要部件故障、搬遷、設施和環(huán)境的嚴重失控等）任一要素發(fā)生變更（如試劑升級、儀器更新、校準品溯源性改變等）常規(guī)應用期間，定期對檢驗程序分析性能進行評審性能驗證的合格標準及驗證人員試劑盒說明書指標（先決條件！）國際和／或國內(nèi)標準性能實驗驗證只能由本實驗室人員在自己的場地、使用自己的檢測系統(tǒng)進行，廠家的數(shù)據(jù)、外單位的實驗室測定結(jié)果、學術(shù)刊物發(fā)表論文結(jié)論、科技成果等均不能替代，只可做參考。評價前的準備實驗室工作人員的培訓熟悉待評價的試劑或系統(tǒng)掌握樣本和試劑的處理和存儲過程按廠商的要求進行，注意基質(zhì)效應定性實驗需進行陰性和陽性質(zhì)控物測定定性試驗性能驗證的主要內(nèi)容性能驗證指標的選擇應滿足該項目的預期用途，臨床免疫學定性檢驗程序的分析性能參數(shù)一般包括：符合率、精密度（重復性）、檢出限、臨界值、抗干擾能力、血清與血漿結(jié)果一致性等。實驗室應根據(jù)不同檢驗項目的預期用途，選擇對檢驗結(jié)果質(zhì)量有重要影響的參數(shù)進行驗證。

目前行業(yè)內(nèi)對檢驗項目性能驗證及其臨床用途均有要求。如原衛(wèi)生部《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》（2章7條）規(guī)定“醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室提供的臨床檢驗服務應當滿足臨床工作的需要”。2011版三級綜合醫(yī)院評審標準中“臨床檢驗管理與持續(xù)改進”的4．16．1．3（B）規(guī)定應對檢驗項目“進行恰當?shù)姆椒▽W驗證以保證準確度、精密度、靈敏度、線性范圍、干擾及參考范圍設定等各項技術(shù)參數(shù)均能符合臨床使用需求”。1、符合率

——（1）診斷符合率驗證

1)驗證要求：

當診斷和被檢測物的結(jié)果明確（即用金標準進行檢測，且滿足診斷準確度標準時），可采用評估診斷靈敏度和診斷特異性的方法來驗證診斷符合率。1、符合率

——（1）診斷符合率驗證

2)驗證方案：當診斷和被檢物結(jié)果明確時，選取：20份陰性樣本（包含至少10份其他標志物陽性的樣本）20份陽性樣本（包含至少10份弱陽性樣本，1份極高值陽性樣本）注：弱陽性樣本濃度在CUT-OFF值和2-4倍CUT-OFF之間

隨機盲號法重新分號，檢測樣本，將所有檢測結(jié)果匯總?cè)氡怼?/p>

1、符合率——（1）診斷符合率驗證候選實驗金標準（診斷準確度標準）疾病非疾病a(+，陽性)b(+，陽性)a+bc(-，陰性)d(-，陰性)c+dn1n2n診斷符合率計算：診斷靈敏度=[a/n1]×100%診斷特異性=[d/n2]×100%診斷符合率=[（a+d）/n]×100%1、符合率

——（1）診斷符合率驗證

3)可接受標準：

通過驗證——實驗室計算得出的診斷靈敏度、診斷特異性和診斷符合率不低于廠商檢驗方法聲明；

未通過驗證——低于廠商檢驗方法聲明，應尋找原因或更換檢驗方法。1、符合率

——（2）方法符合率驗證臨床免疫學定性檢驗程序當診斷準確度標準不明確時，可采用評估方法符合率的方式來實現(xiàn)符合率的驗證。

包括：1、用候選方法評估已知能力驗證或室間質(zhì)評的樣本；2、用不同方法學或/和相同方法學在不同實驗室之間的比對。

1、符合率

——（2）方法符合率驗證

1)驗證要求：優(yōu)先選用符合以下要求的經(jīng)CNAS認可的醫(yī)學實驗室的檢測方法：

經(jīng)驗證性能符合設定標準的參比系統(tǒng)（在用檢測方法）；

日常室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評/能力驗證合格的在用檢測方法。1、符合率

——（2）方法符合率驗證

2)驗證方案：選取：10份陰性樣本（包含至少5份其他標志物陽性的樣本）10份陽性樣本（包含至少5份弱陽性樣本，1份極高值陽性樣本）

注：弱陽性樣本濃度在CUT-OFF值和2-4倍CUT-OFF之間

共20份樣本，隨機每4份分成一組。采用參比方法和候選方法均每天按照患者樣本檢測程序進行平行檢測一組樣本。將所有檢測結(jié)果匯總?cè)氡怼?/p>

1、符合率——（2）方法符合率驗證候選方法參比方法（非診斷準確度標準）疾病非疾病a(+，陽性)b(+，陽性)a+bc(-，陰性)d(-，陰性)c+dn1n2n陽性符合率=[a/n1]×100%陰性符合率=[d/n2]×100%總符合率=[(a+d)/n]×100%陽性似然比=陽性符合率/（1-陰性符合率）陰性似然比=（1-陽性符合率）/陰性符合率1、符合率

——（2）方法符合率驗證

3)可接受標準：為所用廠商檢驗方法（候選方法）標準。

若無可用的廠商標準時，可根據(jù)實驗室檢測方法的預期用途制定實驗室驗證可接受標準。Anti-HBe符合率驗證報告1.目的評價目前實驗室Anti-HBe檢測系統(tǒng)符合率。2.評價方案隨機抽取20份已知陽性和20份已知陰性的樣本，i2000SR化學發(fā)光儀檢測結(jié)果（A）和STAR&FAME全自動酶免疫分析儀ELISA檢測結(jié)果（B）比較,分別計算陽性符合率和陰性符合率。陰性符合率（%）=被測試劑盒測定真陰性數(shù)/陰性數(shù)*100%，陽性符合率（%）=被測試劑盒測定真陽性數(shù)/陽性數(shù)*100%。3.評價標準

陰性符合率≥80%，陽性符合率≥80%。4.測試儀器及試劑項目Anti-HBeTP濃度單位S/CO測試日期2016.12.16儀器I2000SR儀器編號ISR53465質(zhì)控情況良好試劑廠家雅培試劑批號64013LI00有效期2017.02.17定標品廠家雅培定標品批號61375LIOO有效期2017.04.21樣本來源病人血清比對儀器STAR&FAME全自動酶免分析儀比對方法ELISA5.測試結(jié)果及評價標本檢測結(jié)果A檢測結(jié)果B符合性標本檢測結(jié)果A檢測結(jié)果B符合性10.1++符合212.87--符合20.1++符合2231.87--符合30.1++符合232.98--符合40.1++符合241.87--符合50.1++符合252.86--符合60.1++符合2649.43--符合70.1++符合271.90--符合80.1++符合283.12--符合90.1++符合292.53--符合100.1++符合301.64--符合110.1++符合313.26--符合120.1++符合3212.52--符合130.1++符合3311.26--符合140.1++符合341.64--符合150.1++符合352.09--符合160.1++符合362.34--符合170.1++符合3758.31--符合180.1++符合381.57--符合190.1++符合392.42--符合200.1++符合401.84--符合陰性符合率20/20=100%陽性符合率20/20=100%6.結(jié)論

陰性符合率=100%≥80%，合格；陽性符合率=100%≥80%，合格。評價者：

日期：

審核者：

日期：

2、精密度（重復性）

臨床免疫學定性檢驗程序若以量值或數(shù)值形式表達定性結(jié)果，精密度驗證方法可參照CNAS-GL037《臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南》。1）驗證要求：用于驗證的樣本應是臨床標本，如使用質(zhì)控品則應具有很好的穩(wěn)定性和均一性。

樣本濃度應包括陰性、弱陽性和陽性水平。2、精密度（重復性）2）驗證方案：（檢驗程序以量值或數(shù)值形式表達定性結(jié)果的驗證方法）a）樣本：

陰性樣本2份（至少1份其他標志物陽性）樣本

陽性樣本3份（包含至少1份濃度在cut-off值和2-4倍cut-off值之間的弱陽性，1份極高值陽性）樣本

共5份樣本，按照患者樣本檢測程序進行檢測。b）驗證過程：陽性樣本參照CNAS-CL02-GL037《臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南》。陰性標本跟隨陽性樣本同時檢測。2、精密度（重復性）3）可接受標準：為所用廠商檢驗方法聲明的標準。

若無可用的廠商標準時，實驗室可根據(jù)臨床診療的質(zhì)量要求確定可接受標準。定性實驗重復性驗證純定性實驗重復性驗證1）目的

提供樣本濃度接近臨界值時的精密度結(jié)果，用來確立被評價方法的臨界值，并進一步確立臨界值±20%的樣本濃度范圍是否在該方法臨界值的95%區(qū)間內(nèi)。2）步驟①先確立方法的臨界值：②在臨界值基礎上準備出±20%濃度的樣本；③樣本分別測定20次，記錄陰性及陽性結(jié)果數(shù)；3）結(jié)果分析3）結(jié)果分析當實驗結(jié)果表明“臨界值”樣本的陰性結(jié)果和陽性結(jié)果不是各占50%時，原因可能是：被評估的臨界值濃度不準確、結(jié)果數(shù)據(jù)不充足、方法學劑量反應曲線在臨界值處是非線性的。當實驗結(jié)果表明+20%濃度的樣本產(chǎn)生陽性結(jié)果數(shù)≥95%和-20%濃度的樣本產(chǎn)生陰性結(jié)果數(shù)都≥95%，說明臨界值±20%濃度范圍等于或超出臨界值的95%區(qū)間。對于被測物濃度在臨界值±20%濃度范圍以外的樣本，實驗方法將給出穩(wěn)定的結(jié)果。當陽性和（或）陰性結(jié)果數(shù)<95%時，應另外準備不同濃度的實驗樣本，重新進行評價。定量或量值化實驗（如酶免、化學發(fā)光定性等）的重復性驗證1）基本內(nèi)容：測量重復性（批內(nèi)重復性試驗）測量再現(xiàn)性（日內(nèi)重復性試驗）中間精密度（日間重復性）總的不精密度2）基本方法

測量重復性（批內(nèi)重復性試驗）：在相同條件下（同樣方法、相同試劑同樣儀器、在同一實驗室、由同一人操作）對同一標本在盡可能短時間內(nèi)進行多次計算其均值(X)、批內(nèi)標準差(s)和變異系數(shù)(CV)。

測量再現(xiàn)性(日內(nèi))：在一天內(nèi)對一個或數(shù)個標本做數(shù)批重復測定，計算其均值（X）和日內(nèi)標準差(s)。因在一天內(nèi)重復測定數(shù)批，日內(nèi)重復性試驗所受影響因素比批內(nèi)大，所得日內(nèi)標準差可能比批內(nèi)大一些。

中間精密度（日間）：將同一標本每天一次隨機插入常規(guī)標本中測定，連續(xù)測定20個工作日，計算其均值(X)和標準差(s)。這樣得到的CV值比上述批內(nèi)和日內(nèi)大，適用于實際工作中患者標本測定的精密度評價。總的不精密度：總的不精密度包括了日內(nèi)和日間的不精密度。精密度試驗標本選擇標準液簡便易得，可制成不同濃度，干擾因素少，可作為評價隨機誤差的最佳樣品。凍干質(zhì)控血清穩(wěn)定、使用方便，適用于進行日間重復性試驗。患者標本或混合血清常用于短時間內(nèi)完成的試驗。分析物濃度的選擇-在醫(yī)學上具有決定性意義的濃度水平。試驗樣本數(shù)量在試驗周期內(nèi)至少做20個樣本的檢測試驗條件要盡量在相同的條件下。常用性能可接受性判斷計算得到的標準差符合試劑盒申明的指標將計算得到的標準差與CLIA‘88規(guī)定的總允許誤差進行比較，判斷其不精密度是否可接受。它們應符合下列分析質(zhì)量指標：

檢測系統(tǒng)批內(nèi)CV<1/4CLIA'88允許誤差；檢測系統(tǒng)日間CV<1/3CLIA'88允許誤差；追求質(zhì)量目標<1/6CLIA‘88允許誤差。二、HBsAg批內(nèi)精密度驗證報告1.目的在相同檢測條件下對同一待測物連續(xù)測量結(jié)果的接近程度（批內(nèi)精密度），評價儀器檢測系統(tǒng)的隨機誤差。2.評價方案選擇高低值新鮮混合血清標本各一份，同一批次內(nèi)檢測20次，評價HBsAg的重復性。3.評價標準評價標準：各濃度樣本重復試驗CV值小于廠家聲明（11.9%）。4.測試儀器及試劑項目HBsAg濃度單位

IU/ml測試日期2016.12.13儀器I2000SR儀器編號ISR53465質(zhì)控情況良好試劑廠家雅培試劑批號65216FN00J有效期2017.06.09定標品廠家雅培定標品批號63564FN00有效期2017.08.26樣本來源病人混合血清5.測試結(jié)果及評價Level1Level2編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果145.781144.2410.18110.20242.561246.1620.19120.19346.531343.1630.20130.20445.341445.3440.21140.21542.561545.6350.19150.19644.141645.4260.20160.20746.571744.5370.19170.18843.311844.3180.21180.19945.361943.6590.18190.211044.462045.62100.19200.20Mean(IU/mL)44.73Mean(IU/mL)0.20SD(IU/mL)1.23SD(IU/mL)0.01CV(%)2.76%CV(%)5.11%6.結(jié)論本次實驗兩個濃度樣本CV<11.9%，檢測系統(tǒng)批內(nèi)精密度可接受。

評價者：

日期：

審核者：

日期：

三、HBsAg中間精密度驗證報告1.目的不同操作條件下，在同一儀器上運用相同檢測系統(tǒng)對檢測項目HBsAg的結(jié)果評價。2.評價方案取連續(xù)20天的室內(nèi)質(zhì)控值（高值、低值）計算CV、SD，評價HBsAg的中間不精密度。3.評價標準評價標準：各濃度樣本重復試驗CV值小于廠家聲明（11.9%）。4.測試儀器及試劑項目HBsAg濃度單位

IU/ml測試日期2016.11.01儀器I2000SR儀器編號ISR53465質(zhì)控情況良好試劑廠家雅培試劑批號65216FN00J有效期2017.06.09樣本來源雅培定標品批號63564FN00有效期2017.08.26樣本來源雅培質(zhì)控品5.測試結(jié)果及評價Level1Level2編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果10.26110.251171.8011180.0420.26120.252159.9312176.3030.24130.243165.6813182.6840.25140.244169.9414164.3850.23150.255162.4615166.5160.26160.266161.4216175.1870.23170.277175.5117166.7480.23180.238170.7418154.7490.27190.259167.8419160.52100.26200.2410160.2220163.01Mean(IU/mL)0.25Mean(IU/mL)167.78SD(IU/mL)0.01SD(IU/mL)7.40CV(%)5.27%CV(%)4.41%6.結(jié)論

本次實驗兩個濃度樣本CV<11.9%，檢測系統(tǒng)中間精密度可接受。

評價者：

日期：

審核者：

日期：

3、檢出限1）驗證要求：以下情況應進行檢出限驗證：所用檢驗程序在廠商試劑使用說明書等有檢出限聲明時；有標準物質(zhì)時；或以定量形式表達定性結(jié)果時。

選用定值標準物質(zhì)如國際參考品、國家參考品、廠商參考品進行檢出限驗證。3、檢出限2）驗證方案：使用定值標準物質(zhì)的樣本梯度稀釋至廠商聲明的檢出限濃度，在不同批內(nèi)對該濃度樣本進行測定（如測定5天，每天測定4份樣本），樣本總數(shù)不得少于20個。稀釋液可根據(jù)情況選用廠商提供的稀釋液或陰性血清，該陰性血清除被驗證的目標物必須陰性外，其對應的相關(guān)物質(zhì)（如抗原或抗體）也必須陰性，且試劑說明書上申明的干擾物質(zhì)必須在允許范圍之內(nèi)。3）可接受標準：如果≥95%的樣本檢出陽性，檢出限驗證通過。檢出低限檢測步驟試驗樣品一般制備兩種不同類型的樣品。

(1)空白樣品：不含有待分析物的樣品，常使用系列校準品中的“零標準”作為空白，理想的空白樣品應和所檢測的患者樣本具有相同的基質(zhì)。

(2)檢測限樣品：在空白樣品中加入一定量的分析物配成檢測限樣品，使其濃度達預期或廠家推薦的檢測限濃度，通常在預期檢測限度附近制備幾份不同濃度的檢測限樣品。測定次數(shù)通常測定10

20次，多比少好。試驗時間如從空白樣品的重復性了解檢測低限，常做批內(nèi)重復性或短期試驗；如從檢測限樣品的重復性了解檢測低限，推薦做較長時間（10天）的重復性試驗來評價日間的檢測性能。

結(jié)果計算與判斷檢測低限：更多反映空白樣本測定的不確定度

95%可能性LLD=均值空白+2s空白樣本

99.7%可能性LLD=均值空白+3s空白樣本生物檢測限：更真實反映實際檢測限濃度水平樣本測定的不確定度

95%可能性BLD=LLD+2s檢測限樣本

99.7%可能性BLD=LLD+3s檢測限樣本功能靈敏度：指重復測定變異系數(shù)為20%的檢測限樣本濃度-即在預期檢測限附近的幾份不同濃度樣本重復性試驗測定結(jié)果中，變異系數(shù)CV為20%的檢測限樣本濃度；或某個樣本最先出現(xiàn)(均值-3s)大于空白樣品(均值+3s)的濃度。它反映方法能可靠測定的最低濃度。一、Anti-HBe最低檢出限的驗證報告1.目的驗證廠商提供的Anti-HBe的檢出低限（廠商提供的檢出底限S/CO值為1）。2.評價方案采用康徹斯坦Anti-HBe參考品作為定值樣本（濃度為4NCU/ml），用生理鹽水做一系列稀釋（1:2,1:4,1:6,1:8,1:10），采用I2000SR全自動免疫分析儀依次檢測稀釋樣本，選取本稀釋度S/CO值大于1，但下一稀釋度S/CO值小于1的稀釋度，再將該稀釋度樣本作20次重復測試，如果95%以上S/CO值小于1，則該稀釋度對應樣本的濃度即為Anti-HBe的檢出低限。3.評價標準以95%以上S/CO值小于1的該稀釋度對應樣品的濃度作為Anti-HBe的檢出低限。4.測試儀器及試劑Anti-HBeTP濃度單位S/CO測試日期2016.12.16儀器I2000SR儀器編號ISR53465質(zhì)控情況良好試劑廠家雅培試劑批號64013LI00有效期2017.02.17定標品廠家雅培定標品批號61375LIOO有效期2017.04.21樣本來源HCV參考品。5.測試結(jié)果及評價康徹斯坦Anti-HBe參考品系列稀釋OD值記錄稀釋度1:21:41:61:81:10濃度(NCU/ml)2.001.000.660.500.25S/CO1.451.211.120.870.49以Anti-HBe參考品1:8稀釋度樣品做20次重復性檢測記錄及評價表編號結(jié)果(S/CO)編號結(jié)果(S/CO)編號結(jié)果(S/CO)編號結(jié)果(S/CO)10.8760.78110.87160.8420.7970.83120.92170.8130.8380.81130.90180.8640.8390.85140.85190.8550.86100.82150.90200.85陽性率20/20=100%6.結(jié)論1:8稀釋度樣品20次重復性檢測結(jié)果顯示，95%以上S/CO>1，所以Anti-HBe的檢出低限為0.50NCU/ml。

評價者：

日期：

審核者：

日期：4、臨界值1）驗證要求：依據(jù)制造商臨界值確定方案進行驗證對于以臨界值（cutoffvalue；C50）來判斷陰陽性的檢測方法，應在實驗室現(xiàn)有檢測條件下，可參照WS/T505和WS/T494標準評價臨界值，評價（臨界值-20%）至（臨界值+20%）的濃度范圍是否包含于、位于或者超出這種方法的95%區(qū)間。候選方法的廠商說明書有時會指定分析物的臨界值。如果有提供臨界值，則在以下實驗中可將其作為代替C50的近似值。如果沒有提供臨界值，則可以從陽性樣本中進行系列稀釋，并且重復檢測稀釋度樣本，以估計產(chǎn)生50％陽性和50％陰性結(jié)果的濃度，對應于該稀釋度濃度即為C50。4、臨界值2）驗證方案：a.當臨界值是基于陰性樣本或陰性人群確定時，選擇40例健康人的新鮮血清樣本，檢測結(jié)果用“1/3”原則來排除離群值，即將疑似的離群數(shù)據(jù)與其相鄰數(shù)據(jù)之差D除以數(shù)據(jù)全距R，若D/R≥1/3則為離群值，檢測過程中將發(fā)現(xiàn)的離群值舍棄，并用新的健康體檢人群個體代替，最終確保40例檢測結(jié)果都不含有離群值。若40例樣本檢測均小于說明書提供臨界值或僅有不多于2例樣本超出說明書提供臨界值，則本次驗證通過。b.選擇健康人和其他標志物陽性的患者新鮮血清樣本各30份，分3~5批，3~5天進行檢測，計算平均值M和標準差SD。臨界值驗證值為M+3SD，若該驗證值不大于說明書提供臨界值（或者在說明書提供臨界值±20%內(nèi)），則驗證通過。4、臨界值2）驗證方案：c.當臨界值同時基于陰性樣本或陰性人群和陽性樣本或陽性人群確定時，除了上述方案外，還需增加陽性樣本的驗證。選擇弱陽性（濃度均勻分布在臨界值±20%內(nèi)）的新鮮血清或質(zhì)控血清樣本共60例，分3～5批3～5天進行檢測，計算平均值M和標準差SD，臨界值驗證值為M-3SD。若驗證值與說明書提供的臨界值接近（或者在說明書提供臨界值±20%內(nèi)），則驗證通過。4、臨界值2）驗證方案：d.制備足夠40次重復檢測的3個樣本：分別為處于臨界濃度、高于臨界濃度20%和低于臨界濃度20%的樣本；重復檢測樣本40次，確定每一份樣本結(jié)果為陽性和陰性的百分比。

臨界濃度的陽性結(jié)果于（14-26）/40（35%-65%）之間，C50驗證通過。當（臨界濃度+20%）陽性結(jié)果≥36/40（90%），且（臨界濃度-20%）陰性結(jié)果≥36/40（90%），表明（臨界值-20%）至（臨界值+20%）的濃度范圍位于這種方法的95%區(qū)間。4、臨界值2）驗證方案：e.若驗證不通過，實驗室需根據(jù)驗證的結(jié)果評估本實驗室條件下，該方法的假陰性、假陽性的可能性，并結(jié)合預期用途（篩查、診斷或確認試驗等），制定本實驗室的復檢規(guī)則。5、抗干擾能力1）驗證要求：應驗證與檢測對象可能存在交叉反應的物質(zhì)對檢測的影響。應驗證說明書中涉及的干擾物質(zhì)對測定的影響，這些干擾物質(zhì)主要包括血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素和免疫球蛋白G等。對于病原體標志物檢測，還應驗證與檢測目標物可能存在交叉反應的病原體對檢測的影響，這類病原體主要是與檢測目標物可能有交叉抗原、易引起相同或相似的臨床癥狀的病原體。宜在病原體感染的醫(yī)學決定水平（弱陽性）進行驗證。5、抗干擾能力2）驗證方案：可參照WS/T416-2013《干擾實驗指南》。5、抗干擾能力3）相關(guān)物質(zhì)干擾驗證試驗：

a）樣本準備：收集目標物分別為陰性、弱陽性、陽性不同濃度的5份樣本。同時收集目標物陰性的高濃度血紅蛋白、高甘油三酯、高膽紅素和IgG樣本。

5、抗干擾能力b）抗干擾具體方案1）將收集的高濃度血紅蛋白、高甘油三酯、高膽紅素和IgG樣本分別加至上述選取目標物分別為陰性、弱陽性、陽性不同濃度的5份樣本中，使其干擾物質(zhì)濃度達到廠商說明書聲稱的干擾濃度。2）加入干擾物質(zhì)的量應小于樣本量的10%（對照組加入等量的健康人陰性血清），以上干擾物濃度可在相應的分析儀上檢測。3）未添加干擾物質(zhì)的陰性、弱陽性、陽性不同濃度的5份樣本作為對照。4）對所有樣本同時進行目標物檢測，每個濃度重復檢測2次，計算均值并記錄。c）可接受標準加干擾物質(zhì)的陽性組結(jié)果和陽性對照組結(jié)果之間符合率應≥80%；添加干擾物質(zhì)的陰性組和陰性對照組結(jié)果均為陰性。5、抗干擾能力4）病原體干擾驗證試驗：a）樣本準備：收集目標物分別為陰性、弱陽性、陽性不同濃度的5份樣本。同時收集與目標物可能有交叉抗原、易引起相同或相似臨床癥狀的病原體樣本（濃度為弱陽性水平）。

5、抗干擾能力b）抗干擾具體方案1）將收集與目標物可能有交叉抗原、易引起相同或相似的臨床癥狀的病原體弱陽性樣本分別加至上述選取目標物分別為陰性、弱陽性、陽性不同濃度的5份樣本中。2）加入干擾物質(zhì)的量應小于樣本量的10%（對照組加入等量的健康人陰性血清），以上干擾物病原體弱陽性樣本可在相應的分析儀上檢測。3）未添加干擾物質(zhì)的陰性、弱陽性、陽性不同濃度的5份樣本作為對照。4）對所有樣本同時進行目標物檢測，記錄結(jié)果。c）可接受標準：加干擾物質(zhì)的陽性組結(jié)果和陽性對照組結(jié)果之間符合率應≥80%；添加干擾物質(zhì)的陰性組和陰性對照組結(jié)果均為陰性。6、血漿與血清樣本結(jié)果的一致性1）驗證要求：對于廠商試劑說明書上可以同時使用血清或者血漿的樣本，需對不同的抗凝劑的影響進行評估。2）驗證方案：分別選取血清和血漿各20份樣