第二節(jié)動物細(xì)胞工程

動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體單克隆抗體1.動物細(xì)胞融合技術(shù)2.設(shè)計單克隆抗體制備的實驗方案本節(jié)主要解決的困惑單克隆抗體困惑點一：動物細(xì)胞融合技術(shù)合作探究要求：

1.請對比植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)，嘗試比較兩者之間的異同點

2.先獨(dú)立思考，然后小組合作，派代表分享，時間2min。比較項目植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)意義雜種植株細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞增殖細(xì)胞膜的流動性植物細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁使細(xì)胞分散物理（離心、振蕩、電激）化學(xué)（PEG）物理、化學(xué)方法（PEG）、滅活的病毒制備單克隆抗體原理融合前處理誘導(dǎo)融合的方法用途原理方法技術(shù)過程應(yīng)用突破遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，打破生殖隔離點撥提升1為什么植物體細(xì)胞雜交技術(shù)不能用滅活的病毒作誘導(dǎo)劑？滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面病毒表面糖蛋白和細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂質(zhì)分子重排，細(xì)胞膜打開單克隆抗體1、下列關(guān)于動物細(xì)胞融合的說法,錯誤的是()A.細(xì)胞融合前要用酶解法將組織分散成單個細(xì)胞B.細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動性C.融合后得到的雜交細(xì)胞具有兩個或多個親本細(xì)胞的遺傳信息D.融合后得到的雜交細(xì)胞具有兩個細(xì)胞核D學(xué)以致用1單克隆抗體

2.(2018江蘇單科,22,3分)如圖為細(xì)胞融合的示意圖,下列敘述正確的是(不定項) ()A.若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞,需先去分化再誘導(dǎo)融合B.a細(xì)胞和b細(xì)胞之間的融合需要促融處理后才能實現(xiàn)C.c細(xì)胞的形成與a、b細(xì)胞膜的流動性都有關(guān)D.c細(xì)胞將同時表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因BC學(xué)以致用1單克隆抗體困惑點二：設(shè)計制備單克隆抗體的方案合作探究要求：1.閱讀以下資料,設(shè)計制備治療新冠的單克隆抗體實驗方案，可用簡單文字和箭頭表示，完成后拍照上傳，小組長上傳即可。2.請先獨(dú)立思考，然后小組合作交流，派代表展示成果，時間4min。

資料：人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。

骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖。單克隆抗體的制備過程123456789101111BB、B瘤、瘤瘤（一篩）：利用選擇培養(yǎng)基獲得雜交瘤細(xì)胞（二篩）：獲得能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞腹腔中有易于培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的條件單克隆抗體滅活新冠病毒獲得產(chǎn)生抗新冠病毒抗體的B淋巴細(xì)胞知識拓展：HAT培養(yǎng)基原理雜交瘤細(xì)胞是異源四倍體細(xì)胞，遺傳性質(zhì)不穩(wěn)定，在培養(yǎng)過程中會有染色體丟失現(xiàn)象，直到細(xì)胞呈現(xiàn)穩(wěn)定狀態(tài)為止。因此在建立雜交瘤細(xì)胞系過程中要經(jīng)常檢查抗體效價。1.細(xì)胞合成DNA通常有2條途徑：第1條途徑是利用糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA；第2條途徑是通過HGPRT利用核苷酸的前體合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，HAT培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基添加了次黃嘌呤(H)、甲氨蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)，A可以阻斷DNA合成的第1條途徑，H和T則是第2條途徑中合成核苷酸的原料。HAT培養(yǎng)基可以用于單克隆抗體制備雜交瘤細(xì)胞的選擇，小鼠骨髓瘤細(xì)胞是一類HGPRT代謝缺陷型細(xì)胞。說法正確的是(

)

A.小鼠免疫B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后，培養(yǎng)基上會有3種類型的細(xì)胞 B.HAT培養(yǎng)基中未融合的骨髓瘤細(xì)胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡 C.HAT培養(yǎng)基中未融合的免疫B細(xì)胞仍具有增殖能力而持續(xù)進(jìn)行細(xì)胞分裂 D.HAT培養(yǎng)基中選擇出的雜交瘤細(xì)胞都能無限增殖和產(chǎn)生所需抗體B學(xué)以致用22.(2019·江蘇卷)如圖為雜交瘤細(xì)胞制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT-），在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是（）A.骨髓瘤細(xì)胞和免疫B細(xì)胞可用仙臺病毒誘導(dǎo)融合B.骨髓瘤細(xì)胞在HAT篩選培養(yǎng)液中能正常增殖C.免疫B細(xì)胞的種類不唯一，所以雜交瘤細(xì)胞仍需進(jìn)一步篩選D.篩選出的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)時需添加抗生素防止真菌污染C學(xué)以致用2單克隆抗體3.（2021泰安期中）為了解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B淋巴細(xì)胞染色體丟失的問題，研究者在單克隆抗體的制備過程中增加了一個步驟，如下圖所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一種病毒顆粒）感染動物B淋巴細(xì)胞，并使之成為“染色體核型穩(wěn)定”的細(xì)胞株。這樣的細(xì)胞株能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對烏本苷（Oua）敏感。下列相關(guān)分析不合理的是（）A.雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能導(dǎo)致抗體產(chǎn)生能力下降B.雜交瘤細(xì)胞還需要經(jīng)過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)過多次篩選，才能獲得所需細(xì)胞C.骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)該無法在HAT選擇培養(yǎng)基中存活D.雜交瘤細(xì)胞具有持續(xù)產(chǎn)生抗EBV抗體的能力D學(xué)以致用2知識拓展注射到病人體內(nèi)后，病人體內(nèi)的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了針對這些抗體的抗體(抗抗體，或稱為人抗鼠抗體，humananti-mouseantibody,HAMA),迅速將這些單克隆抗體中和掉了。D1.(2022·山東卷，15)如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是(

)A.雙抗可同時與2種抗原結(jié)合B.利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞C.篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原D.同時注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞學(xué)以致用3知識拓展——免疫偶聯(lián)物（ADC）2.抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細(xì)胞毒素與單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷，過程如圖所示。下列表述正確的是(

)CA.ADC可通過主動運(yùn)輸進(jìn)入腫瘤細(xì)胞B.抗體進(jìn)入細(xì)胞后激活溶酶體酶，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡C.單克隆抗體攜帶細(xì)胞毒素與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合D.腫瘤細(xì)胞凋亡是細(xì)胞主動死亡的過程，所以不會產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)學(xué)以致用4知識拓展——CAR-T技術(shù)CAR能夠特異性地識別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的特定抗原學(xué)以致用5細(xì)胞毒性T細(xì)胞表面的抗原受體(CAR)與B細(xì)胞淋巴瘤(MCL)細(xì)胞表面的抗原特異性結(jié)合（不定項）CD19是一種抗原，廣泛表達(dá)于B細(xì)胞系時細(xì)胞膜上，包括屬要的B細(xì)胞。CD19與B淋已細(xì)胞的增殖、分化、活化以及抗體的產(chǎn)生有關(guān)，也是診浙B細(xì)胞系腫瘤的重要統(tǒng)志物。CARI療法是對B細(xì)胞系腫瘤的一種免疫療法，其操作是從患者血液提取T細(xì)胞并對其進(jìn)行基因改造，使其表面產(chǎn)生能夠識別CD19的讓嵌抗原受體(CAR)，將改造后的T細(xì)胞大量擴(kuò)增后輸回患者體內(nèi)可以清除瘟細(xì)胞。下列說法正確的是()A.CD19基因突變患者存在嚴(yán)重的體液免疫和細(xì)胞免缺陷B.CAR-T療法可能會使患者出現(xiàn)細(xì)胞因子風(fēng)暴的不良反應(yīng)C，輸回患者體內(nèi)的CAR-T細(xì)胞一般不會引發(fā)免疫排斥反應(yīng)D，腫瘤細(xì)胞的CD19表達(dá)量減少會導(dǎo)致CAR-T療法的治療效果降低學(xué)以致用5BCD單克隆抗體制備過程的“123”1次融合

一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－一種新細(xì)胞－－一個新優(yōu)勢－－三個“新”滅活病毒雜交瘤細(xì)胞特異性強(qiáng)、靈敏度高、大量制備點撥提升22次篩選3次培養(yǎng)

（B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞）（選雜交瘤細(xì)胞、選產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞）（骨髓瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞）單克隆抗體1.診斷試劑抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體艾滋病檢測試劑乙肝測定試劑與生活的聯(lián)系如：單克隆抗體+藥物=“生物導(dǎo)彈”可用于治療癌癥2.治療疾病和運(yùn)載藥物單克隆抗體3.目前市售的“早早孕試紙”是通過孕婦妊娠早期尿液檢驗HCG（人絨毛膜促性腺激素），其原理如下圖：(1)若“早早孕試紙”產(chǎn)品質(zhì)量合格，使用時__________（填“C”或“T”或“C和T”）線一定要顯色，若該線顯色，則表明待測樣品從樣品墊順利到達(dá)吸水墊。若使用該試紙檢測時結(jié)果表明妊娠，則圖中_________（填“C”或“T”或“C和T”）線顯色，且發(fā)生了_________種抗原—抗體雜交。(2)試紙中用到的抗體一般采用單克隆抗體技術(shù)制備，如抗鼠IgG抗體的制備過程為：先將_________注入到小鼠體內(nèi)，從小鼠的_________中獲取B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，并篩選出雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)行_________，即可獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。注：膠體金：可與蛋白質(zhì)牢固結(jié)合，大量聚集時肉眼可