實驗五凝集試驗一、目的要求掌握直接凝集、間接凝集反應的原理掌握玻片凝集反應、試管凝集反應、微量間接血凝反應的操作方法與結果判定凝集反應的類型兩大類直接凝集試驗間接凝集試驗玻片法：定性試管法：定量乳膠凝集試驗碳素凝集試驗間接血凝試驗一、直接凝集反應的原理

凝集試驗的發生分兩階段,當特異抗體與相應抗原顆粒相遇時，發生特異性的結合形成抗原抗體復合物，降低了抗原分子間的靜電排斥力。第二步在電解質的參與下進一步中和復合物外層的電荷，從而聚集成較大的凝集塊。通常，細菌和紅細胞等顆粒性抗原在懸液中帶弱負電荷,在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀態。二、間接凝集實驗原理將可溶性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關的、具有一定大小的不溶性顆粒（統稱為載體顆粒）的表面，然后與相應抗體（或抗原）作用，在有電解質存在的適宜條件下，所出現的特異性凝集反應稱為間接凝集反應，間接凝集試驗由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應面積，因此當顆粒上的抗原與微量抗體結合后，就足以出現肉眼可見的凝集反應。常用的載體有紅細胞（O型人紅細胞、綿羊紅細胞），聚苯乙烯乳膠顆粒，其次為活性炭、白陶土、離子交換樹脂、火棉膠等。將可溶性抗原吸附到載體表面的過程為致敏以此建立的檢測方法稱為間接凝集試驗。二、實驗材料1.玻板凝集試驗（1）玻片、移液槍、牙簽等；（2）布氏桿菌平板凝集抗原、布氏桿菌標準陽性血清和陰性血清。2.試管凝集試驗（1）試管（1㎝×8㎝）、試管架、恒溫箱、各規格移液槍等；（2）布氏桿菌試管凝集抗原及布氏桿菌陽性血清、陰性血清；（3）被檢血清；（4）滅菌0.5%石碳酸生理鹽水。3.間接血凝試驗1.96孔110°V型醫用血凝板，與血凝板大小相同的玻板或塑料板。2.微量移液器（50微升25微升）取液塑料咀。3.微量振蕩器。4.口蹄疫血凝抗原。5.口蹄疫陰性對照血清。6.口蹄疫陽性對照血清。7.稀釋液。8.待檢血清。9.濕盒三、操作方法1.玻板凝集試驗（1）在潔凈玻片上，各加15μL布氏桿菌陽性血清、陰性血清、待檢血清與生理鹽水。

（2）加入布氏桿菌平板抗原15μL，滴在血清附近，不與血清接觸。用牙簽將血清與抗原混勻，輕輕搖動玻板使液滴呈旋狀運動。陰性血清陽性血清生理鹽水待檢血清2.試管凝集試驗（1）取試管八支，按下表加入生理鹽水；（2）取布氏桿菌血清進行梯度稀釋；（3）加入布氏桿菌檢測抗原；（4）充分混勻，置37℃溫箱24小時。單位(ml)3.間接血凝試驗（微量法）的具體操作步驟（1）平板凝集試驗結果判定：

出現顆粒狀或塊狀凝集者為陽性反應；未出現凝集者為陰性反應。（2）試管凝集實驗結果判定：判定標準：

出現“++”以上的凝集現象的最高血清稀釋度為血清的凝集價牛、馬和駱駝于1：100稀釋度，豬、山羊和犬于1：50稀釋度出現“++”以上凝集現象時，被檢血清應判定為陽性反應。牛、馬和駱駝于1：50，豬、養和犬于1：25稀釋度出現“++”以上凝集現象時，應判為可疑反應。（3）間接血凝試驗結果判定紅細胞成薄層凝集，布滿整個孔底或邊緣卷曲呈荷葉邊狀為100%凝集，記錄為“#";紅細胞成薄層凝集，但面積較小，中心比較致密，邊緣松散，即為50%凝集，記錄為“++”，介于上述兩者之間為75%凝集，記錄為“+++”；紅細胞大部分集中于中央，周圍有少量凝集為25%