四、馬鼻疽防治技術規范

馬鼻疽(Glanders)是由假單胞菌科假單胞菌屬的鼻疽假單胞菌

感染引起的一種人獸共患傳染病。我國將其列為二類動物疫病。

為預防、控制和消滅馬鼻疽，依據《中華人民共和國動物防疫法》

及有關的法律法規，特制定本規范。

1適用范圍

本規范規定了馬鼻疽的診斷、疫情報告、疫情處理、防治措施、

控制和消滅標準。

本規范適用于中華人民共和國境內從事馬屬動物的飼養、經營和

馬屬動物產品加工、經營，以及從事動物防疫活動的單位和個人。

2診斷

2.1流行特點

以馬屬動物最易感，人和其它動物如駱駝、犬、貓等也可感染。

鼻疽病馬以及患鼻疽的其它動物均為本病的傳染源。自然感染主要通

過與病畜接觸，經消化道或損傷的皮膚、黏膜及呼吸道傳染。本病無

季節性，多呈散發或地方性流行。在初發地區，多呈急性、暴發性流

行；在常發地區多呈慢性經過。

2.2臨床特征

本病的潛伏期為6個月。

臨床上常分為急性型和慢性型。

急性型病初表現體溫升高，呈不規則熱(39?4UC)和頜下淋

巴結腫大等全身性變化。肺鼻疽主要表現為干咳，肺部可出現半濁音、

濁音和不同程度的呼吸困難等癥狀；鼻腔鼻疽可見一側或兩側鼻孔流

出漿液、黏液性膿性鼻汁，鼻腔黏膜上有小米粒至高粱米粒大的灰白

色圓形結節突出黏膜表面，周圍繞以紅暈，結節壞死后形成潰瘍，邊

緣不整，隆起如堤狀，底面凹陷呈灰白色或黃色；皮膚鼻疽常于四肢、

胸側和腹下等處發生局限性有熱有痛的炎性腫脹并形成硬固的結節。

結節破潰排出膿汁，形成邊緣不整、噴火口狀的潰瘍，底部呈油脂樣，

難以愈合。結節常沿淋巴管徑路向附近組織蔓延，形成念珠狀的索腫。

后肢皮膚發生鼻疽時可見明顯腫脹變粗。

慢性型臨床癥狀不明顯，有的可見一側或兩側鼻孔流出灰黃色

膿性鼻汁，在鼻腔黏膜常見有糜爛性潰瘍，有的在鼻中膈形成放射狀

斑痕。

2.3病理變化

主要為急性滲出性和增生性變化。滲出性為主的鼻疽病變見于急

性鼻疽或慢性鼻疽的惡化過程中；增生性為主的鼻疽病變見于慢性鼻

疽。

肺鼻疽鼻疽結節大小如粟粒，高粱米及黃豆大，常發生在肺膜

面下層，呈半球狀隆起于表面，有的散布在肺深部組織，也有的密布

于全肺，呈暗紅色、灰白色或干酪樣。

鼻腔鼻疽鼻中膈多呈典型的潰瘍變化。潰瘍數量不一，散在或

成群，邊緣不整，中央象噴火口，底面不平呈顆粒狀。鼻疽結節呈黃

白色，粟粒呈小豆大小，周圍有暈環繞。鼻疽斑痕的特征是呈星芒狀。

皮膚鼻疽初期表現為沿皮膚淋巴管形成硬固的念珠狀結節。多

見于前驅及四肢，結節軟化破潰后流出膿汁，形成潰瘍，潰瘍有堤狀

邊緣和油脂樣底面，底面覆有壞死性物質或呈顆粒狀肉芽組織。

2.4實驗室診斷

2.4.1變態反應診斷

變態反應診斷方法有鼻疽菌素點眼法、鼻疽菌素皮下注射法、鼻

疽菌素眼瞼皮內注射法，常用鼻疽菌素點眼法（見附件）。

2.4.2鼻疽補體結合反應試驗（見附件）。該方法為較常用的輔

助診斷方法，用于區分鼻疽陽性馬屬動物的類型，可檢出大多數活動

性患畜。

2.5結果判定

無臨床癥狀慢性馬鼻疽的診斷以鼻疽菌素點眼為主，血清學檢查

為輔；開放性鼻疽的診斷以臨床檢查為主，病變不典型的，則須進行

鼻疽菌素點眼試驗或血清學試驗。

2.5.1具有明顯鼻疽臨床特征的馬屬動物，判定為開放性鼻疽病

畜。

2.5.2鼻疽菌素點眼陽性者，判定為鼻疽陽性畜。

3疫情報告

3.1任何單位和個人發現疑似疫情，應當及時向當地動物防疫監

督機構報告。

3.2動物防疫監督機構接到疫情報告并確認后，按《動物疫情報

告管理辦法》及有關規定及時上報。

4疫情處理

4.1發現疑似患病馬屬動物后，畜主應立即隔離患病馬屬動物,

限制其移動，并立即向當地動物防疫監督機構報告。動物防疫監督機

構接到報告后，應及時派員到現場進行診斷，包括流行病學調查、臨

床癥狀檢查、病理檢查、采集病料、實驗室診斷等，并根據診斷結果

采取相應防治措施。

4.2確診為馬鼻疽病畜后，當地縣級以上人民政府畜牧獸醫行政

管理部門應當立即派人到現場，劃定疫點、疫區、受威脅區；采集病

料、調查疫源，及時報請同級人民政府對疫區實行封鎖，并將疫情逐

級上報國務院畜牧獸醫行政管理部門。縣級以上人民政府根據需要組

織有關部門和單位采取隔離、撲殺、銷毀、消毒等強制性控制、撲滅

措施，并通報毗鄰地區。

4.2.1劃定疫點、疫區、受威脅區

疫點指患病馬屬動物所在的地點，一般是指患病馬屬動物的同

群畜所在的養殖場（戶）或其它有關屠宰、經營單位；散養情況下,

疫點指患病馬屬動物所在的自然村（屯）。

疫區由疫點外延3公里范圍內的區域。疫區劃分時注意考慮當

地的飼養環境和天然屏障（如河流、山脈等）。

受威脅區是指疫區外延5公里范圍內的區域。

4.2.2封鎖

按規定對疫區實行封鎖。疫區封鎖期間，染疫和疑似染疫的馬屬

動物及其產品不得出售、轉讓和調群，禁止移出疫區；繁殖馬屬動物

要用人工授精方法進行配種；種用馬屬動物不得對疫區外馬屬動物配

種；對可疑馬屬動物要嚴格隔離檢疫；關閉馬屬動物交易市場。禁止

非疫區的馬屬動物進入疫區，并根據撲滅疫情的需要對出入封鎖區的

人員、運輸工具及有關物品采取消毒和其它限制性措施。

4.2.3隔離

當發生馬鼻疽時，要及時應用變態反應等方法在疫點對馬屬動物

進行檢測，根據檢測結果，將馬屬動物群分為患病群、疑似感染群和

假定健康群三類。立即撲殺患病群，隔離觀察疑似感染群、假定健康

群。經6個月觀察，不再發病方可解除隔離。

4.2.4檢測

疫區內須對疑似感染馬屬動物和周圍的馬屬動物隔離飼養，每隔

6個月檢測一次，受威脅區每年進行兩次血清學（鼻疽菌素試驗）監

測，直至全部陰性為止；無疫區每年進行一次血清學檢測。

4.2.5撲殺

對臨床病畜和鼻疽菌素試驗陽性畜，均須在不放血條件下進行撲

殺。

4.2.6銷毀處理

病畜和陽性畜及其胎兒、胎衣、排泄物等按照GB16548《畜禽病

害肉尸及其產品無害化處理規程》進行無害化處理。焚燒和掩埋的地

點應選擇距村鎮、學校、水源、牧場、養殖場等1公里以外的地方,

挖深坑將尸體焚燒后掩埋，掩埋土層不得低于1.5米。

4.2.7消毒

對患病或疑似感染馬屬動物污染的場所、用具、物品等嚴格進行

消毒；污染的墊料及糞便等采取堆積泥封發酵、高溫等方法處理后方

可使用。

4.2.8封鎖的解除

疫區從最后一匹患病馬屬動物撲殺處理后，并經徹底消毒等處理

后，對疫區內監測90天，未見新病例；且經過半年時間采用鼻疽菌

素試驗逐匹檢查，未檢出鼻疽菌素試驗陽性馬屬動物的，并對所污染

場所、設施設備和受污染的其它物品徹底消毒后，經當地動物防疫監

督機構檢查合格，由原當地縣級以上獸醫行政主管部門報請原發布封

鎖令人民政府解除封鎖。

5預防與控制

5.1加強飼養管理，做好消毒等基礎性防疫工作，提高馬匹抗病

能力。

5.2檢疫

異地調運馬屬動物，必須來自非疫區；出售馬屬動物的單位和個

人，應在出售前按規定報檢，經當地動物防疫監督機構檢疫，證明馬

屬動物裝運之日無馬鼻疽癥狀，裝運前6個月內原產地無馬鼻疽病例,

裝運前15天經鼻疽菌素試驗或鼻疽補體結合反應試驗，結果為陰性，

并簽發產地檢疫證后，方可啟運。

調入的馬屬動物必須在當地隔離觀察30天以上，經當地動物防

疫監督機構連續兩次（間隔5?6天）鼻疽菌素試驗檢查，確認健康

無病，方可混群飼養。

運出縣境的馬屬動物，運輸部門要憑當地動物防疫監督機構出具

的運輸檢疫證明承運，證明隨畜同行。運輸途中發生疑似馬鼻疽時，

畜主及承運者應及時向就近的動物防疫監督機構報告，經確診后，動

物防疫監督機構就地監督畜主實施撲殺等處理措施。

5.3監測

穩定控制區每年每縣抽查200匹（不足200匹的全檢），進行鼻

疽菌素試驗檢查，如檢出陽性反應的，則按控制區標準采取相應措施。

消滅區每縣每年鼻疽菌素試驗抽查馬屬動物100匹（不足100

匹的全檢）。

6控制和消滅標準

6.1控制標準

6.1.1縣級控制標準

控制縣（市、區、旗）應達到以下三項標準：

A、全縣（市、區、旗）范圍內，連續兩年無馬鼻疽臨床病例。

B、全縣（市、區、旗）范圍內連續兩年檢查，每年抽檢200匹

（不足200匹全檢），經鼻疽菌素試驗陽性率不高于0.5%。

C、鼻疽菌素試驗陽性馬屬動物全部撲殺，并做無害化處理。

6.1.2市級控制標準

全市（地、盟、州）所有縣（市、區、旗）均達到控制標準。

6.1.3省級控制標準

全省所有市（地、盟、州）均達到控制標準。

6.1.4全國控制標準

全國所有省（市、自治區）均達到控制標準。

6.2消滅標準

6.2.1縣級馬鼻疽消滅標準必須具備以下兩項條件：

A、達到控制標準后，全縣（市、區、旗）范圍內連續兩年無馬

鼻疽病例。

B、達到控制標準后，全縣（市、區、旗）范圍內連續兩年鼻疽

菌素試驗檢查，每年抽檢100匹（不足100匹者全檢），全部陰性。

6.2.2市級馬鼻疽消滅標準

全市（地、盟、州）所有縣（市、區、旗）均達到消滅標準。

6.2.3省級馬鼻疽消滅標準

全省所有市（地、盟、州）均達到消滅標準。

6.2.4全國馬鼻疽消滅標準

全國所有省（市、自治區）均達到消滅標準。

附件

馬鼻疽診斷技術及判定標準

1總則

1.1為統一馬鼻疽（以下簡稱鼻疽）檢疫診斷技術及判定標準，

并提高鼻疽診斷技術及判定標準的準確性，特制定鼻疽診斷技術及判

定標準（以下簡稱本標準）。

1.2對馬、驢、騾進行鼻疽檢疫時，統一按本標準規定辦理。

1.3本標準以鼻疽菌素點眼反應為主。必要時進行補體結合反應、

鼻疽菌素皮下注射反應或眼瞼皮內注射反應。

1.4凡鼻疽臨床癥狀顯著的馬、騾、驢，確認為開放性鼻疽的，

可以不進行檢疫。

1.5各種檢疫記錄表（見7附件），須保存2年以上。

2鼻疽菌素點眼操作方法

2.1器材藥品：

2.1.1鼻疽菌素、硼酸、來蘇爾、脫脂棉、紗布、酒精、碘酒、

記錄表。

2.1.2點眼器、唇（耳）夾子、煮沸消毒器、鑲子、消毒盤、工

作服、口罩、線手套。

注意：在所盛鼻疽菌素用完或在點眼過程中被污染（接觸結膜異

物）的點眼器，必須消毒后再使用。

2.2點眼前必須兩眼對照，詳細檢查眼結膜和單、雙瞎等情況,

并記錄。眼結膜正常者可進行點眼，點眼后檢查頜下淋巴結，體表狀

況及有無鼻漏等。

2.3規定間隔5?6日做兩回點眼為一次檢疫，每回點眼用鼻疽

菌素原液3?4滴(0.2?0.3mL),兩回點眼必須點于同一眼中，一般

應點于左眼，左眼生病可點于右眼，并在記錄中說明。

2.4點眼應在早晨進行，最后第9小時的判定須在白天進行。

2.5點眼前助手固定馬匹，術者左手用食指插入上眼瞼窩內使瞬

膜露出，用拇指撥開下眼瞼構成凹兜，右手持點眼器保持水平方向，

手掌下緣支撐額骨眶部，點眼器尖端距凹兜約1cm,拇指按膠皮乳頭

滴入鼻疽菌素3?4滴。

2.6點眼后注意系栓。防止風沙侵入、陽光直射眼睛及動物自行

磨擦眼部。

2.7判定反應。在點眼后3、6、9小時，檢查3次，盡可能于注

射24小時處再檢查一次。判定時先由馬頭正面兩眼對照觀察，在第

6小時要翻眼檢查，其余觀察必要時須翻眼。細查結膜狀況，有無眼

毗，并按判定符號記錄結果。

2.8每次檢查點眼反應時均應記錄判定結果。最后判定以連續兩

回點眼之中最高一回反應為準。

2.9鼻疽菌素點眼反應判定標準：

2.9.1陰性反應：點眼后無反應或結膜輕微充血及流淚，為陰性。

記錄為“一

2.9.2疑似反應：結膜潮紅，輕微腫脹，有灰白色漿液性及黏液

性（非膿性）分泌物（眼眥）的，為疑似陽性。記錄為“士

2.9.3陽性反應：結膜發炎，腫脹明顯，有數量不等膿性分泌物

（眼眥）的為陽性。記錄為“+”。

3鼻疽菌素皮下注射（熱反應操作方法）

3.1藥品器材

3.1.1鼻疽菌素原液、來蘇爾、酒精、碘酒、脫脂棉、紗布、記

錄表。

3.1.2工作服、口罩、線手套、毛刷、毛剪、耳夾子、注射器、

針頭、體溫計、煮沸消毒器、消毒盤、鏡子。

3.2皮下注射前一日做一般臨床檢查，早午晚分別測量并記錄體

溫，體溫正常的方可做皮下注射。

3.3皮下注射前所測3次體溫，其中如有一次超過39℃,或3

次體溫平均數超過38.5℃,或在前一次皮下注射后尚未經過一個半

月以上的，均不得做皮下注射。

3.4注射部位通常在左頸側或胸部肩胛前，術部剪毛消毒后注射

鼻疽菌素原液1mLo

3.5牲畜在注射后24小時內不得使役，不得飲冷水。

3.6注射通常在零點進行。注射后6小時起測溫，每隔2小時測

一次（即注射后6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小時），連

續測溫10次后，再于36小時測溫一次，詳細記錄并劃出體溫曲線,

同時記錄局部腫脹程度，以備判定。局部腫脹以手掌大（橫徑10cm）

為明顯反應。

3.7皮下注射鼻疽菌素的馬、驢、騾可發生體溫反應及局部或全

身反應。

3.7.1體溫反應：鼻疽病畜一般在皮下注射鼻疽菌素后6?8小

時體溫開始上升，12?16小時體溫上升到最高，此后逐漸降低，有

的在注射30?36小時后，體溫再度輕微上升。

3.7.2局部反應：注射部位發熱，腫脹疼痛，以注射后24?36

小時最為顯著，直徑可達10?20cm，并逐漸消散，有時腫脹可存在2?

3天。

3.7.3全身反應：注射后精神不振，食欲減少，呼吸短促，脈搏

加快，步態踉蹌、戰栗，大小便次數增加，頜下淋巴結腫大。

3.8鼻疽菌素皮下注射（熱反應）判定標準如下：

3.8.1陰性反應：體溫升至攝氏39C以下并無局部或全身反應。

3.8.2疑似反應：體溫升至39℃（不超過39.6℃）,有輕微全身

反應及局部反應者，或體溫升至40C以上稽留并無局部反應時，也

可認為疑似反應。

3.8.3陽性反應：體溫升至4（TC以上稽留及有輕微局部反應，

或體溫在39（以上稽留并有顯著的局部反應（腫脹橫徑10cm以上）

或有全身反應。

4鼻疽菌素眼髓皮內注射操作方法

4.1藥品及器材

4.1.1鼻疽菌素（用前隨時稀釋，鼻疽菌素1份用0.5%石炭酸

生理鹽水3份充分混勻）。

4.1.21?2mL注射器、針頭（用前煮沸消毒）、消毒盤、煮沸消

毒器、鑲子、耳夾子、工作服、口罩、線手套。

4.1.3酒精、碘酒、硼酸、來蘇爾、紗布、脫脂棉、記錄表。

4.2注射前檢查結膜及眼睛是否單、雙瞎等情況。注射后檢查頜

下淋巴結及有無鼻漏，并詳細記錄檢查情況。

4.3注射部位通常在左下眼瞼邊緣1?2cm內側眼角三分之一處

皮膚實質內，注射前用硼酸棉消毒注射部位。

4.4注射前助手保定馬匹，術者用食指、拇指捏住下眼瞼，右手

持注射器，手掌（小指外緣）支撐頭部對左手捏起的眼瞼皺裳術部斜

向刺入下眼瞼皮內，注入0.1mL鼻疽菌素，食指感覺注射液推進遲滯,

局部呈現小包，即為藥液已進入皮內。

4.5注射一般在早晨。注射后第24、36、48小時分別進行檢查。

詳細記錄結果。

4.6鼻疽菌素眼瞼皮內注射反應判定標準：

4.6.1陰性反應：無反應或下眼瞼有極輕微腫脹、流淚的，為陰

性反應。記錄為“一”。

4.6.2疑似反應：下眼瞼稍腫脹，有輕微疼痛及發熱，結膜潮紅，

無分泌物或僅有漿黏液性分泌物的，為疑似陽性，記錄為“土

4.6.3陽性反應：下眼瞼腫脹明顯，有顯著的疼痛及灼熱，結膜

發炎畏光，有膿性分泌物的，為陽性。記錄為“+”。

5開放性鼻疽臨床診斷鑒別要領

5.1將病畜保定，術者和助手穿工作服（避免白色），帶膠皮手

套、口罩、風鏡及保護面具，先用3%來蘇爾水，洗凈病畜鼻孔內外

后，在病畜前側面適當位置，術者用手打開鼻孔，助手用反射鏡或手

電筒照射鼻腔深部，仔細檢查黏膜上有無鼻疽特有結節潰瘍及星芒狀

瘢痕及其它異狀。檢查完畢將服裝、器材分別進行消毒（用3%來蘇

爾水浸1小時或煮沸10分鐘），避免交叉傳染。

5.2鼻腔鼻疽臨床癥狀如下：

5.2.1鼻汁：初在鼻孔一側（有時兩側）流出漿液性或黏液性鼻

汁，逐漸變為不潔灰黃色膿性鼻汁，內混有凝固蛋白樣物質，有時混

有血絲并帶有臭味，呼吸帶哮鳴音。

5.2.2鼻黏膜發生結節及潰瘍：在流鼻汁同時或稍遲，鼻腔黏膜

尤其是鼻中膈黏膜上出現新舊大小不同灰白色或黃白色的鼻疽結節，

結節破潰構成大小不等、深淺不一、邊緣隆起的潰瘍（結節與潰瘍多

發生于鼻腔深部黏膜上），已愈者呈扁平如星芒狀、冰花狀的瘢痕。

5.2.3頜下淋巴結腫大：急性或慢性鼻疽的經過期頜下淋巴結腫

脹，初有痛覺，時間長久，則變硬、觸摸無痛感，附著于下頜骨內面

不動，有時也呈活動性。

5.3皮膚鼻疽臨床癥狀如下：

皮膚鼻疽多發于四肢、胸側及下腹部，在皮膚或皮下組織發生黃

豆大小或胡桃、雞蛋大結節，不久破裂流出粘稠灰黃或紅色膿汁（有

時帶血）形成淺圓形潰瘍或向外穿孔呈噴火狀潰瘍。結節和潰瘍附近

淋巴結腫大，附近淋巴管粗硬呈念珠狀索腫，腫脹周圍呈水腫浸潤，

皮膚肥厚，有時呈蜂窩織炎，橡皮腿，公畜并發睪丸炎。

5.4開放性鼻疽判定標準：

5.4.1凡有5.2.1、5.2.2、5.2.3病變的，均為開放性鼻疽。

5.4.2凡有第5.2.1病狀而無5.2.2.5.2.3病狀的或有5.2.1.5.2.3

項病狀而無5.2.2病狀的，可用鼻疽菌素點眼，呈陽性反應的為開放

性鼻疽。

5.4.3凡有5.3癥狀的，即為開放性鼻疽。

5.5不具備5.4項癥狀，并有可疑鼻疽臨床癥狀的，判定為可疑

開放性鼻疽。

6鼻疽補體結合反應試驗操作辦法

6.1采取被檢血清

6.1.1藥品器材：

6.1.1.1來蘇爾、石炭酸、酒精、碘酒、紗布、脫脂棉。

6.1.1.2滅菌試管、試管架、試管簽、送血箱、煮沸消毒器、消

毒盤、鏡子、毛刷、毛剪、采血針（帶膠管、每針采一次后必須清洗

煮沸消毒后，再行使用）。

6.1.2在被檢牲畜頸前三分之一處靜脈溝部位剪毛消毒，將滅菌

采血針刺入頸靜脈，使血液沿管壁流入試管內，防止血液滴入產生泡

沫，引起溶血現象。

6.1.3采出的血液，冬季應放置室內防止血清凍結，夏季應放置

陰涼之處并迅速送往實驗室。如在3晝夜內不能送到，應先將血清倒

入另一滅菌試管內，按比例每1mL血清加入1?2滴5%石炭酸生理鹽

水溶液，以防腐敗。運送時使試管保持直立狀態，避免振動。

6.2預備試驗（溶血素、補體、抗原等效價測定）

6.2.1準備下列材料

6.2.1.1標準血清：鼻疽陰、陽性馬血清。

6.2.1.2鼻疽抗原。

6.2.1.3溶血素。

6.2.1.4補體：采取健康豚鼠血清。采血前饑餓7?8小時，于

使用前一日晚由心臟采血，如檢查材料甚多，需大量補體時，亦可由

頸動脈放血，放于培養皿或試管中，待血液凝固后再輕輕劃破或剝離

血塊后移于冰箱，次日清晨分離血清。如當日采血，可直接盛于離心

管中，置恒溫箱20分鐘，將血塊攪拌后，在離心器中分出血清亦可。

每次補體應由3?4個以上豚鼠血清混合。

6.2.1.5綿羊紅細胞：綿羊頸靜脈采血，脫纖防止血液凝固，并

離心3次，以清洗紅細胞；第一次1500?2000rp/m離心15分鐘，吸

出上清液加入細胞量3?4倍的生理鹽水輕輕混合后做第二次離心，

方法同前。使用前將洗滌后的細胞做成2.5%細胞液（即1：40倍溶

液）。稀釋后的紅細胞最多保存一天，但離心后的紅細胞在冰箱中可

保存3?4日。

6.2.1.6生理鹽水：1000mL蒸水水中加入8.5g氯化鈉,滅菌后

使用。

6.2.2溶血素效價測定，每一月左右測價一次，按下列方法進行

（參照表一）。

6.2.2.1將稀釋成1：100-1：5000不同倍數的溶血素血清各

0.5mL分別置于試管中o

6.2.2.2將1：20倍補體及1:40綿羊紅細胞各0.5mL分別加入

上述試管中。

6.2.2.3另外制作缺少補體、缺少溶血素的對照管，并補充等量

生理鹽水。

6.2.2.4每管分別添加生理鹽水1mL,置于攝氏37?38（水浴箱

中15分鐘。

6.2.2.5觀察結果：能完全溶血的最少量溶血素，即為溶血素的

效價，也稱為1單位（對照管均不應溶血），當補體滴定和正式試驗

時，則應用2單位（或稱為工作量）即減少1倍稀釋。

表一

溶血素1:1：1:1:1:1:1:1:1:1:對照

稀釋10050010001500200025003000350040005000

溶血素0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5-0.5-

1：20補體0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5--

2.5%紅細胞0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5

生理鹽水1.01.01.01.01.01.01.01.01.01.01.51.52.0

6.2.3補體效價測定

每次進行補體結合反應試驗，應于當日測定補體效價。先用生理

鹽水，將補體做1：20稀釋，然后按表二進行操作。

表二補體效價測定單位：mL

對照管

A12345678910111213

分\

20倍補體0.1()0.130.160.190.220.250.280.310.340.370.5

生理鹽水0.400.370.340.310.280.250.220.190.160.131.5

抗原（工作0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.51.5

量）（不加

抗原管加

生理鹽水）

10倍稀釋0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.52.0

陽性血清

或10倍稀

釋陰性陰

性血清

震蕩均勻后置37?38七水浴20分鐘

二單位溶

0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5/0.5

血素

2.5%紅細

0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5

胞懸液

振蕩均勻后置37?38（水浴20分鐘

陽性血清加抗原#########+++#

陽性血清未加抗原###+++++————————#

陰性血清加抗原###++++++————————#

陰性血清未加抗原###++++++————————

補體效價：是指在2單位溶血素存在的情況下，陽性血清加抗原

的試管完全不溶血，而在陽性血清未加抗原及陰性血清不論有無抗原

的試管發生完全溶血所需最少補體量，就是所測得補體效價，如表二

中第7管20義稀釋的補體0.28mL即為工作量補體按下列計算，原補

體在使用時應稀釋的倍數：

補體稀釋倍數

-------------------義使用時每管加入量=原補體稀釋倍數

測得效價

上列按公式計算為：20/0.28X0.5=35.7

即此批補體應作1:35.7倍稀釋，每管加0.5mL為一個補體單位。

考慮到補體性質極不穩定，在操作過程中效價會降低，故使用濃度比

原效價高10%左右。因此，本批補體應作1:35稀釋使用，每管加0.5mLo

6.2.4抗原效價，最少每半年滴定一次，具體操作方法如下（參

照表三）:

6.2.4.1將抗原原液稀釋為1：10至1：500,各以0.5mL置于

試管中，共作成12列。

6.2.4.2在第1列不同濃度的抗原稀釋液中，加入1：10的陰性

馬血清0.5mL；在第2列不同濃度的抗原稀釋液中，加入生理鹽水

0.5mL；在第3列到第7列不同濃度的抗原稀釋液中，分別加入1：

10、1：25、1：50、1：75及1：100的強陽性馬血清0.5mL。

表三

抗原稀釋1:101：501：751：11：1：1：1：1：

00150200300400500

(mL)0.50.50.50.50.50.50.50.50.5

陰（陽性）血清0.50.50.50.50.50.50.50.50.5

補體（工作量）0.50.50.50.50.50.50.50.50.5

37?38七水浴箱中20分鐘

2.5%紅細0.0.50.50.50.50.50.50.50.50.5

胞5

溶血素（工0.0.50.50.50.50.50.50.50.50.5

作量）5

6.2.4.3于前述各不同行列試管中，各加入補體（工作量）

0.5mLo

6.2.4.4置37?38℃水浴箱中20分鐘。

6.2.4.5加溫后，各溶液中再加入0.5mL的2.5%紅細胞及2單

位溶血素后，再置37?38（水浴箱中20分鐘。

6.2.4.6選擇在不同程度的陽性血清中，產生最明顯的抑制溶血

現象的，在陰性血清及無血清之抗原對照中則產生完全溶血現象的抗

原最大稀釋量為抗原的工作量。

抗原效價測定結果觀察舉例

抗原稀釋1:101:1:71:1:1:1:1:1:

500100150200300400500

血1：10######++++++++

清1:25######++++++

稀1：50+++####++++++—

釋1：75+++++++++++++++++-—

1:100+++++++++++++十--—

根據以上舉例的結果，抗原的效價為1：150的稀釋量。

6.3正式試驗

6.3.1在6.2.1至6.2.4的預備試驗基礎上，進行正式試驗（參

照表四）

6.3.1.1排列試管加入1：10稀釋被檢血清，總量為0.5mL,此

管準備加抗原。另一管總量為1mL,不加抗原作為對照。

6.3.1.2馬血清在58?59℃加溫30分鐘，騾、驢血清在攝氏36?

64℃加溫30分鐘。

6.3.1.3加入鼻疽抗原（工作量）0.5mLo

6.3.1.4加入補體（工作量）0.5mLo

6.3.1.5加溫后各試管中再加入2.5%紅細胞稀釋液0.5mL及2

單位溶血素0.5mLo

6.3.1.6再置37?38（水浴箱中20分鐘。

6.3.2為證實上述操作過程中是否正確，應同時設置對照試驗。

6.3.2.1健康馬血清

6.3.2.2陽性馬血清

6.3.2.3抗原（工作量）

6.3.2.4溶血素（工作量）

表四

對照

正式試驗溶血

陰性血清陽性血清抗原

素

生理

0.450.90.450.90.450.9—1.0

鹽水

被檢

0.050.10.050.10.050.1——

血清

58?59（或63?64）℃水浴箱中30分鐘

抗原（工

0.5—0.5—0.5—1.0—

作量）

補體（工

0.50.50.50.50.50.50.50.5

作量）

37?38七水浴箱中20分鐘

2.5%紅細

0.50.50.50.50.50.50.50.5

胞

溶血素（工

0.50.50.50.50.50.50.50.5

作量）

37?38七水浴箱中20分鐘

判定（舉

#———#———

例）

6.3.3加溫完