第第頁奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒?試驗原理奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書使用方法：測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應，產生可供察看的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。1.標準品的稀釋：本試劑盒供應原倍標準品一支，用戶可依照下列圖表在小試管中進行稀釋。24μg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液12μg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液6μg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液3μg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液1.5μg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3、8.洗滌：操作同5、9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.停止：每孔加停止液50μl，停止反應（此時藍色立轉黃色）。11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加停止液后15分鐘以內進行。奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒試驗規定：1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超出2%。可用水和電子天平進行確定。但有專業人員進行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。3、要在試驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。4、試驗時，要使底物避光保管。5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。7、將液體加到酶標孔中時，避開槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。9、應盡量做雙孔試驗，這樣才略保證數據的準確性。10、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。奮森疏螺旋體PCR檢測試劑盒試驗注意事項：1）RTPCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多料子，不同的樣本有不同要求，試驗前請充分溝通確認試驗方案和樣本情況；2）客戶盡可能供應試驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；3）客戶盡量不要供應DNA或RNA樣品。4）樣本保管于液氮或干冰，也可以保管于Trizol液中。實時熒光定量PCR（quantitativerealtimePCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包含探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的加添，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的加添。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量