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DB232024-8-30發布黑龍江省市場監督管理局發布請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件起草單位：東北林業大學、佳木斯市孟家崗林場、葦河林業局青山林木種子園、寧安市渤海林木種子園、五常市寶龍店種子林場、鶴崗市林木良種本文件主要起草人：張含國、閆平玉、張磊、孫國飛、潘鳳剛、李金泉、石寶英、胡振宇、曹振宇、紅松無性系SSR鑒別技術規程試劑、溶液配制、操作程序、數據記錄與統計、判定規則及檔案管理下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。dNTP：deoxy-ribonucleosidetriphosphate脫氧核糖核苷三磷酸。PCR擴增儀；電泳儀（具有恒電壓、恒電流功能垂直電泳槽及配套的制膠附件；水平電泳槽及配十六烷基三乙基溴化銨；三氯甲烷；異丙醇；異戊醇；乙二胺四乙酸二鈉二水合物；三羥甲基氨基甲標準；核酸染色劑；去離子甲酰胺；溴酚藍；二苯甲青；甲叉雙丙烯酰胺；丙烯酰胺；硼酸；無水乙醇；0.5mol/LHCI溶液：25mL濃鹽酸（36%~38%加水定容至500mL。送檢樣品宜為一年生針葉，-80℃超低溫使用CTAB提取法，或適合SSR指紋技術的商業試劑盒進行DNA提取。瓊脂糖凝膠（1%）電泳檢測DNA質量并進行濃度測定，稀釋至20ng/μL充分溶解后備用。選擇使用核心引物進行檢測，核心引物信息見附錄A.1。當檢測出不同無性系差異位點數小于2時，選擇使用補充引物進行檢測，補充引物信息見附錄8.4.1.3灌膠拔去梳子后，使用移液器吹吸點樣孔，清除氣泡和雜質，每一個加樣孔點入1μL混合有加樣緩沖液8.4.1.5銀染9數據記錄與統計9.1數據記錄將每個擴增位點的等位變異片段大小進行比較，確定樣品在該位點的等位變異；純合位點的基因型數9.2數據統計對送檢樣品進行分析時，直接進行無性系之間的對比，如果送檢樣品某個引物位點出現可見的異質性位點上不同個體的基因型(或等位變異)及所占比例。當對送檢樣品多個個體DNA進在各引物位點的基因型以及樣品在各引物位點的等位變異，并統計其在各引物位點的各種基因型（或等位差異位點數差異位點為應建立技術檔案，內容包括無性系來源、定植地點、無性系名稱、檢測日期、基因型數據、判定結果 小北湖007渤海省51渤海省69小北湖024小北湖007小北湖007小北湖024渤海省73渤海省92渤海省93渤海省008小北湖024渤海省51渤海省69渤海省71小北湖007小北

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