天然藥物學基礎

2粉末制片---封藏劑(1)水合氯醛試液

化學透明劑。特點：透入組織迅速，使干燥收縮的細胞逐漸膨脹復原，能溶解大多數細胞內含物，使細胞組織清晰透明，易于觀察。觀察組織；細胞內含物、結晶、細胞；不加熱觀察菊糖、橙皮苷結晶。制片法：冷裝法、加熱裝片法注意：天冷時，易析出水合氯醛結晶，加稀甘油避免。(2)稀甘油物理性透明劑。透入組織較快，形成良好的透光條件。臨時封藏劑，用于觀察糊粉粒、菌絲、淀粉粒等。3粉末制片---封藏劑(3)甘油醋酸試液觀察淀粉粒或測量其大小

(4)蒸餾水

透入組織較快，不能溶解多數細胞內含物，透明度差，易干燥。用于檢查淀粉粒的有無或配合其他試劑檢查細胞壁和細胞內含物的性質。

(5)乙醇

50％以上固定乳管；60％～90％固定和觀察菊糖；

95％以上觀察粘液細胞；

90％乙醇溶解揮發油，與脂肪油區別；低濃度乙醇軟化含粘液質的材料。4粉末制片---顯色劑(1)稀碘液

淀粉粒顯藍色或藍紫色。糊粉粒顯棕色或黃棕色；加硝酸汞試液，顯磚紅色。

(2)間苯三酚試液與濃鹽酸

加間苯三酚試液1～2滴，稍放置，再加濃鹽酸1滴。木化細胞壁因木化程度不同，顯淡紅色、紅色或紫紅色。(3)蘇丹Ⅲ試液

加試液，放置15分鐘以上或微加熱，角化、栓化細胞壁顯橘紅色至紅色；

脂肪油、揮發油和樹脂顯橘紅色、紅色或紫紅色。

(4)氯化鋅碘試液

加試液，纖維素細胞壁顯藍色或藍紫色。

5(5)α-萘酚試液

加

-萘酚試液，再加濃硫酸，菊糖溶解，溶液顯紫紅色。(6)釕紅溶液

粘液質顯紅色。加墨汁，各種組織均為黑色，粘液細胞呈透明狀。或用95％乙醇裝片后，自玻片一邊引入一滴蒸餾水，粘液質膨脹溶解而擴散。(7)稀醋酸

草酸鈣結晶不溶解。(8)稀鹽酸

草酸鈣結晶和碳酸鈣結晶均溶解，而碳酸鈣結晶溶解時產生氣泡。(9)20％硫酸

草酸鈣結晶和碳酸鈣結晶均溶解，并生成硫酸鈣針晶，但碳酸鈣結晶溶解時產生氣泡。

（4）解離組織片如需觀察細胞的完整形態，特別是纖維、石細胞、導管、管胞等細胞彼此不易分離的組織，需利用化學試劑使組織中各細胞之間的細胞間質溶解，使細胞互相分離，再裝片觀察。如樣品中薄壁組織占大部分，木化組織少或分散存在的，可用氫氧化鉀法（5%氫氧化鉀溶液作解離液）；如樣品堅硬，木化組織較多或集成較大群束的，可用硝鉻酸法（10%硝酸與10%鉻酸等量混合液作解離液）或氯酸鉀法（50%硝酸溶液與氯酸鉀作解離液）。

天然藥物鑒定的方法

2.中成藥顯微鑒定

中藥丸、散、錠、丹等成方制劑，只要掌握了各個組成天然藥物的粉末特征，就可應用粉末鑒定的方法加以鑒定。中成藥顯微鑒定時，一般需根據處方，明確品種和藥用部位，對各組成藥材粉末特征分析比較，排除某些類似的細胞組織及后含物等的干擾和影響，選取各藥在該成藥中較具專屬性的顯微特征，作為鑒別依據，因此，單一粉末藥材的主要顯微特征在成方制劑中有時不一定作為依據，而某些較次要特征有時還起鑒別作用。天然藥物鑒定的方法

中成藥顯微鑒定的制片，一般同單味藥的粉末。制片時，如為散劑，可用刀尖或牙簽挑取少量粉末；如為蜜丸可將藥丸切開，從切面中央挑取少量裝片，或將蜜丸切碎，加水攪拌，洗滌后，置離心管中離心分離沉淀，如此反復處理以除去蜂蜜后透化裝片；如為水丸或片劑、錠劑，可刮取全切面取樣，或用乳缽將整個丸、片、錠研碎取樣；如為包衣的丸、丹，可將丸衣與丸心分別制片觀察。天然藥物鑒定的方法

【顯微鑒別】取樣品置顯微鏡下觀察：

淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24～40μｍ，臍點短縫狀或人字狀，層紋可見（檢山藥）。不規則分枝狀團塊無色，遇水合氯醛液（加熱）溶化；菌絲無色，直徑4～6μｍ，（檢茯苓）。薄壁組織灰棕至黑棕色，細胞多皺縮，內含棕色核狀物（檢熟地黃）。

草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細胞中，有時整個排列成行（檢牡丹皮）。果皮表皮細胞橙黃色，表面觀類多角形，垂周壁略呈連珠狀增厚（檢山茱萸）。薄壁細胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群（檢澤瀉）。

（四）理化鑒定

理化鑒定是利用物理的或化學的方法，對天然藥物中所含有效成分或主要成分進行定性和定量分析，來鑒定天然藥物的真偽、優劣的一種方法。常用的理化鑒定方法有：

1.物理常數測定

包括相對密度、旋光度、折光率、黏稠度、沸點、熔點、凝固點等的測定。對鑒定油脂類、揮發油、樹脂類、及加工品類等天然藥物的真實性和純度，有重要意義。天然藥物鑒定的方法

蜂蜜1.相對密度應在1.349

以上。2.正品蜂蜜（含蔗糖約5%），為左旋。摻蔗糖的蜂蜜（蔗糖超過20%），為右旋。

2.顯微化學反應

在顯微鏡下進行觀察的化學定性反應，方法是將天然藥物切片、粉末或浸出液少量，置于載玻片上，滴加某種試液，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察反應結果。天然藥物鑒定的方法

①黃連中滴加鹽酸得到小檗堿鹽酸鹽結晶(黃色針簇狀結晶)。13

②肉桂加三氯甲烷2~3滴，略浸漬，速加2%鹽酸苯肼1滴，可見黃色針狀或桿狀結晶（桂皮醛）。

③檳榔粉末酸性水浸液滴于玻片上，加碘化鉍鉀試液，即發生渾濁，放置后可見石榴紅色球形或方形結晶（檳榔堿）。天然藥物鑒定的方法

3.微量升華

利用天然藥物中所含的某些化學成分，在一定溫度下能升華的性質，獲得升華物，在顯微鏡下觀察其形狀、顏色以及化學反應。天然藥物鑒定的方法

低溫高溫大黃微量升華

②薄荷無色針簇狀結晶（薄荷腦）加濃硫酸2滴及香草醛結晶少許，顯黃色或橙黃色，再加蒸餾水1滴即變紫紅色。

③斑蝥白色柱狀或小片狀結晶（斑蝥素），加堿液溶解，再加酸又析出結晶。

天然藥物鑒定的方法

4.熒光分析

是利用天然藥物中所含的某些化學成分，在紫外光或日光下能產生一定顏色熒光的特性，作為鑒別天然藥物的一種簡易方法。如秦皮的水浸液在日光下即有碧藍色熒光，紫外光下更加強烈；黃連斷面在紫外光下產生金黃色熒光，木質部尤為顯著。有的天然藥物浸出液需加一定的試劑才能產生熒光，如蘆薈水溶液加硼砂共熱則有綠色熒光。一般觀察熒光的紫外光波長為365nm。天然藥物鑒定的方法

5.化學定性反應

利用天然藥物的化學成分能與某些化學試劑產生特殊的顏色、沉淀、結晶等反應，來鑒別天然藥物的真偽。如山豆根外皮滴加10%氫氧化鈉試液顯橙紅色，并逐漸變為血紅色，久置不褪。

馬錢子胚乳部分切片，加1%釩酸銨的硫酸溶液1滴，胚乳即顯紫色，另取胚乳切片加發煙硝酸1滴，即顯橙紅色。

甘草粉末置白瓷板上，加80%硫酸1~2滴，顯橙黃色。天然藥物鑒定的方法

6.色譜法（層析法）

是利用一組化學成分理化性質的不同，在固定相和流動相的作用下產生差速位移，從而分離成不同顏色的單一成分帶。色譜法可分離和鑒定化學成分進而可用于鑒定天然藥物。根據其分離原理可分為吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法與排阻色譜法等；根據分離方法分為紙、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。天然藥物鑒定的方法1.生曬參2.紅參3.朝鮮紅參4.西洋參（進口）5.西洋參（國產）6.人參皂苷對照品Rb1（S１）、Rb2（S2）、Rc（S3）、Re（S4）、Rd（S5）、Rg1（S6）、Rf（S7）、F11（S8）人參與西洋參的薄層色譜圖TLC示例19

7.分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的光吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。分光光度分析的方法很多，主要有紫外分光光度法、比色法、紅外分光光度法、原子吸收分光光度法、核磁共振光譜法、質譜法、X-射線衍射分析法等。這些方法，過去多用于純化合物的結構鑒定和定量分析上，近年來已逐漸應用于藥材的鑒定，其中以紫外分光光度法應用最多。

天然藥物鑒定的方法樣品來源A432A458A458/A432國產番紅花0.830.730.88進口番紅花-10.600.540.89進口番紅花-20.520.460.89進口番紅花-30.180.150.85進口番紅花-40.130.110.84西紅花紫外吸收光譜圖2015版Ch.P.規定：A458/A432

應在0.85~0.90之間；且A432

不低于0.50。天然藥物鑒定的方法

8.水分測定

天然藥物中含有過量的水分，不僅易蟲蛀、霉爛變質，使有效成分分解，且相對地減少了實際用量而達不到治療目的。天然藥物鑒定的方法

烘干法（揮發油少或者沒有的藥材）；

甲苯法（含有揮發性成分樣品）；

減壓干燥法（揮發性成分的貴重藥品）；

GC法（無水乙醇浸提，測水分含量）

9.灰分測定

天然藥物中的灰分，包括天然藥物本身經過灰化后遺留的不揮發性無機鹽，以及天然藥物表面附著的不揮發性無機鹽類，即總灰分。各種天然藥物在無外來攙摻雜物時，總灰分應在一定范圍以內，如果所測灰分值高于正常范圍，表明摻有泥土、砂石等無機雜質。現行版《中國藥典》規定了天然藥物總灰分的最高限量，如阿膠不得過1.0%，西紅花不得過7.5%，肉桂不得過5.0%，它對保證天然藥物的純度具有重要意義。天然藥物鑒定的方法

有些天然藥物的總灰分本身差異較大，特別是組織中含草酸鈣結晶較多的品種，如大黃，測定總灰分有時不足以說明外來無機物的存在，還需要測定酸不溶性灰分，即不溶于10%鹽酸中的灰分。因天然藥物所含的無機鹽類（包括鈣鹽）大多可溶于稀鹽酸中而除去，而來自泥砂等的硅酸鹽類則不溶解而殘留，所以測定酸不溶性灰分能較準確的表明天然藥物中是否有泥砂等摻雜及其含量。天然藥物鑒定的方法

10.浸出物測定對于有效成分或主成分尚不明確，或其成分明確尚無精確定量方法的天然藥物，一般可根據已知成分的溶解性質，進行浸出物的測定。天然藥物中的成分在水或其他適當溶劑中，在一定的條件下其浸出物的含量大致有一定的范圍。因此以浸出物的含量控制天然藥物的質量，目前具有實際意義。浸出物測定通常包括水溶性浸出物、醇溶性浸出物和醚溶性浸出物的測定。天然藥物鑒定的方法

11.揮發油測定

利用天然藥物中所含揮發性成分能與水蒸氣同時餾出來的性質，在揮發油測定器中進行測定。適用于含較多量揮發油的天然藥物。

天然藥物鑒定的方法揮發油提取器

甲法：用于測定密度比水小的揮發油。

乙法：用于測定密度比大小的揮發油，如丁香油、桂皮油等。

天然藥物鑒定的方法

12.含量測定

是指對天然藥物的有效成分，或主要成分，或指示性成分，以及有毒成分的含量測定，是天然藥物品質評價的重要量化指標之一。含量測定方法有化學定量法和儀器分析法等。

大黃素甲醚大黃素HPLC法測定何首烏中結合性蒽醌

13.有害物質檢查

天然藥物中的有害物質包括農藥殘留物質、霉菌和霉菌毒素、重金屬及有害元素等。天然藥物如果污染了有害物質就會危害人民健康。近年來，中藥的安全性評價越來越受到世人的關注。藥物的安全性和有效性是同樣重要的，因此，對天然藥物中的有害物質作限量檢查是十分重要的。

天然藥物鑒定的方法

農藥殘留量的檢查

農藥的種類很多，主要為有機氯、有機磷和擬除蟲菊酯類，其中有機氯類農藥中六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)是使用最久、數量最大的農藥，雖然我國已于1983年開始禁用有機氯農藥，但由于它們用后在土壤和生物體中長期殘留和蓄積，對人類危害極大。故世界各國都非常重視食品