正文核酸和多肽作為生物分子都具有良好的生物相容性，核酸-肽偶聯物通常具有更高的穩定性和信號識別功能，是用作生物傳感的良好探針。這里，通過使用谷胱甘肽（GSH）和凝血酶適配體-TBA合成了一個三肽-適配體共軛體（探針1，Scheme1a），其SERS譜圖可以區分癌癥患者和健康人血液樣本中的凝血酶（TB）濃度[1]。由于谷胱甘肽的活性基團和獨特的結構，其被選為生物信號分子，并與適配體共價連接，形成了核酸-肽偶聯物，實現了在高鹽含量的實際血液樣本中對凝血酶的檢測。另一個針對凝血酶的適配體-HD22與傳統的拉曼標記物4-巰基苯甲酸（4-MBA）耦合，作為對照探針（探針2，Scheme1a）。當向一定數量的探針中加入凝血酶時，它能夠有效地與探針結合，并減少溶液中的游離探針數量。在隨后加入銀納米顆粒（AgNPs）后，隨著凝血酶濃度的增加，探針的信號強度逐漸降低（Scheme1b和1c）。這種三肽-適配體偶聯物極大地提高了體系的穩定性和生物相容性，且三肽的SERS信號并沒有消除適配體的SERS信號，為穩定分析提供了更多的信息[2]。首先，作者采用AgNPs聚集體中的等離子熱點放大SERS信號，分別測量了兩種TB適配體，即TBA和HD22的SERS特征，并生成了清晰的核酸指紋。通過多次平行實驗，證明結果的可重復。通過修飾TBA的3’端氨基，與GSH的羧基形成酰胺鍵，成功構建了TBA-GSH偶聯物，即探針1。對TBA-GSH偶聯物和TBA進行了電泳，證明該適配體與GSH的成功偶聯（Figure1）。為了證明此探針的優越性，作者將常見的拉曼報告基因4-MBA作為一個信號標簽與相同的適配體TBA結合起來，名為探針C。結果顯示，無論TBA是否結合，SERS譜都只產生了更強的4-MBA特征峰（FigureS6）。之后，作者使用一些常見的蛋白，包括人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）和纖維蛋白（FIB）作為對照，對探針1和探針C的靶向特異性進行了檢測。結果顯示，探針1在其他蛋白存在下是穩定的，但探針C很容易受到其他蛋白的影響，進一步說明傳統的小分子拉曼標簽的高信號易受測量環境的影響，且信號波動很大，特別是在生物樣品環境中。探針1在檢測其他蛋白含量高的樣本時，比傳統的探針C具有更高的特異性。GSH作為一種三肽，可以成為生物樣本中穩定的信號源。因此，適配體-GSH作為一種生物探針，在生物樣品的檢測中具有更大的吸引力（Figure2a,b）。進一步的，作者對TB進行SERS檢測，從而對探針1和探針2進行了比較性檢驗（Figure2c,d）。在TB濃度相關的SERS檢測中，比較了探針1和探針2的檢測性能（Figure3）。最后，作者分別使用探針1和探針2直接檢測16名癌癥患者和8名健康個體的血液樣本中的TB。使用基于SERS光譜的DD-SIMCA方法對樣本數據進行分析，為了區分每個樣本的穩定性，在一個樣本上多次收集SERS數據。對16個健康樣本進行了訓練集的分析，選擇最佳分析模型，靈敏度為100%，且數據證明該模型具有較高的特異性（Figure4）。總結首次設計了一種穩定的三肽-適配體偶聯探針，用于有效地和直接地檢測血液樣本中的TB蛋白水平。使用一個短肽與TB適配體連接作為探針，其產生的SERS信號實