ICSCCS07.080A40GB/T40220—2021植物代謝產物大豆凝集素測定酶聯免疫吸附法國家市場監督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40220—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術委員會(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：江南大學、綠城農科檢測技術有限公司、北京工商大學、北京薩姆伯科技有限公司。GB/T40220—2021植物代謝產物大豆凝集素測定酶聯免疫吸附法本文件規定了植物代謝產物大豆凝集素的酶聯免疫吸附測定方法。本文件適用于大豆及其制品中植物代謝產物大豆凝集素的測定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理5試劑和材料5.2大豆凝集素：純度≥95%,CAS號為68513-95-1。5.3應按照試劑盒說明書配制所需溶液。6儀器設備6.1小型粉碎機。6.3勻漿機。12GB/T40220—20216.7微孔板酶標儀：帶450nm濾光片。6.8試劑盒所要求的儀器。7樣品的制備與保存稱取100g樣品，用小型粉碎機進行粉碎，粉碎后的樣本過孔徑0.9mm分樣篩。裝入清潔密封容7.2半固態樣品制備7.3液態樣品制備8試驗步驟8.1樣品前處理稱取1.00g制備的樣品，置于15mL具塞離心管中，加入試劑盒所要求提取液，按照試劑盒說明書所述方法進行稀釋和檢測。8.2測定按照酶聯免疫試劑盒所述操作步驟對待測試樣(液)進行定量檢測。8.3平行試驗按以上步驟，對同一標準溶液、同一樣品溶液均應進行平行試驗測定。除不稱取試樣外，均按上述步驟進行。根據待測樣本中大豆凝集素的含量，選擇一個合適的質控標準，以確定試驗過程的操作準確性。9試驗數據處理9.1酶聯免疫試劑盒定量檢測的標準工作曲線繪制按照試劑盒說明書提供的計算方法或者軟件，根據標準品質量濃度與吸光度變化關系繪制標準工作曲線。9.2待測液質量濃度計算按照試劑盒說明書提供的計算方法以及計算機軟件，將待測液吸光度代入9.1所獲得標準工作曲GB/T40220—20219.3結果計算樣品中大豆凝集素的含量按式(1)計算： (1)式中：X——樣品中大豆凝集素的含量，單位為微克每千克(μg/kg);p——從標準工作曲線上得到的樣品中大豆凝集素質量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——樣本提取液體積，單位為毫升(mL);a——在前處理過程中的稀釋倍數；m——試樣的稱樣量，單位為克(g)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留3位有效數字。10精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。11準確度本方法供酶聯免疫試劑盒測試的大豆凝集素溶液加標濃度為100ng/mL時，平均回收率為76.2%~120.9%;當供酶聯免疫試劑盒測試的大豆凝集素溶液加標濃度為1000ng/mL時，平均回收率為82.7%～111.9%;當供酶聯免疫試劑盒測試的大豆凝集素溶液加標濃度為5000ng/mL時，平均回收率為89.4%～107.6%。當稱取大豆、豆粕等固態和半固態樣本1.00g時，大豆凝集素的檢出限為300μg/kg,定量限為500μg/kg;當稱取豆奶、豆漿等液態樣本1.00g