摘

要：目的：以蘆丁作為考察的指標(biāo)性成分，確定一枝黃花的最佳提取工藝參數(shù)。方法：采用正交試驗(yàn)法，對(duì)乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間等參數(shù)進(jìn)行考察。結(jié)果：最佳提取工藝參數(shù)為70%乙醇10倍量、每次提取1.5h、提取3次。結(jié)論：應(yīng)用該工藝參數(shù)提取一枝黃花的蘆丁得率高，為一枝黃花提取工藝的確定提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。關(guān)鍵詞：一枝黃花；蘆丁；乙醇回流提取；正交試驗(yàn)

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引言一枝黃花是菊科一枝黃花屬植物一枝黃花（SolidagodecurrensLour.）的干燥全草，主產(chǎn)于長江以南各地。一枝黃花的化學(xué)成分包括黃酮、皂苷、苯甲酸芐酯、當(dāng)歸酸桂皮酯、炔屬化合物、苯丙酸等。在2015年版《中華人民共和國藥典》一部中，一枝黃花是以蘆丁作為其指標(biāo)性成分進(jìn)行定量考察的。本文采用正交試驗(yàn)法，結(jié)合單因素考察，以有效成分蘆丁作為指標(biāo)，對(duì)一枝黃花的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究，為一枝黃花生產(chǎn)工藝的確定提供了依據(jù)。

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實(shí)驗(yàn)材料1.1

藥材一枝黃花藥材購自貴州遵義，經(jīng)江西普正制藥有限公司質(zhì)量管理部檢測(cè)為一枝黃花。1.2

儀器高效液相色譜儀：Waters1525型高效液相色譜儀；色譜柱：HypersilC18柱（4.6mm×250mm）；JK-100型超聲波清洗器；SHB-ⅢS型循環(huán)水式多用真空泵；RE-5203A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；HHS-24型電熱恒溫水浴鍋；SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器。1.3

試劑乙腈、甲醇為色譜純，超純水，其余試劑為分析純。

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提取方法選擇乙醇回流提取法和水煎煮法對(duì)一枝黃花藥材進(jìn)行提取，結(jié)合HPLC法測(cè)定蘆丁含量，對(duì)其提取工藝進(jìn)行初步研究。2.1

乙醇回流提取法2.1.1

60%乙醇回流提取稱取一枝黃花藥材10g，用60%乙醇（V/V）回流提取2次，每次加入60%乙醇10倍量，第一次提取3h，第二次提取2h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。2.1.2

70%乙醇回流提取稱取一枝黃花藥材10g，用70%乙醇（V/V）回流提取2次，每次加入70%乙醇10倍量，第一次提取3h，第二次提取2h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。2.1.3

80%乙醇回流提取稱取一枝黃花藥材10g，用80%乙醇（V/V）回流提取2次，每次加入80%乙醇10倍量，第一次提取3h，第二次提取2h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。2.2

水煎煮法稱取一枝黃花藥材10g，用水煎煮2次，每次加水10倍量，第一次煎煮3h，第二次煎煮2h，濾過，合并濾液，濃縮后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。2.3

合格標(biāo)準(zhǔn)2.3.1

檢測(cè)方法按照《藥典》四部通則0512規(guī)定的高效液相色譜法測(cè)定一枝黃花中的蘆丁含量。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液（16:8:76）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為360nm。理論板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液的制備：取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品粉末（過三號(hào)篩）約2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，稱定重量，加熱回流40min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。2.3.2

合格標(biāo)準(zhǔn)本品按干燥品計(jì)算，含無水蘆丁（C27H30O16）不得少于0.10%，即1mg/g。2.4

結(jié)果采用上述提取方法所得一枝黃花提取液中的蘆丁含量如表1所示。表1

提取液中蘆丁含量從表1可知：采用乙醇回流提取法和水煎煮法所提取的無水蘆丁含量相差較多。水煎煮法的無水蘆丁得率約為乙醇回流提取法的1/10～1/8。而采用60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇回流提取的無水蘆丁含量差別不大。

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提取正交試驗(yàn)通過上述對(duì)不同提取方法的考察，本文選擇了乙醇回流提取法對(duì)一枝黃花進(jìn)行提取，并繼續(xù)通過采用正交試驗(yàn)法對(duì)乙醇回流提取法的工藝參數(shù)進(jìn)行考察。3.1

因素水平的確定正交試驗(yàn)以蘆丁得率為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度（因素A）、乙醇用量（因素B）、提取時(shí)間（因素C）、提取次數(shù)（因素D）四個(gè)參數(shù)進(jìn)行考察，因素水平表如表2所示。表2

因素水平表按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行9組試驗(yàn)。由于沒有空白因素列，因此每組試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次，共進(jìn)行27次試驗(yàn)，根據(jù)每次試驗(yàn)的誤差與整體試驗(yàn)的誤差，檢驗(yàn)該正交試驗(yàn)的可行性。3.2

正交試驗(yàn)方法3.2.1

試驗(yàn)一稱取一枝黃花藥材10g，用50%乙醇（V/V）回流提取1次，加入50%乙醇6倍量，提取1h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.2

試驗(yàn)二稱取一枝黃花藥材10g，用50%乙醇（V/V）回流提取2次，加入50%乙醇8倍量，每次提取1.5h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.3

試驗(yàn)三稱取一枝黃花藥材10g，用50%乙醇（V/V）回流提取3次，加入50%乙醇10倍量，每次提取2h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.4

試驗(yàn)四稱取一枝黃花藥材10g，用70%乙醇（V/V）回流提取3次，加入70%乙醇6倍量，每次提取1.5h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.5

試驗(yàn)五稱取一枝黃花藥材10g，用70%乙醇（V/V）回流提取1次，加入70%乙醇8倍量，提取2h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.6

試驗(yàn)六稱取一枝黃花藥材10g，用70%乙醇（V/V）回流提取2次，加入70%乙醇10倍量，每次提取1h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.7

試驗(yàn)七稱取一枝黃花藥材10g，用90%乙醇（V/V）回流提取2次，加入70%乙醇6倍量，每次提取2h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.8

試驗(yàn)八稱取一枝黃花藥材10g，用90%乙醇（V/V）回流提取3次，加入70%乙醇8倍量，每次提取1h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.2.9

試驗(yàn)九稱取一枝黃花藥材10g，用90%乙醇（V/V）回流提取1次，加入70%乙醇10倍量，提取1.5h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至100mL，再取2mL用70%乙醇定容至10mL，即得供試品溶液。3.3

正交試驗(yàn)結(jié)果按照L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，每個(gè)因素水平試驗(yàn)3次，結(jié)果如表3所示，方差分析如表4所示。表3

正交試驗(yàn)結(jié)果表4

正交試驗(yàn)方差分析3.4

正交試驗(yàn)結(jié)果分析（1）提取一枝黃花時(shí)，A、B、C、D四個(gè)因素均具有極顯著性差異，這些影響因素按序排列為D＞A＞C＞B，即提取次數(shù)＞乙醇濃度＞提取時(shí)間＞乙醇用量。（2）直觀分析正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出，提取效率最高的工藝參數(shù)組合為A2B1C2D3，即70%乙醇6倍量、每次提取1.5h、提取3次，蘆丁平均提取效率為12.72mg/g。（3）經(jīng)方差分析可知，最佳提取工藝參數(shù)為A2B3C2D3，即70%乙醇10倍量、每次提取1.5h、提取3次，具體相關(guān)提取效率需經(jīng)過中試驗(yàn)證確認(rèn)。

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正交試驗(yàn)的工藝驗(yàn)證4.1

中試工藝驗(yàn)證綜合正交試驗(yàn)結(jié)果分析和實(shí)際提取成本兩方面進(jìn)行考慮，對(duì)最佳提取工藝和提取效率最高的工藝進(jìn)行中試提取驗(yàn)證，提取條件為：稱取一枝黃花藥材100g，用70%乙醇（V/V）10倍量回流提取3次，每次提取1.5h，濾過，合并濾液，回收乙醇后加水定容至1000mL，再取20mL用70%乙醇定容至100mL，即得供試品溶液，取樣進(jìn)行蘆丁含量檢查。連續(xù)進(jìn)行3次中試工藝驗(yàn)證，以檢查其工藝的重現(xiàn)性。4.2

檢驗(yàn)方法按照《藥典》四部通則0512規(guī)定的高效液相色譜法測(cè)定一枝黃花中的蘆丁含量。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液（16:8:76）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為360nm。理論板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液的制備：取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品粉末（過三號(hào)篩）約2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，稱定重量，加熱回流40min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。4.3

合格標(biāo)準(zhǔn)本品按干燥品計(jì)算，含無水蘆丁（C27H30O16）不得少于0.10%，即1mg/g。4.4

驗(yàn)證結(jié)果正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果如表5所示。表5

正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果驗(yàn)證結(jié)果顯示：按最佳提取工藝參數(shù)，即70%乙醇10倍量回流提取3次，每次提取1.5h，經(jīng)連續(xù)3次試驗(yàn)驗(yàn)證，無水蘆丁（C27H30O16）含量均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

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結(jié)語本文通過采用HPLC法測(cè)定蘆丁含量后發(fā)現(xiàn)，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，乙醇回流提取法和水煎煮法提取一枝黃花中的蘆丁含量相差較多。水煎煮法的蘆丁得率約為乙醇回流提取法的1/10～1/8；而采