考綱原生態1.微生物的別離和培養2.某種微生物數量的測定3.培養基對微生物的選擇作用1考點一微生物的實驗室培養1．培養基(1)概念：人們按照微生物對_________的不同需求，配制出供其生長繁殖的_________。營養物質營養物質水、碳源、氮源、無機鹽pH氧氣固體培養基2分類標準培養基種類特點用途根據物理性質液體培養基不加凝固劑工業生產半固體培養基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運動、分類、鑒定固體培養基加凝固劑，如瓊脂微生物分離、鑒定、活菌計數根據用途選擇培養基培養基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長培養、分離出特定微生物鑒別培養基根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物微生物的實驗室培養根底知識1．培養基3【練習穩固】(2010·全國卷Ⅰ改造)某細菌固體培養基的組成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是__________，碳源是________，氮源是_________。只有能合成脲酶的細菌才能在該培養基上生長，故該培養基屬于______培養基。從同化作用類型的角度看，用該培養基培養的細菌屬于_________。異養型瓊脂葡萄糖尿素選擇4煮沸消毒法灼燒滅菌條件結果常用的方法消毒滅菌較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體外表或內部的對人體有害的局部微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學藥物消毒法強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌2．無菌技術5考點一微生物的實驗室培養6考點一微生物的實驗室培養3．純化大腸桿菌的原理與方法(1)原理：在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。7比較平板劃線法稀釋涂布平板法原理優點缺點適用范圍考點一微生物的實驗室培養通過接種環在瓊脂固體培養基外表連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基上。在數次劃線后培養，可以別離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，即菌落將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的外表，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基外表形成單個的菌落可以觀察菌落特征，對混合菌進行別離可以計數，可以觀察菌落特征不能計數吸收量較少，較麻煩，平板不枯燥效果不好，容易蔓延適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌(2)純化微生物的接種方法：8考點一微生物的實驗室培養平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段灼燒接種環的目的不同(1)第一次操作：殺死接種環上原有的微生物。(2)每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。(3)劃線結束后：殺死接種環上殘存的菌種，防止細菌污染環境和感染操作者。9考點一微生物的實驗室培養(1)培養基分裝到培養皿后進行滅菌。(2013·江蘇)()(2)轉換劃線角度后需灼燒接種環再進行劃線。 (2013·江蘇)()(3)接種后的培養皿須放在光照培養箱中培養。 (2013·江蘇)()(4)培養過程中每隔一周觀察一次。(2013·江蘇)()(5)在瓊脂固體培養基上長出的單個菌落含有多種細菌。 (2011·重慶)()(6)在培養基中參加青霉素可抑制真菌而促進細菌生長，向液體培養基中通入氧氣能促進破傷風桿菌的生長。 (2011·重慶)()(7)對新配制的培養基滅菌時所用的設備是高壓蒸汽滅菌鍋。實驗前需對超凈工作臺進行消毒處理。(2010·山東)()(8)用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養基，經高溫、高壓滅菌后倒平板。 (2009·安徽)()×√××××√√10D題組一微生物的培養1．(2015·北京市東城區聯考)細菌需要從外界吸收營養物質并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。以下與此有關的說法正確的選項是 ()A．乳酸菌與硝化細菌所利用的碳源是相同的B．氮源不可能作為細菌的能源物質C．瓊脂是細菌生長和繁殖中不可缺少的一種物質D．以尿素為唯一氮源的培養基上長出的不都是尿素分解菌11題組一微生物的培養2．隨著科技的開展，微生物在生產活動中得到了廣泛應用。以下關于微生物培養的表達，正確的選項是()A．青霉素就是抗生素，在青霉菌的培養過程中不用嚴格滅菌B．培養基中參加的瓊脂可以作為微生物的碳源C．為了防止污染，在微生物培養過程中，操作人員的手必須經過嚴格滅菌D．在菌種選育過程中可以利用人工誘變等手段D12成分含量成分含量NaNO33gFeSO40.01gK2HPO41g(CH2O)30g瓊脂15gH2O1000mLMgSO4·7H2O0.5g青霉素0.1萬單位題組一微生物的培養3．下表所示為某微生物培養基的配方，有關表達錯誤的選項是ＣA.依物理性質劃分，該培養基屬于固體培養基；依用途劃分，該培養基屬于選擇培養基B．由培養基的原料可知，所培養微生物的同化作用類型是異養型，培養的微生物可以是酵母菌或毛霉C．本培養基中青霉素的添加滿足了微生 物生長對特殊營養物質的要求D．假設用該培養基別離能分解尿素的細菌，應除去青霉素和NaNO3，并應參加尿素13題組一微生物的培養1．篩選微生物的原理人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。因此，可以通過配制選擇培養基、控制培養條件等選擇目的微生物。2．選擇培養基的設計原理和功能 根據某種微生物的特殊營養要求或其對某些物理、化學因素(如溫度、pH等)的抗性而設計的培養基為選擇培養基。此類培養基能使混合菌株中的目的菌株變為優勢菌，從而提高該菌的篩選效率。14題組一微生物的培養3．選擇培養基應用實例序號改變的條件分離的目的菌12345參加青霉素參加高濃度的食鹽缺乏氮源石油作為唯一碳源高溫環境酵母菌和霉菌金黃色葡萄球菌固氮微生物分解石油的微生物耐高溫微生物15題組二微生物純化的方法分析4．有關平板劃線操作正確的選項是()A．使用已滅菌的接種環、培養皿，操作過程中不再滅菌B．翻開含菌種的試管后要通過火焰滅菌，取出菌種后要馬上塞上棉塞C．將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線即可D．最后將平板倒置，放入培養箱中培養D16題組二微生物純化的方法分析5．苯酚是工業生產排放的有毒污染物質，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了能降解利用苯酚的細菌菌株篩選的主要步驟如以下圖所示，①為土壤樣品。以下相關表達錯誤的選項是 ()ＣA．圖中②培養目的菌株的選擇培養基中應參加苯酚作為碳源B．如果要測定②中活細菌數量，常采用稀釋涂布平板法C．假設圖中④為對照實驗，那么其中應以苯酚作為唯一的碳源D．使用平板劃線法可以在⑥上獲得 單菌落17題組二微生物純化的方法分析微生物純化的三種途徑(1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養基外表，直接根據微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。(2)選擇培養法：利用選擇培養基對微生物進行選擇培養，直接獲得目的微生物。(3)鑒定培養法：利用鑒別培養基使目的微生物菌落呈現特有的特征，然后篩選目的微生物。18考點二微生物的別離與數量測定1．土壤中分解尿素的細菌的別離與計數(1)別離原理 土壤中細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成_____，這種物質在把尿素分解成無機物的過程中起到_____作用。(2)統計菌落數目 統計樣品中的活菌一般用_____________法。(3)實驗流程 土壤取樣→___________→微生物的培養與觀察→細菌的_____。脲酶催化稀釋涂布平板樣品的稀釋計數19考點二微生物的別離與數量測定2．分解纖維素的微生物的別離 (1)纖維素酶 ①組成：纖維素酶是一種______，一般認為它至少包括三種組分，即________________________。 ②作用：葡萄糖復合酶C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶20 (2)纖維素分解菌的篩選 ①原理：纖維素分解菌

↓ ②篩選方法：_______染色法，即通過是否產生_______來篩選纖維素分解菌。 ③培養基：以_______為唯一碳源的選擇培養基。紅色復合物透明圈剛果紅透明圈纖維素考點二微生物的別離與數量測定21 ④實驗流程： 土壤取樣：富含_______的環境 ↓ 選擇培養：用__________培養，以增加纖維素分解菌的濃度 ↓ _________：制備系列稀釋液 ↓ 涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上 ↓ 挑選產生_______的菌落纖維素選擇培養基梯度稀釋透明圈考點二微生物的別離與數量測定22考點二微生物的別離與數量測定(1)別離微生物所用的選擇培養基一定是固體培養基，因為菌落只能在固體培養基上形成。(2)平板劃線法只適合用于微生物的提純，不適合進行計數，并且在最后一次劃線的末端處的菌種最純。23√√×√考點二微生物的別離與數量測定(1)要從土壤中別離獲取纖維素分解菌，應選用以纖維素為唯一碳源的選擇培養基。(2013·太原五中月考)()(2)在纖維素分解菌培養過程中，對培養基和接種環常采用的滅菌方法分別是高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌。 (2013·許昌二次調研)()(3)透明圈是剛果紅與纖維素形成的復合物，可根據是否出現透明圈來判斷有無纖維素分解菌。(2011·山東改編)()(4)測定培養液中微生物數量，可選用顯微鏡直接計數法。 (2010·山東)()(5)在“檢測土壤中細菌總數”的實驗中，確定對照組無菌后，選擇菌落數在300以上的實驗組平板進行計數。 (2009·安徽)()(6)假設用稀釋涂布平板法計數大腸桿菌活菌的個數，要想使所得估計值更接近實際值，除應嚴格操作、屢次重復外，還應保證待測樣品稀釋的比例適宜。(2009·高考寧夏卷)()×√24題組三對別離分解尿素細菌及纖維素分解菌的篩選分析1．欲從土壤中別離出能分解尿素的細菌，以下實驗操作中，不正確的選項是 ()A．將土壤用無菌水進行一系列的梯度稀釋B．同一濃度的土壤稀釋液應至少涂布三個平板C．可將未接種的培養基在相同條件下培養作為對照D．用參加剛果紅指示劑的培養基可篩選出分解尿素的細菌D25題組三對別離分解尿素細菌及纖維素分解菌的篩選分析2．(2015·泰州質檢)利用農作物秸稈為原料可生產乙醇，生產過程中可采用微生物將秸稈水解或用酶水解，其主要技術流程如以下圖所示，以下相關說法錯誤的選項是 A．可用剛果紅染色法篩選過程①所需的纖維素分解菌B．過程①參加的纖維素酶是葡萄糖苷酶C．酒精發酵接種的酵母菌需在無氧條件下發酵D．酒精發酵前需對培養基進行高壓蒸汽滅菌Ｂ26項目土壤中分解尿素的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法使用以尿素為唯一氮源的選擇培養基進行培養利用富含纖維素的選擇培養基進行培養原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生長，能夠分解尿素的微生物能利用尿素為氮源正常生長，從而起到選擇作用因為培養基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖特有代謝過程題組三對別離分解尿素細菌及纖維素分解菌的篩選分析篩選微生物的兩種方法比較27題組四微生物的計數分析D3．(2015·北京市海淀區高三期中)以下關于“檢測土壤中細菌總數”實驗操作的表達中，不正確的選項是()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養基，經高壓蒸汽滅菌后倒平板B．取104、105、106倍土壤稀釋液和無菌水各0.1ml涂布不同平板C．將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養24～48小時D．確定對照組無菌后，選擇菌落數在300以上的平板進行計數28題組四微生物的計數分析