TMEM8C、CTRP3基因?qū)2C12細(xì)胞成肌分化的調(diào)控作用研究的開題報告一、研究背景與意義C2C12是常用的小鼠肌肉干細(xì)胞，具有多向分化能力，能夠不斷分化為肌肉細(xì)胞，成為非常好的研究模型。TMEM8C和CTRP3是與肌肉發(fā)育相關(guān)的基因，在以往的研究中已經(jīng)被證明在調(diào)節(jié)肌肉細(xì)胞分化和生長中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。目前，國內(nèi)外的研究團(tuán)隊已經(jīng)展開了許多關(guān)于TMEM8C和CTRP3基因的研究，但是關(guān)于這兩個基因?qū)2C12細(xì)胞分化影響的研究還比較少，因此本研究將在此基礎(chǔ)上展開進(jìn)一步的研究，探究TMEM8C和CTRP3基因?qū)2C12細(xì)胞成肌分化的調(diào)控作用，為深入探究這兩個基因的功能機(jī)制提供實驗依據(jù)。二、研究內(nèi)容與方案1.研究內(nèi)容本研究旨在通過實驗室的細(xì)胞實驗研究，探究TMEM8C和CTRP3基因是否能夠直接調(diào)控C2C12細(xì)胞的成肌分化過程。具體研究內(nèi)容包括：（1）構(gòu)建TMEM8C和CTRP3基因過表達(dá)和沉默的C2C12細(xì)胞系，并進(jìn)行細(xì)胞分化實驗，觀察兩個基因?qū)2C12細(xì)胞的成肌分化過程的影響；（2）利用Westernblot、real-timePCR和免疫熒光染色等技術(shù)，分析基因過表達(dá)和沉默是否改變了C2C12細(xì)胞的肌肉標(biāo)記物蛋白的表達(dá)水平，以及成肌基因的表達(dá)情況；（3）利用細(xì)胞測定法和細(xì)胞增殖實驗，評估基因的表達(dá)水平是否能夠影響C2C12細(xì)胞的增殖能力。2.研究方案（1）構(gòu)建C2C12細(xì)胞系將TMEM8C和CTRP3基因構(gòu)建過表達(dá)和沉默的C2C12細(xì)胞系。對于過表達(dá)細(xì)胞系，采用轉(zhuǎn)染法將TMEM8C和CTRP3基因打入C2C12細(xì)胞中；對于沉默細(xì)胞系，采用siRNA技術(shù)抑制TMEM8C和CTRP3基因的表達(dá)。通過Westernblot檢測細(xì)胞的表達(dá)水平，篩選出表達(dá)穩(wěn)定的細(xì)胞系。（2）分化實驗將構(gòu)建好的TMEM8C和CTRP3基因過表達(dá)和沉默的C2C12細(xì)胞系進(jìn)行分化實驗。分別在細(xì)胞分化的第2、4、6、8天，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，并收集細(xì)胞進(jìn)行Westernblot、real-timePCR和免疫熒光染色等實驗，觀察不同基因表達(dá)水平對細(xì)胞的肌肉標(biāo)記物蛋白的表達(dá)水平和成肌基因的表達(dá)情況的影響。（3）細(xì)胞測定法和細(xì)胞增殖實驗采用MTT法和細(xì)胞增殖實驗評估不同基因表達(dá)水平對C2C12細(xì)胞的增殖能力的影響。三、預(yù)期研究結(jié)果通過構(gòu)建TMEM8C和CTRP3基因過表達(dá)和沉默的C2C12細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞分化實驗，觀察細(xì)胞的成肌分化過程的變化，并分析基因表達(dá)水平是否影響細(xì)胞肌肉標(biāo)記物蛋白的表達(dá)水平和增殖能力，預(yù)期研究結(jié)果包括：（1）TMEM8C和CTRP3基因過表達(dá)和沉默是否能夠直接調(diào)控C2C12細(xì)胞的成肌分化過程；（2）基因表達(dá)水平的變化是否會影響C2C12細(xì)胞的肌肉標(biāo)記物蛋白的表達(dá)水平；（3）基因表達(dá)水平的變化是否會影響C2C12細(xì)胞的增殖