中華人民共和國國家計量檢定規程2011-01-21發布 2概述 3計量性能要求 4通用技術要求 4.2工作正常性 5計量器具控制 5.1檢定條件 5.2檢定項目 5.3檢定方法 5.4檢定結果的處理 5.5檢定周期 附錄A檢定證書(內頁)參考格式 附錄B檢定結果通知書(內頁)參考格式 附錄C檢定記錄參考格式 附錄D流動相密度測量方法 1氨基酸分析儀檢定規程本規程適用于食品安全、醫藥衛生、臨床檢驗和飼料監察等分析用氨基酸分析儀(以下簡稱儀器)的首次檢定、后續檢定和使用中檢驗。氨基酸分析儀是采用陽離子交換色譜法對氨基酸進行分離，并進行定性和定量分析的儀器。樣品中的蛋白質經鹽酸水解，其產物經離子交換色譜柱分離，分離出的單個氨基酸組分與茚三酮試劑反應，生成紫色化合物，用可見光檢測器測量其在570nm的吸光度(脯氨酸和羥脯氨酸在440nm測量),與標準溶液的吸光度比較，即可計算出樣品中氨基酸的含量。氨基酸分析儀的基本原理圖見圖1。FDg自動進樣器流動相檢測器衍生單元氨基酸分析儀的主要計量性能應符合表1的要求。2序號1輸液系統流量設定值誤差不大于士2%流量穩定性2色譜柱分離度(峰高分離度)甘氨酸-丙氨酸不小于90%亮氨酸-異亮氨酸不小于80%3檢測器1)基線噪聲不大于0.5mV2)基線漂移不大于1.5mV/60min不大于1nmol(S/N=2,組氨酸)4整機性能1)定性測量重復性RSD,不大于1.5%(天冬氨酸和精氨酸2)定量測量重復性線性相關系數γ不小于0.995儀器上應有儀器名稱、型號、制造廠名、產品系列號、出廠日期等內容的標牌儀器應無影響正常工作的損傷、劃痕，各部分連接可靠，緊固件無松動4.2.1儀器管路應使用不銹鋼、聚醚醚酮(PEEK)、聚四氟乙烯等管材，在規定的壓4.2.2儀器電源線、信號線等插接緊密，各開關、按鍵、旋鈕、指示燈等功能正常，5.1.1.1室內溫度為15℃~30℃,濕度為30%～80%RH。5.1.1.2儀器周圍無強烈的機械震動和電磁干擾。3國家計量行政部門批準的氨基酸標準物質。5.2檢定項目檢定項目見表2。表2檢定項目一覽表序號后續檢定1外觀及工作正常性檢查十十十2流量設定值誤差十3流量穩定性十—4分離度十十十5十十6十十7檢測限十十十8定性測量重復性十十十9十十十線性十注：“+”表示應檢定項目，“一”表示可不檢定項目.5.3檢定方法5.3.1外觀及工作正常性檢查按第4章的要求，目視、手動逐項檢查。5.3.2泵流量設定值誤差Ss和流量穩定性Sg的檢定氨基酸分析儀有2個泵，輸送緩沖溶液的泵簡稱泵1,輸送茚三酮的泵簡稱泵2.按儀器說明書的要求設定常用的泵流量，啟動泵1,只用緩沖溶液B1,待壓力穩定后，從檢測器出口用事先清洗、干燥、稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，收集20min～30min,在分析天平上稱重，按式(1)計算流量實測值Fm(mL/min)。每測完一次，改變泵流量，幾分鐘后再恢復到原設定值，待穩定后按上述方法收集流動相、稱重。重復測量3次，3次結果的平均值為流量實測值。按式(2)、式(3)計算泵1W?——容量瓶的質量，g;p實驗溫度下流動相的密度，g/cm3(密度測量方法見附錄D);4Fmx——3次測量中流量最大值，mL/min;泵1流量測量結束后，啟動泵2,按上述方法測量泵1和泵2的流量，由當時測得的緩沖溶液B1與茚三酮混合液的密度及流動相搜集時間，按式(1)計算泵1加泵2的流量，扣除泵1的流量，即得泵2的流量，重復測量3次，按式(2)、式(3)計算泵5.3.3分離度按儀器推薦的測量條件設置各項參數，啟動儀器待穩定后，由進樣系統注入氨基酸標準溶液(濃度為5nmol/mL～20nmol/mL)做色譜分析，由色譜圖測量的數據按式(Leu)-異亮氨酸(Ile)的分離度R。H兩相鄰色譜峰交點到基線的距離，mm,5.3.4基線噪聲和漂移按儀器推薦的測量條件設置儀器參數，啟動泵1(只用緩沖溶液B1)和泵2,待儀器穩定后記錄基線60min,取一段時間基線峰-峰值表示基線噪聲，以mV(或μV)表示；60min內基線偏離起始點的值為基線漂移，以mV(μV)/60min表示。5.3.5檢測限在5.3.3的測量條件下，測量濃度為5nmol/mL左右的氨基酸標準溶液3次，記錄色譜圖，由組氨酸(His)峰高平均值和基線噪聲值，按式(5)計算檢測限CLCm——組氨酸溶液濃度，nmol/mL;Hm——組氨酸色譜峰高的平均值，mV或mm;5.3.6定性、定量測量重復性在5.3.3的測量條件下，重復測量氨基酸標準溶液(濃度同5.3.3)至少7次，由測量結果按式(6)計算天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg)保留時間的重復性及甘氨酸(Gly)和組氨酸(His)峰面積的重復性，用RSD式中：X;——第i次測量的色譜峰保留時間(或峰面積);5X——色譜峰保留時間(或峰面積)的n次測量平均值。在儀器正常的工作條件下，測量4～5個濃度(至少在兩個數量級范圍內)氨基酸標準溶液，每個濃度重復測量3次，計算甘氨酸和賴氨酸峰面積的算術平均值，標準溶液濃度對峰面積平均值的線性相關系數γ不小于0.995。5.4檢定結果的處理5.5檢定周期氨基酸分析儀的檢定周期不超過1年，更換重要部件或對儀器性能有懷疑時，應隨X——色譜峰保留時間(或峰面積)的n次測量平均值。在儀器正常的工作條件下，測量4～5個濃度(至少在兩個數量級范圍內)氨基酸標準溶液，每個濃度重復測量3次，計算甘氨酸和賴氨酸峰面積的算術平均值，標準溶液濃度對峰面積平均值的線性相關系數γ不小于0.995。5.4檢定結果的處理5.5檢定周期氨基酸分析儀的檢定周期不超過1年，更換重要部件或對儀器性能有懷疑時，應隨7檢定結果通知書(內頁)參考格式B.3色譜柱分離度：Thr-Ser:Leu-Ile:檢出限：B.5整機性能B.6不合格項目：8附錄C檢定記錄參考格式氨基酸分析儀檢定記錄送檢單位檢定日期單位地址室內溫度聯系電話相對濕度儀器型號檢定人員生產廠家核驗人員設備編號證書編號泵編號1流動相密度F?=F?+?=W?W?W?-W?FF?F氨基酸H?HH?-H/H?Thr-SerGly-AlaLeu-IleC.4基線噪聲C.6檢測限序號保留時間/minAspArgHis1234567平均值樣品濃度測量結果123平均線性相關系數流動相密度測量方法D.1緩沖溶液B1的密度準確稱量(準確到0.1mg)一個清潔、干燥、體積校準過的5mL容量瓶的質量，記為m?,從緩沖溶液B1瓶中取出B1溶液注入容量瓶中恰好到刻度(注意不要將流動相沾到容量瓶刻線以上),在天平上稱重，記為m?,按下式計算緩沖溶液B1的密度，重復3次，取平均值。mz——容量瓶十緩沖溶液的質量，g;D.2緩沖溶液B1和茚三