洛陽惠爾納米科技有限公司洛陽惠爾納米科技有限公司PAGE2PAGE1核酸提取儀關鍵詞：核酸提取、核酸提取儀、納米生物磁珠、核酸提取試劑盒洛陽惠爾納米科技有限公司狄光輝QQ：625006192目錄TOC\o"1-4"\f\h\u25771第1章核酸提取技術 4249611.1核酸提取技術的發展 4247501.2核酸提取方法 6229221.2.1CTAB法 6177911.2.2離心柱子法（質粒為例） 743441.2.3堿裂解法（質粒為例） 819721.2.4胍鹽裂解法（植物為例） 10170151.2.5酚抽提法（全血為例） 12301981.2.6Trizol法（動物組織為例） 13117961.2.7磁珠法（植物為例） 16215281.3核酸提取下游實驗 17257011.3.1PCR 1792491.3.2轉基因 18276401.3.3構建基因文庫 18134411.3.4分子測序 1869561.3.5分子診斷 1912841.3.6親子鑒定 1945791.3.7法醫鑒定 19246391.3.8基因敲除 20229571.3.9基因芯片 20137111.3.10動植物資源保存鑒定 2010328第2章核酸提取儀 21245432.1核酸提取儀的應用領域 21245952.1.1基因組學 21101922.1.2CDC 213812.1.3臨床樣品的分子診斷 2110202.1.4畜牧獸醫 21100732.1.5法醫學的應用 22287742.2核酸提取儀的結構 2283862.2.1磁棒式提取儀 22159602.2.2工作站提取儀 2497412.3核酸提取的步驟 2621052.4國外核酸提取儀的巨頭公司 26178582.4.1美國貝克曼庫爾特有限公司 2643952.4.2雅培 26210752.4.3羅氏 27221202.4.4QIAGEN 2777902.4.5Thermo 2722342.4.6貝克曼 2813242.4.7ABI 2857632.4.8Promega 3125704第3章國內核酸提取儀廠家及型號介紹 32294843.1臺灣圓點奈米技術股份有限公司 3289523.2洛陽惠爾納米科技有限公司 32284113.3西安天隆科技有限公司 35270533.4北京百泰克生物技術有限公司 37190973.5廈門致善生物科技有限公司 38115783.6杭州博日科技有限公司 40194143.7廈門歐達科儀有限公司 41226473.8科華生物 4213813.9瑞基海洋生物科技股份有限公司 438604第4章核酸提取儀發展方向 46209034.1便捷化 46108504.2自動化 46165884.3高通量 46189954.4一體化 46319344.5人性化 466861作者簡介 47核酸提取技術隨著近年來分子生物學技術的高速發展，以核酸擴展，核酸雜交，DNA序列測序分析等分子檢測和分子診斷技術在人體健康體檢、食品、藥品、法醫、獸醫等領域中日益顯得至關重要的作用。新型的分子生物學檢測技術主要包括聚合酶鏈反應、微芯片、高通量測序等。然而，所有現代分子生物學檢測技術首先面臨的問題就是如何從復雜多樣的植物樣本中迅速有效的分離提取所需的基因組核酸，并且抽提后的核酸質量及完整性都會直接影響到下游的實驗結果。核酸提取技術的發展1869年人類首次發現核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)，核酸的提取的技術和方法就隨著進行發展進步。其中包括對核酸提取的各種材料和試劑進行了改進，十二烷基磺酸鈉、酚、脲、鹽酸胍等各種各樣的化學試劑被紛紛應用到核酸提取實驗中。1948年，Chargaff等人使用檸檬酸鈉和RNase獲得了具有天然性狀的DNA。1957年Kirby運用酚抽提DNA，即向細胞裂解液中加人等體積的酚：氯仿：異戊醇(25：24：l體積)混合液，離心后收集上層水相并以異丙醇沉淀其中的核酸，經乙醇漂洗掉鹽分后，使用TE等緩沖液或蒸餾水溶解制備DNA。1961年Marmur創建了十二烷基磺酸鈉(SDS)法，最早用于提取細菌質粒DNA。該法的原理是基于共價閉合環狀DNA保持雙鏈的同時對高相對分子質量的細菌染色體DNA進行選擇性的堿變性，使之與細菌蛋白以及破碎的細胞壁形成表面覆蓋有十二烷基磺酸鹽的復合物，離心后變性物質被去除，質粒DNA便可從上清中回收。1979年Chirgwin對前人的研究進行了系統地總結，創立了硫氰酸胍法提取RNAHl，異硫氰酸胍是一種強的蛋白變性劑，既可以破裂細胞，也可以抑制核酸酶的作用，但該方法的操作較為繁瑣。1987年Chomczynski和Sacchi在此基礎上開創了一步法提取RNA，提高了RNA提取的速度并因此得到了廣泛的應用。1995年Karrwer等人建立了微量移液體法提取DNA。2002年Asano等人利用激光微解剖法提取到水稻的基因組核酸哺。2003年Bimbaun等人使用原生質體分離法提取到了擬南芥根系的核酸。除了上述幾種核酸提取方法外，還有其他別的核酸提取方法也得到了實驗證實和發展。核酸的常規提取方法還包括CTAB法、Trizol法、氯化鋰法、蝸牛酶法、石英砂法、氯化芐法、反復凍融法、溶壁酶法等。生物試劑公司已經以這些傳統的核酸提取方法為基礎研發出了各種各樣的核酸提取試劑盒，用于從各種各樣不同的組織樣本中分離和提取DNA以及RNA，然而，傳統的核酸提取技術中所包含的沉淀和離心等操作需要用到大量的生物樣本，而且傳統提取技術步驟較為繁雜，費時長，收率低，很難實現自動化操作，大部分方法還需要操作人員直接接觸有毒的化學試劑，因此，隨著分子生物學以及高分子材料學的快速發展，傳統的從液相系統中分離提取核酸的方式逐漸被以固相吸附物載體為基礎的新方法所取代。新興的核酸分離提取方法主要包括：旋轉離心柱提取法、玻璃粉吸附法、二氧化硅基質法、陰離子交換法、納米磁珠提取法等。不管是采用具體的哪種方法來分離和提取核酸，總的來說，這類方法的操作步驟主要可以分為三步：第一部分是利用裂解液促使細胞破碎，使細胞中的核酸釋放出來。第二部分是把釋放的核酸特異地吸附在特定的載體上，并且這種載體只對核酸有較強的親和力和吸附力，而對其他的生化組分如蛋白質、多糖、脂類不能具有親和力和吸附力。第三部分是把吸附在特定載體上的核酸洗脫下來，從而得到純化的核酸。離心柱法提取核酸曾經應用得很普及，市場上的多數質粒DNA提取試劑盒都是在離心柱法的基礎上發展而來的。該方法采用特殊的硅基質吸附材料，特點是：高鹽酸性緩沖液存在時可特異性吸附DNA，除去RNA與蛋白質等不能結合的雜質，而低鹽堿性緩沖液可洗脫結合在吸附柱上的DNA，然而這種方法的缺點是樣本需求量大，耗費樣品較多，對于某些珍稀樣本其應用受到很大的局限，同時離心柱法提取核酸需要反復離心，不便于高通量、自動化操作，特別是在基因診斷、突發疫情的監測和控制等領域，使用離心柱法提取核酸需要大量的操作人員及儀器設備才能滿足需求。20世紀90年代起，為了適應現代分子生物學檢測實驗高通量、高靈敏度、自動化操作的需要，運用磁珠提取核酸的方法應運而生了，該方法是納米科技與生物技術的完美結合，具有其他核酸提取方法無法比擬的優勢，主要體現在：能夠實現高通量操作和自動化，目前已有96孔的核酸自動提取儀，用一個樣品的提取時間即可實現對96個樣品的處理，效率直接提高96倍，符合生物學高通量的操作要求，使得傳染性疾病暴發時能得到快速及時有效的應對；操作簡單、用時短，整個提取流程只有四步，基本上可以在30—40min完成；安全無毒，不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒溶劑，對實驗操作人員的傷害少，符合現代以人為本，安全至上的理念；磁珠與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大；磁珠提取核酸的方法采用智能化軟件操作系統，既能控制孔間污染又能避免批次間的污染；同時保證實驗結果的穩定性和重復性，避免人工操作引起的差異及錯誤；成本低廉，便于廣泛應用。由于磁珠合成采用的都是低價無機和有機原料，無須特殊的儀器設備，使得最終的合成和研發成本都很低，符合我國的基本國情和經濟現狀，便于廣泛應用。核酸提取方法CTAB法實驗原理CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/LNaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物，只是不能沉淀核酸.通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。采用機械破碎植物細胞，然后加入CTAB分離緩沖液將DNA溶解出來，再經氯仿－異戊醇抽提除去蛋白質，最后得到DNA。主要試劑2×CTAB提取緩沖液：100mmol/LTris-HCl(pH8.0),20mmol/LEDTA,1.4mol/LNaCl,2%(w/v)CTAB，40mmol/L巰基乙醇(隨用隨加)TE緩沖液10mmol/LTris-HCL（pH7.4），1mmol/LEDTA氯仿-異戊醇（24：1）、70%乙醇、液氮主要設備冷凍高速離心機臺式高速離心機、移液器、水浴鍋、陶瓷研缽、離心管：50ml，有蓋、離心管5ml和1.5ml、小玻棒：形狀為彎成鉤狀的實驗步驟1.取1-50g新鮮植物材料，于液氮中研成粉。2.將凍粉轉入預冷的離心管中，立即加入等體積(w/v)2×CTAB提取緩沖液，65℃保溫10-20分鐘，其間不時搖動。3.加入等體積的氯仿/異戊醇，輕緩顛倒離心管混勻，室溫下，12000r/min離心10-20分鐘。4.將上清液轉入另一離心管中,加入等體積的氯仿/異戊醇，顛倒離心管混勻，室溫、12000r/min離心10分鐘。5.將上層水相轉入新的經硅烷化處理的離心管中，加入0.6-1倍體積的異丙醇,混勻，室溫下放置30分鐘。6.3500-4000r/min離心5-10分鐘，去上清液,70%乙醇漂洗，沉淀吹干。7.風干后加入40ul的TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存備用。。8.取2ul溶液電泳檢測。注意事項所有操作均須溫和，避免劇烈震蕩。離心柱子法（質粒為例）實驗原理試劑盒的膠回收柱采用特殊硅基質材料在一定的高鹽緩沖系統下高效、專一地吸附DNA、RNA的原理（在高鹽、低pH值情況下吸附DNA；低鹽、高pH值情況下釋放DNA.離心柱上含有Resin合成樹脂,具有吸附DNA的功能），配備設計獨特的離心吸附柱式結構，使用常規臺式高速離心機，在幾分鐘之內即可以高效回收核酸片段。實驗材料：含質粒的大腸桿菌DH5α；LB+Amp培養基（配方參照《分子克隆》，除非特別說明，以下同）；柱離心質粒小量制備試劑盒（博大泰克公司）；質粒DNA（pUC18-G）；電泳用瓊脂糖；TAE緩沖液；goldview熒光染料；6×DNA上樣buffer；限制性內切酶EcoRI（10U/μl，G’AATTC）；HindIII（10U/μl，A’AGCTT）；10×bufferR。實驗方法：1．將帶有質粒的大腸桿菌單克隆接種到1.5ml含有相應抗生素的液體培養基，37℃振蕩培養12～16小時；2．1.5ml過夜菌轉移至Eppendorf管中，10000rpm(r/min)離心1min，用水泵吸干培養基上清液，加入100l溶液I(含RNaseA)，充分混勻；3．加入150l溶液II，加蓋顛倒6-7次使之混勻，室溫放置1～2min；4．加入150l溶液III，加蓋后顛倒6-7次混勻，室溫放置5min；5．用臺式高速離心機，12000rpm離心10min；6．吸附柱中加入420μl結合緩沖液，將步驟5中的上清轉移至吸附柱中，蓋上收集管的蓋子，混勻，12000rpm離心1min；7．取下吸附柱，倒掉收集管中的液體，吸附柱放回同一收集管，向吸附柱中加入600μl漂洗液,靜置1min，12000rpm離心30s；8．重復步驟7一次；9．取下吸附柱，倒掉收集管中的液體，吸附柱放回同一收集管，12000rpm離心2min；10．吸附柱放入一個新的1.5ml離心管，在吸附柱的中央加50μl洗脫緩沖液或TEbuffer或水，室溫放置3~5分鐘。蓋好蓋子12000rpm離心1分鐘，收集質粒DNA溶液，-20℃凍存備用；11．在250ml椎形瓶中稱取0.6g瓊脂糖，加60ml1×TAEbuffer，在微波爐中加熱至沸騰且均勻；12．往膠溶液中加3μlgoldview熒光染料，混勻，室溫自然冷卻；13．制膠板兩頭分別用膠布封好，放置在水平的實驗臺上，將梳齒架在制膠板的梳齒槽內，待膠溶液冷至～50℃時，把60ml膠液全部到入制膠板中，室溫自然冷卻至充分凝固；14．撕去封制膠板的膠布，將裝有凝膠和梳齒的制膠板放入電泳槽中，加1×TAE至高過凝膠表面加樣孔頂端～2mm，小心拔出梳齒；15．取5μl質粒DNA，與1μl6×DNA上樣buffer混勻后全部加入點樣孔，100V恒壓電泳至溴酚藍指示劑前沿走到凝膠中間（約需1小時）；16．關閉電泳儀，連制膠板一起取出凝膠，在凝膠成像系統中觀察電泳結果并拍照；堿裂解法（質粒為例）實驗原理SDS堿裂解法制備質粒DNA的原理：細菌懸浮液暴露于高pH的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質變性，相互纏繞成大型復合物，被十二烷基硫酸鹽包蓋，當用鉀離子取代鈉離子時，復合物會從溶液中有效沉淀下來，離心去除后，就可從上清液中回收質粒DNA。實驗步驟將細菌沉淀，所得重懸于100μl用冰預冷的溶液I中，劇烈振蕩。溶液I：50mmol/L葡萄糖。25mmol/LTris.Cl(PH=8.0)。10mmol/LEDTA(pH=8.0)。溶液I可成批配制，每瓶約100ml，在10lbf/in2（6.895×104Pa）高壓下蒸氣滅菌15分鐘，貯存于4℃。須確使細菌沉淀在溶液I中完全分散，將兩個微量離心管的管底部互相接觸震蕩，可使沉淀迅速分散。2）加200μl新配制的溶液Ⅱ。溶液Ⅱ：0.2mol/LNaOH（臨用前用10mol/L貯存液現用現稀釋）。1%SDS。蓋緊管口，快速顛倒離心管5次，以混合內容物。應確保離心管的整個內表面均與溶液Ⅱ接觸。不要振蕩，將離心管放置于冰上。加150μl用冰預冷的溶液Ⅲ。溶液Ⅲ：5mol/L乙酸鉀60ml冰乙酸11.5ml水28.5ml。所配成的溶液對鉀是3mol/L，乙酸根是5mol/L。蓋緊管口，將管倒置后和地振蕩10秒鐘溶液Ⅲ在粘稠的細菌裂解物中分散均勻，之后將管置于冰上3-5分鐘。4）用微量離心機于4℃12000g離心5分種，將上清轉移到另一離心管中。5）可做可不做：加等量酚：氯仿：異戊醇（24:23:1），振蕩混勻，用微量離心機于4℃以12000g離心2分鐘，將上清轉移到另一良心管中。有些工作者認為不必用酚：氯仿進行抽提，然而由于一些未知的原因，省略這一步，往往會得到可耐受限制酶切反應的DNA。6）用2倍休積的乙醇于室溫沉淀雙錠DNA。振蕩混合，于室溫放置2分鐘。7）用微量離心機于4℃以12000g離心5分鐘。8）小心吸去上清液，將離心管倒置于一張紙巾上，以使所有液體流出。再將附于管壁的液滴除盡。除去上清的簡便方法是用一次性使用的吸頭與真空管道相連，并用吸頭接觸液面。當液體從管中吸出時，盡量使吸頭遠離核酸沉淀，然后繼續用吸頭通過抽真空除去附于管壁的液滴。9）用1ml70%乙醇于4℃洗滌雙鏈DNA沉淀，按步驟8）所術方法去掉上清，在空氣中使核酸沉淀干燥10分鐘。i.此法制備的高拷貝數質粒（如Xf3或pUC），其產量一般約為：每毫升原細菌培養物3-5μg。ii.如果要通過限制酶切割反應來分析DNA，可取1μlDNA溶液加到另一含8μl水的微量離心管內，加1μl10×限制酶緩沖液和1單位所需限制酶，在適宜溫育1-2小時。將剩余的DNA貯存于-20℃。iii.此方法按適當比例放大可適用于100ml細菌培養物。胍鹽裂解法（植物為例）實驗原理在含有強的異硫氰酸胍變性劑的提取緩沖液中裂解植物組織粉末。在提取緩沖液中包含RNase酶抑制劑，抑制RNase活性并確保RNA的完整性。通過第一次離心柱時細胞碎片阻留在柱上，溶液被均質化，包括RNA在內的小分子物質通過離心柱，加入乙醇后，再經過第二個離心柱，RNA就結合在底部有硅膠的膜上，洗去其他雜質，最后用無RNase水溶出RNA，該柱子最大可結合100μg大于200bp的RNA，小分子RNA如5.8S、5S、tRNA將會丟失。每個柱子所用起始材料最多為100mg，可分離30~70μg的總RNA。由于不同發育階段和不同組織所含RNA不同，可以調整起始材料用量，如果組織含有RNA較少，可用100mg，若RNA含量較高，則起始材料應小于100mg。即使總RNA含量未達到柱子吸附最大值，起始材料太多時，由于裂解不徹底，同樣導致RNA產量和純度降低。如果總RNA含量超過100μg，柱子也只能回收100μg以下的RNA。對于胚乳等一類組織，則應用RLC提取液，其流程如下：植物組織（＜100mg）→研磨，提取緩沖液RLC裂解→離心過柱（淡紫色柱）→加入乙醇→離心過柱（粉紅色柱），RNA結合在膜上→用緩沖液RW1、RPE洗滌3次→用無RNase水溶出RNA→總RNA。提取出總RNA后，要對其質量和濃度進行測定。組成RNA堿基在紫外光譜區都有一定的吸收值，最大吸收波長為250~270nm。堿基與磷酸或糖形成核苷酸后，其最大吸收波長為260nm，吸收波谷為230nm，這就是分光光度計測定其濃度的原理。因此根據RNA溶液在260nm下的OD值就可計算出樣品濃度，1OD值相當于40μg/ml，其計算分式是：RNA樣品濃度（μg/ml）=OD260×40×稀釋倍數。由于蛋白質在280nm下有吸收高峰，用OD260/OD280比值就可計算出樣品純度。分光光度計可測定其濃度和純度，但不能得到完整性的信息，因此要用瓊脂糖凝膠電泳來檢查其是否完整。如前所述，總RNA中含有28S、18S、5S等rRNA，其中28S、18S最豐富，所占比例基本不變，在瓊脂糖凝膠電泳上28SrRNA亮度約為18SrRNA亮度的1倍，這樣的結果說明完整性較好。如果亮度相同，說明已有不同程度的降解。嚴重降解的樣品，就見不到28SrRNA的帶，甚至18S的帶也見不到，呈現一片紅。mRNA在瓊脂糖膠上按相對分子質量由大到小連續分布，無明顯條帶出現。RNA電泳可在變性和非變性膠上進行，膠的濃度應為1.0~1.5%，在非變性膠上無法判斷RNA的相對分子質量，因為RNA遷移率與相對分子質量相關性比較差。實驗步驟1、稱取新鮮葉組織樣品100mg，液氮速凍。2、在預冷的研缽中研磨成細粉，轉移到2ml離心管中。注意研磨不徹底則會造成嚴重產量降低。3、待液氮揮發（但不能解凍）后，加入450ml提取緩沖液RLT，渦旋混勻，并在56℃溫育1~3min。注意：最好在RLT臨用前加入1/100體積的14.5Mβ-巰基乙醇，加后保存時間不超過1個月，RLT溶液應在1個月內使用。對于高淀粉含量的材料，可將溫度提高到60℃以上防止淀粉結塊。4、將裂解液加到離心柱（淡紫色柱）上，下接一個2ml收集管，最大轉速（10000g）離心2min。如果將裂解液粘稠，可切去吸頭頂端，用大口吸頭吸取。裂解液通過柱子時被均質化，大部分組織碎片都被截留在柱子表面，只有少部分通過柱子形成沉淀，因此，應小心吸取上清液，轉移到另一新離心管，不要吸細胞碎片殘渣沉淀。5、加入0.5倍體積（225μL）96~100%乙醇，吹打混合均勻。如果裂解液有損失，則相應減少乙醇用量。加入乙醇后，可能會出現沉淀，但對提取無影響。6、將混合液全部（包括沉淀675μL）轉移到吸附RNA的離心柱（粉紅色柱），下接一個2ml收集管，大于8000g或10000r/min離心15sec。如果混合液體積超過700μL，每次只加700μL到離心柱上，按上述條件離心。棄去管內液體，重復使用收集管。7、加入700μL洗脫液，大于8000g或10000r/min離心25sec，棄去收集管。8、將離心柱轉移到一新的2ml收集管上，加入500μLRPE液，大于8000g或10000r/min離心15sec。棄去管內液體，重復使用收集管。注意：試劑盒提供濃縮的PRE洗脫液，所心使用前必須加入4倍體積的96~100%乙醇，成為工作液。9、加入500μLRPE液到離心柱上，最大轉速離心2min，干燥離心柱，棄去收集管。殘留乙醇會干擾隨后的反應，這次離心要保證無乙醇殘留。若有乙醇殘留，以最大轉速離心1min。注意：小心移去離心柱，不要接觸管到液體，以防止攜帶乙醇。10、把離心柱連接到一新的1.5ml收集管上，加入20~30μL無RNase水，大于8000g或10000r/min離心1min，洗脫RNA。若RNA產量在20μg以上，用30~50μL無RNase水再洗脫一次。RNA樣品存于－20℃或－80℃冰箱。11、分光光度計測定RNA。開啟紫外分光光度計，預熱30min。用DEPC處理水校正零點。用DEPC處理水稀釋RNA樣品30~50倍，將稀釋液轉移到比色杯中。讀取230、260、280、310nm的OD值。計算出樣品濃度和OD比值。OD260/OD280比值應為1.7~2.1，低于1.7，說明有蛋白質或酚污染；OD260/OD230比值應大于2，低于此值，說明有糖、鹽、胍等小分子污染。12、瓊脂糖凝膠甲醛變性電泳。首先制備凝膠（1.2%）。稱取1.2g瓊脂糖，加72mlDEPC處理的水，加熱溶化。冷卻至60℃，在通風櫥內加入10×凝膠緩沖液10ml，甲醛（37%）18ml，混勻后倒膠。然后制備樣品。在離心管中，將RNA樣品與5×變性上樣緩沖液按4:1比例混勻。65℃溫育5~10min，迅速在冰上冷卻5min，瞬時離心數秒。上樣前凝膠須預電泳5min，隨后將樣品加入上樣孔。以5V/cm電壓電泳1.5~2hr。待溴酚藍遷移至凝膠長度的2/3~4/5處結束電泳。將凝膠置于溴化乙錠溶液（0.5μg/mL，用0.1mol/L乙酸胺配制）中當色約30min。紫外燈下觀察結果。酚抽提法（全血為例）實驗原理用酚抽提細胞DNA時，使蛋白質變性，同時抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚有效變性蛋白質，抑制了DNase的降解作用。氯仿克服酚的缺點，加速有機相與液相分層。最后用氯仿抽提，去除核酸溶液中的跡量酚（酚易溶于氯仿中）。實驗步驟1.200ul的全血/新鮮組織加入1ml的滅菌水，顛倒混勻（新鮮組織需碾磨），10000轉離心10分鐘，棄上清。管底應該有沉淀。重復兩次2.加入200ul的DNA裂解液，5ul的蛋白酶K混勻。3.55度過夜消化（細胞3小時即可）。4.消化完成后加入等體積的酚氯仿混合液（1:1），劇烈震蕩，使其變成奶咖色。5.12000轉離心10分鐘。6.取上清，注意不要洗到中間介質以及下層液體。7.加入等體積的氯仿，顛倒混勻。8.12000轉離心10分鐘。9.取上清，注意不要洗到中間介質以及下層液體。10.加入10分之一的醋酸鈉以及2.5倍的無水乙醇，顛倒混勻。11.12000轉離心10分鐘。12.棄上清。13.加入1ml70%乙醇，使其白色沉淀懸浮，顛倒混勻數次。14.12000轉離心10分鐘。15.棄上清，然后室溫開蓋靜置分鐘使其乙醇揮發干凈。16.加入滅菌水溶解DNA，一般加入50ul滅菌水溶解。Trizol法（動物組織為例）實驗原理Trizol試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品裂解或勻漿過程中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀來還原。在除去水樣層后，樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機層中加入異丙醇能析出有機層的蛋白。共純化DNA對于樣品間標準化RNA的產量十分有用。Trizol試劑可用于小量樣品（50~100mg組織，5×106細胞），也可用于大量樣品（≥1g組織或≥107細胞），對人、動物、植物和細菌、血液提取都適用，可同時處理大量不同樣品。一個小時內即可完成反應，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質污染，可用于Northernblot、RT-PCR、Dotblot、RNase保護分析等。本試劑為紅顏色，便于區分水相和有機相，同時最大限度的保持RNA的完整性。保存條件：2~8℃避光保存12個月。實驗試劑Trizol，氯仿，異丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水。實驗前需要準備的物品：1ml注射器，1.5mlEP管（DEPC處理過），大、中、小號槍頭（DEPC處理）注意事項1.選擇新鮮血液，不得超過4小時。2.選擇新鮮組織，生長旺盛的組織。3.選擇新鮮的幼嫩組織。4.選擇處于生長旺盛的時期收集細胞。RNA純化要求1.純化后不應存在對酶（如逆轉錄酶）有抑制作用的物質。2.排除有機溶劑和金屬離子的污染。3.蛋白質、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。4.排除DNA分子的污染。RNA提取注意事項1.杜絕外源酶的污染。（1）嚴格戴好口罩，手套。（2）實驗所涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實驗臺面等要徹底處理。（3）實驗所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。2.阻止內源酶的活性。（1）選擇合適的勻漿方法。（2）選擇合適的裂解液。（3）控制好樣品的起始量。3.明確自己的提取目的。（1）任何裂解液系統在接近樣品最大起始量時，提取成功率急劇下降。（2）RNA提取成功的唯一經濟的標準是后續實驗的一次成功，而不是得率。Rnase污染的10大來源1.手指頭2.槍頭3.水/緩沖液4.實驗臺面5.內源Rnase6.RNA樣品7.質粒提取8.RNA保存9.陽離子（Ca，Mg）10.后續實驗所用的酶實驗步驟1.樣品處理：（1）培養細胞：收獲細胞1~5×107，加入1mlTrizol（異硫氰酸胍/酚）（在冰箱旁邊取出白細胞即刻加入Trizol），混勻；用1ml注射器反復抽取（約30次）以破裂細胞及剪切DNA，室溫靜置5min（使核酸蛋白復合物完全分離）。（2）組織：取50~100mg組織（新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可）置1.5mlEP管中，加入1mlTrizol充分勻漿，室溫靜置5min。2.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。3.加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15~30s，靜置2~3min。4.4℃離心，12000g×15min。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。5.小心吸取上清至一新的DEPC處理過的1.5mlEP管中（如要分離DNA和蛋白質可保留有機相），加入0.5ml異丙醇，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置10min。6.4℃離心，12000g×10min。離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。7.棄上清，于沉淀中加入75%乙醇（冰冷）1ml，振搖，充分洗滌沉淀。8.4℃離心，12000g×5min。9.棄上清，短暫離心，小心吸取棄去上清。10.加入適量（20μl）DEPC（RnaseFree）H20溶解RNA（65℃促溶10~15min）。11.取2μl進行電泳，其余-80℃保存。磁珠法（植物為例）實驗原理磁珠法中的細胞裂解液是一種蛋白變性劑，可使動植物的細胞裂解，并使與DNA結合的蛋白質變性，DNA游離釋放，磁珠可以特異地吸附DNA，通過洗滌，去除DNA以外的蛋白質、多糖等雜質，再用洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，可用于pcr模板、基因工程等。生物磁珠是一種新型的功能化固體載體，其表面包被有活性基團，可以與多種生物活性物質發生偶聯，兼具有液體的流動性和固體磁性材料等特點，在外磁場的作用下可以定向移動和集中，當撤去外磁場后，稍加振蕩或抽吸又可均勻分散于液體中，從而使固液相的分離變的十分快捷方便，通過簡單的洗脫可以得到純度很高的靶向物質。注意事項1.BufferA低溫儲存可能會出現白色絮狀漂浮物，使用前在恒溫水箱中溫育至白色沉淀完全溶解，不影響使用效果。2.BufferB4℃保存，可能會析出白色粉末狀沉淀，使用前混合均勻，不影響使用效果。3.磁珠結合液用前一定要充分混勻。4.如果下游實驗對RNA污染比較敏感，可在裂解時加1μlRNaseA（10mg/ml）。5.如果是干材料，適當延長裂解時間；種子用粉碎機打成粉末狀使用，樣品為種子時，裂解時間為30min。6.如果同等取樣量下欲得到更多DNA可以增加洗脫次數（洗脫次數最好不要超過3次），也可以適當延長裂解時間。操作步驟1.裂解取新鮮植物組織10mg，與研缽中稍加研磨。加入100μlBufferA、2μlBufferB、10μlBufferC，研磨均勻，然后轉移至1.5mlEP管中，混合均勻（可用漩渦振蕩器，1200～1800rpm）。然后把EP管置于恒溫水箱中65℃溫育20min。2.結合將EP管從溫育設備中取出，12000r離心5～10min。取80μl上清，加入振蕩混勻的磁珠5μl、加入90μl異丙醇，顛倒混勻5min。將EP管置于磁力架上進行磁分離，吸棄廢液，（吸凈管蓋及管底殘液）。3.洗滌⑴加入400μl80%乙醇，點振5～10次（若有團狀或絲狀物可增加點振次數及力度），然后磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液；⑵重復步驟⑴一次，室溫下開蓋干燥5min。4.洗脫加入50-100μl洗脫液，緩慢抽吸混勻，65℃溫浴10min。每隔2～3min輕搖EP管幾下混勻。然后磁分離，小心吸取上清液至新的EP管中，進行下游實驗。核酸提取下游實驗PCR聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)，簡稱PCR，是一種分子生物學技術，用于放大擴增特定的DNA片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復制。PCR(聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。轉基因轉基因技術（GeneticallyModified，簡稱GM），將基因片段轉入特定生物中，并最終獲取具有特定遺傳性狀個體的技術。不管轉入的基因來自進化樹上再遠的物種，接受這基因的也能讀解，那是因為DNA是通用代碼，細胞知道如何解讀。即使親緣關系最遠的物種——比如人類和細菌——也共享許多基因，在數十億年的進化過程中一直保持不變。基因從哪來，并不是關鍵，起到的作用才是它們的功能，所以植物轉入動物基因不會有動物的味道。轉基因技術的理論基礎來源于進化論衍生來的分子生物學?；蚱蔚膩碓纯梢允翘崛√囟ㄉ矬w基因組中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的基因片段?；蚱伪晦D入特定生物中，與其本身的基因組進行重組，再從重組體中進行數代的人工選育，從而獲得具有特定的遺傳性狀個體。該技術可以使重組生物增加人們所期望的新性狀，培育出新品種。構建基因文庫一個生物體的基因組DNA用限制性內切酶部分酶切后，將酶切片段插入到載體DNA分子中，所有這些插入了基因組DNA片段的載體分子的集合體，將包含這個生物體的整個基因組，也就是構成了這個生物體的基因文庫。將這些載體導入到受體細菌或細胞中，這樣每個細胞就包含了一個基因組DNA片段與載體重組DNA分子，經過繁殖擴增，許多細胞一起包含了該生物全部基因組序列，我們將這一個集合體叫做基因文庫。用重組DNA技術將某種生物細胞的總DNA或染色體DNA的所有片斷隨機地連接到基因載體上，然后轉移到適當的宿主細胞中，通過細胞增殖而構成各個片段的無性繁殖系（克?。?，在制備的克隆數目多到可以把某種生物的全部基因都包含在內的情況下，這一組克隆的總體就被稱為某種生物的基因文庫。同一定義也適用于某種生物的線粒體DNA或葉綠體DNA的基因文庫。由于制備DNA片段的切點是隨機的，所以每一克隆內所含的DNA片段既可能是一個或幾個基因，也可能是一個基因的一部分或除完整基因外還包含著兩側的鄰近DNA順序。分子測序利用DNA聚合酶合成與模板互補的DNA鏈，在三圍空間中記錄模板位置和核苷酸序列信息，再反向構建DNA模板的序列。除了DNA合成反應的三大要素（模板、酶、核苷酸）之外，模板所處位置和反應循環中單色熒光標記的核苷酸順序(如A、C、G、T)也是最終DNA序列能夠完成的關鍵要素。如果反應所用的核苷酸標記著四種不同的熒光，則每一次反應循環就需要切換不同波長的光以記錄不同的堿基。分子診斷分子診斷：應用分子生物學方法檢測患者體內遺傳物質的結構或表達水平的變化而做出診斷的技術，稱為分子診斷。分子診斷是預測診斷的主要方法，既可以進行個體遺傳病的診斷，也可以進行產前診斷。分子診斷的材料包括DNA、RNA和蛋白質。分子診斷主要是指編碼與疾病相關的各種結構蛋白、酶、抗原抗體、免疫活性分子基因的檢測。親子鑒定親子鑒定就是利用法醫學、生物學和遺傳學的理論和技術，從子代和親代的形態構造或生理機能方面的相似特點，分析遺傳特征，判斷父母與子女之間是否是親生關系，是法醫物證鑒定的主要組成部分，親子鑒定在中國古代就已有之，如滴骨驗親，滴血驗親等。DNA親子鑒定實驗操作步驟如下：第一步：DNA提取把樣本細胞核中所含有DNA提取出來，然后進行一定的純化，化除樣本中的雜質。第二步：PCR擴增PCR的中文名為聚合酶鏈式反應，簡單的說，華科基因PCR擴增這一步就是把我們所需要的片段通過酶促反應，在PCR儀上進行大量復制，放大到通過某些專用儀器可以看到的程度。第三步：后PCR反應這一步主要是上ABI測序儀檢測的準備階段，將雙鏈的DNA打開，加一些檢測用的的內標，主要是用來標記檢測的片段長度。第四步：毛細管測序儀檢測由于DNA帶有電荷，通過毛細管電泳的方法，不同片段DNA長度的電泳速度不同，在同樣的電壓，同樣的電泳時間下，泳動的距離不同，這些長短不同距離可以通過前期加入的內標測量分辨出來，同時可通過一定的軟件顯示在電腦上，方便檢測人員處理和分析數據。第五步：分析數據，出具報告主要是檢測人員將所得結果進行分析匯總、計算，然后出鑒定結論和報告。法醫鑒定法醫鑒定是司法程序中有關技術工作的一項重要內容。是運用醫學、生物學、人類學及物理、化學等方面的知識對與人身有關的活體、尸體及生物物證等的檢驗鑒定工作，從而取得死亡原因、傷害程度、兇器種類、血型分析、事實確認等結論性意見。法醫鑒定結論是三大訴訟法的重要證據種類，由于其與人身密切相關，決定了法醫鑒定在訴訟和非訴訟活動中具有十分重要的意義。它是查明案件事實，分清案件性質的重要根據，同時又是鑒別案內其他證據是否真實的重要手段。可以說，法醫鑒定工作的好壞在一定程度上影響著司法公正與否?；蚯贸蚯贸?knockout)是指一種遺傳工程技術，針對某個序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏障，并可進一步對生物體造成影響，進而推測出該基因的生物學功能。基因敲除和基因嵌入技術是上個世紀90年代出現的最新外源DNA導入技術?；蚯贸腔虼虬屑夹g的一種，類似于基因的同源重組。指外源DNA與受體細胞基因組中序列相同或相近的基因發生同源重組，從而代替受體細胞基因組中的相同/相似的基因序列，整合入受體細胞的基因組中。此法可產生精確的基因突變，也可正確糾正機體的基因突變。基因嵌入又稱基因置換，它是利用內源基因序列兩側或外面的斷裂點，用同源序列的目的基因整個置換內源基因。目前用于基因敲除和基因嵌入的技術有Cre/LoxP系統、FLPI系統等?；蛐酒蛐酒?genechip)（又稱DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時，通過確定熒光強度最強的探針位置，獲得一組序列完全互補的探針序列。據此可重組出靶核酸的序列。動植物資源保存鑒定建立瀕危野生動植物種質基因資源庫和實施瀕危動植物的基因保護工程，對于我國瀕危野生動植物的保護和繁衍，保持我們所生活的環境生物的多樣性和生態鏈的平衡，無疑具有重大意義。但是，對于已經進入生物經濟時代的人類來說，其意義已遠不止這么簡單。提取出高質量的核酸在其他領域和方向都有不可低估的作用。但是僅僅依靠傳統的核酸提取方法，很難滿足日益巨大的中國核酸市場，因此全自動核酸自動提取儀的出現將會給中國的核酸提取市場帶來光明。核酸提取儀核酸提取儀也叫核酸純化儀是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸的提取工作的儀器，最近幾年才得到應用推廣的分子生物學常用儀器。核酸提取儀的應用領域幾乎在每個實驗室，與生物分子相關的分離純化工作都是十分重要，且必不可少的。但要對多個樣品進行純化還是相當困難的，不僅需要選擇合適的純化技術，而且工作量也特別大，很難滿足當前飛速發展對高通量樣品進行提取純化的需求。磁珠自動核酸提取純化系統是使用磁珠法技術，可廣泛應用于基因組學、疾控醫療、食品安全、法醫鑒定等領域。基因組學自動核酸提取儀非常適合于基因組學的研究?？梢蕴崛颖镜膩碓词俏⑸?、動物、植物或是病毒，全血基因組DNA提取試劑盒、白細胞層全血基因組提取試劑盒、動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒，可以快速的純化出足夠數量和純度的DNA或RNA。高質量的核酸可以滿足下游各種應用(如PCR/Real-timePCR、基因芯片、Southernblot、Northernblot)的需要。CDC自動核酸提取儀可用于解決甲型H1N1流感病毒（InfluenzaAvirussubtypeH1N1）、兒童手足口病、麻疹病毒等的快速自動化疫病監測系統，提高重大疫情應對響應能力。臨床樣品的分子診斷自動核酸提取儀可快速高通量的處理臨床樣品，提取的核酸可用于后續的分子診斷，同樣適合于福爾馬林固定石蠟包埋(Formalin-FixedandParrffin-Embedded,FFPE)的組織樣品。畜牧獸醫可高效、高靈敏度地提取禽流感病毒(Avianinfluenzavirus)、新城疫病毒(Newcastlediseasevirus)、豬瘟病毒（Classicalswinefevervirus,CSFV）、牛病毒性瀉病毒(Bovineviraldiarrheavirus)、立克次體(Coxiellaburnetii)等。法醫學的應用對于法醫工作而言，核酸提取的效率和穩定性都是十分重要的。自動核酸提取儀與專門的法醫樣品核酸提取磁珠試劑配合使用，可從包括煙蒂、毛根、軟骨、指甲、血痕等不同來源的材料中純化高質量的DNA。核酸提取儀的結構目前市面上常見的核酸提取儀有兩種分類分類方式，一種是按用途進行分類，另一種是按照應用試劑的不同進行分類。(1)按照用途一般可分為兩大類：一類是自動液體工作站，自動液體工作站是功能非常強大的設備，液體分液、吸液等自動完成，甚至可以整合擴展、檢測等儀器設備，實現標本提取、擴增、檢測全自動化。提取核酸只是其功能的一個應用，不太適合常規實驗室提取核酸，一般都應用在單一類標本并且一次提取標本量非常大(至少96個，一般幾百個)的實驗需求上。自動工作站的平臺建立及平臺的運作，需要比較大的資金。另一類是小型的自動化儀器，小型的自動化儀器是通過運行結構的特殊設計來達到自動提取核酸的目的，可以在任何實驗室得到應用，最近幾年有很多機型陸續投放市場。(2)根據應用的試劑不同，又分為兩類：一類是應用磁珠法試劑的儀器，另一類是應用離心柱法試劑的儀器。應用磁珠法的自動核酸提取儀操作簡便，容易自動化，是目前市場上的主流，如HR-003、QAGEN、Lab-Aid820等儀器。核酸提取儀與傳統的手工操作相比有哪些優勢和特點?核酸提取儀一般具有以下的特點：(1)無交叉污染：儀器部件未接觸到生物學樣本;(2)自動化系統：每次提取工作，操作者只需要做好安裝工作，布置好孔板(提供提取所需要的試劑).提取整個過程都不需要人為的幫助，儀器自動完成;(3)提取控制：在提取過程中，如果操作者需要，該系統允許您對提取過程進行控制。磁棒式提取儀磁棒法核酸提取儀，通量通常有8、16、32、96通道，相對于抽吸法，磁棒法的優點是每一步的液體不殘留，因為磁棒只帶走磁珠，轉移到下一個步驟相應的反應孔中，另外選擇磁棒法的提取儀器最好要功能更齊全的，比如可以加熱，每個加熱槽最好獨立溫控，這樣可以設置加熱、裂解、洗脫的不同溫度，另外很重要的一點是，帶動磁棒的電機要能帶動磁棒進行液體的快速混勻和攪拌，這樣才有利于自動化和有助于裂解和漂洗徹底。磁棒法的通量選擇最好是32通道，96通道的看似通量更高，但是有個很現實的問題，96個磁力棒在從一個板轉移至另外一個板的時候，磁力棒上面的液體中途滴下來怎么辦，它會滴到別的孔中造成污染，而32通道的磁力棒運行軌跡不經過其他樣本的上空，這樣不會交叉污染。圖2-1洛陽惠爾提取儀2.2.1.1磁棒磁棒是吸取磁珠的關鍵部件之一，磁棒的好壞決定在核酸提取過程中能否吸凈磁珠，也就是提取產量有無損失。洛陽惠爾生產的磁棒為永久性磁棒，永久不退磁，磁性高達10000GS以上，惠爾還可以根據客戶需求，定制生產各種不同規格的磁棒，應用于核酸提取儀中。圖2-2核酸提取儀-磁棒2.2.1.2界面全新安卓界面，手機一樣的智能，擺脫傳統電阻屏，采用高分辨率的電容屏，操作方便簡單，使實驗更加便捷。主操作界面顯示儀器各種功能，包括“運行”、“編輯”、“紫外燈”、“設置”四個選項。圖2-3核酸提取儀-界面2.2.1.3程序惠爾核酸提取儀采用最新最潮的安卓軟件，即.apk后綴，使用易語言進行編輯融合，使用簡單，操作便捷。圖2-4核酸提取儀-程序2.2.1.4其他儀器還備有以太網接口，方便實驗人員在使用過程中盡享網上沖浪；儀器還備有相應的usb接口，可以對實驗程序進行編輯和設置。當然儀器可以根據自己的需要進行.apk軟件的安裝，讓你在實驗之余盡享娛樂。圖2-5以太網接口及USB接口工作站提取儀工作站提取儀又叫抽吸法提取儀，顧名思義，抽吸法就是通過自動移液裝置來進行，通過自動移液裝置來加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液，加入漂洗液，磁珠吸附，抽走漂洗液，加入洗脫緩沖液。從步驟上好像沒什么問題，但是抽吸法最大的問題在于，為了在去除廢液的時候不抽走磁珠，移液器不能靠磁珠太近，以防磁珠連同廢液被抽掉，這樣每一次抽廢液的時候總有一小部分不能徹底的抽走，特別是磁鐵在底部的裝置，因為磁珠被磁鐵吸附在底部，所以移液器不能靠底部太近，這樣漂洗液就不能完全去除，殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵在側面的裝置殘留的液體會少些，但是洗脫的效率也不好，依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中，除非等上半小時以上，所以有些96自動核酸提取工作站，提取一輪的時間需要150分鐘，32磁棒法的同樣的時間可以提5輪了。圖2-6移液式工作站圖2-7移液工作圖2-8移液操作步驟核酸提取的步驟核酸提取儀上機提取核酸的步驟，有以下幾個步驟：程序設定、裝板子，添加樣本，運行，吸取核酸樣本，后續試驗。圖2-996孔深孔板程序設定：根據上機樣品的不同設置程序運行的各種參數，包括深孔板里各行體積，溫度、時間等參數的設定。添加樣本：針對不同樣本進行處理，并根據樣本的不同，添加合適的量運行：點運行開始運行吸取核酸樣品：吸取提取儀運行后的核酸，用于后續試驗。后續檢測：微量核酸測定儀測定濃度及比值，跑電泳進行檢測。國外核酸提取儀的巨頭公司美國貝克曼庫爾特有限公司作為體外檢測的一大巨頭，美國貝克曼庫爾特有限公司當然不會放過開發核酸提取裝備。該公司針對不同的工作量，提供了兩種可供選擇的提取儀器：SPRI-TE作為小型化的自動提取，提供高質量，高效率，可重復的磁珠核酸提取，專門為小實驗室設計。VidieraNsP則更傾向于血站，CDC，大型醫院實驗室等大客戶。貝克曼庫爾特是提供和QIAGEN簽約的extractionreagents，而且提取的核酸可以同LightCycler,，Cobas，Taqman，or96-wellThermowellPlate等聯用去做定量檢測的結果。雅培雅培--自動核酸提取裝置雅培雅培m2000系統是由雅培加拿大公司研發成功的，旨在用于醫學診斷實驗室樣品的自動提取，可以和m2000rt聯用。目前可以應用的檢測有RTHIV-1,RTHBV,RTHCV和RTCT/NG。該儀器主要由兩個機械臂和八個單道移液器構成，將樣品放入樣品管中后，儀器就可以自動工作，利用磁珠法進行核酸(DNA/RNA)提取。在樣品提取完成后，儀器還可以進行PCR試劑混合步驟?；旧蠜]有手工的操作步驟，只需要把樣本放入儀器，把PCR試劑放入儀器，最后把混合好的96孔板拿到m2000rt當中，進行后續的反應。羅氏羅氏--自動提取核酸裝置羅氏始創于1896年，總部位于瑞士巴塞爾，在制藥和診斷領域是世界領先的以研發為基礎，以創新驅動的健康事業公司之一。作為全球最大的生物技術公司，——藥品和診斷，提供從早期發現、預防、診斷到治療的創新產品與服務，從而提高了人類的健康水準和生活質量。羅氏是體外診斷領域、抗腫瘤藥品和移植藥品的全球領先者;是病毒學領域以及其他關鍵疾病領域如自身免疫性疾病、炎癥、代謝和中樞神經系統疾病的市場領導者。經過百余年發展，羅氏集團的業務已遍布世界150多個國家，共擁有約79,000名員工，并與包括羅氏控股的美國基因泰克、日本中外制藥在內的多個合作伙伴建立了研究與開發的業務聯盟。羅氏推出的MagNAPureLC2.0System可從各種生物樣本(全血、白細胞、外周血、單核細胞、培養細胞、組織、石蠟包埋組織切片等)中分離純化DNA、RNA和mRNA(PCR級純度)。QIAGENQIAGEN--自動提取核酸裝置德國第一大生技公司QIAGEN成立于1986年?，F有市值8億美元，全球員工數超過1500人，分布于10個國家。在開發分離及純化核酸(DNA與RNA)的產品及技術的上獨步全球。Qiagen提供的產品超過500類，包括各種試劑，耗材和自動化純化工作站。這些產品用于樣品采集，穩定，核酸或蛋白的分離，純化和檢測中，不僅廣泛的應用于科研領域的各個方面，在生物技術，制藥，法醫研究，食品安全檢測，畜牧業和分子診斷領域也得到了廣泛的應用。BioRobotMDxWorkstation是由QIAGEN提供的96通道自動化提取工作站，提取試劑采用QIAGEN特色的DNA/RNA提取試劑。它的產物有立即可用的程序，與市場上的可用的擴增產品可以聯用。Thermo賽默飛世爾科技進入中國發展已有30多年，在中國的總部設于上海，并在北京、廣州、香港、臺灣、成都、沈陽、西安、南京、武漢等地設立了分公司，員工人數超過3800名。我們的產品主要包括分析儀器、實驗室設備、試劑、耗材和軟件等，提供實驗室綜合解決方案，為各行各業的客戶服務。為了滿足中國市場的需求，現有8家工廠分別在上海、北京和蘇州運營。我們在全國共設立了6個應用開發中心，將世界級的前沿技術和產品帶給國內客戶，并提供應用開發與培訓等多項服務；位于上海的中國創新中心結合國內市場的需求和國外先進技術，研發適合中國的技術和產品；我們擁有遍布全國的維修服務網點和特別成立的中國技術培訓團隊，在全國有超過2000名專業人員直接為客戶提供服務。我們致力于幫助客戶使世界更健康、更清潔、更安全。ThermoScientific生命科學產品涵蓋細胞培養、液體處理、蛋白質研究、RNA干擾、核酸擴增與生物貯存、高內涵細胞篩選與分析等領域。Pierce、ABgene、Fermentas、Finnzymes、Cellomics和Bioimage等等，這些在生命科學領域耳熟能詳的名字都以統一的ThermoScientific品牌銷售。貝克曼美國貝克曼庫爾特有限公司開發和銷售儀器，生化，軟件以及能夠簡化和自動化實驗室處理的產品。我們的產品能夠支持在與疾病戰斗的各個階段的生物醫學分析－從前沿醫學研究到患者血液檢測。在2010年，公司銷售額為$37億，其中87.6%的銷售額來自臨床診斷市場，12.4%來自生物醫學研究市場。貝克曼庫爾特提供了一個廣泛的分離，檢測和分析生命組成部分的儀器業務。在醫院臨床實驗室中，我們可以提供實際意義上的各種常規血液檢測以及75%的其它檢測。我們的70%以上的產品都保持在市場高端位置上：血液學，常規生化系統，離心，毛細管電泳，蛋白質分析，生物機器人以及快速檢測。我們系統的客戶包括遍布全球的制藥和生物技術公司，大學，醫療學院，研究機構，醫院，醫師辦公室，以及診斷實驗室。貝克曼庫爾特目前在全球范圍內的實驗室中擁有大約275,000主要的儀器系統，操作系統售后服務，生化試劑盒以及服務合同等代表了大約總收入的64％。貝克曼重組于1988年，在從SmithKlineBeckman公司抽資脫離以后。在1998年，公司名稱更改為美國貝克曼庫爾特有限公司，反映出1997年與庫爾特公司的并購關系。ABI2006年7月20日美國應用生物系統中國分公司正式成立，注冊名為愛普拜斯應用生物系統貿易（上海）有限公司。中國公司的開業為美國應用生物系統公司在中國政府支持和指導下，積極參與中國生命科學和生物醫藥研究提供了一個更加直接和便利的業務平臺，也為中國的廣大用戶購買AB產品提供了直接人民幣結算的便利。美國應用生物系統中國公司的成立證明公司更加重視中國經濟持續發展的現實和中國生物醫藥和生命科學研究在全球業務中的重要地位。美國應用生物系統公司進入中國已達20年，與政府、企業客戶和廣大用戶建立了緊密的合作關系，公司將利用全球領先的技術和管理理念以及在中國的豐富經驗為中國的生命科學和生物醫藥研究提供更好更全面的本土化服務。隨著美國應用生物系統中國分公司的成立,新的產品展示與培訓實驗室也將于2007年2月正式投入運行。新實驗室將成為應用生物系統公司亞太區最大的產品展示與培訓實驗室示范實驗室。中國公司和新產品展示與培訓實驗室的建成將提升公司在整個中國地區的技術服務水平，提升公司在整個亞太區域的客戶服務水平。美國應用生物系統中國公司的獲批的經營范圍包括：生命科學設備儀器及其零部件；相關消耗品以及化學試劑的批發和代理；上述商品的進出口相關技術支持售后服務以及其他相關配套業務和商務咨詢服務。美國應用生物系統公司為基因分析蛋白質分析和藥物等小分子分析提供創新的技術和分析診斷工具，公司為生命科學研究的客戶提供包括儀器、試劑、軟件和技術服務在內的一體化科學解決方案。公司也為包括法醫、親子鑒定、生物安全、食品安全、質量控制和環境保護在內的應用市場客戶提供產品技術和解決方案。公司分為四大業務部門：分子生物和細胞產品部、蛋白和小分子分析產品部、應用市場產品部和技術服務產品部。公司的產品和技術主要包括：基因分析儀：3730XL/3730/3130XL/3130/310基因分析儀及測序試劑；SeqScape基因序列拼接與比較分析軟件；GeneMapper基因片段分析軟件；人類全部功能基因和線粒體DNA再測序試劑；基于3730XL/3730/3130XL的48重SNPLex高通量SNP分型技術。實時熒光定量PCR儀和基因芯片：7900/7500/7300型實時熒光定量PCR儀；340萬種基于TaqMan方法的人基因組SNP分型成套試劑盒，6萬多種TaqMancSNP和2400種藥物代謝酶TaqManSNP基因分型試劑盒；人、大鼠和小鼠基因60萬種TaqMan基因表達分析試劑盒。427種microRNATaqMan定量檢測試劑盒。高靈敏度1700型化學發光人全基因組表達譜芯片；TaqMan定量PCR基因表達芯片。PCR擴增儀，核酸提取和合成儀：9800/9700/2720PCR擴增儀及金牌Taq酶；6100型DNA/RNA自動提取儀；3400和3900型DNA合成儀。Ambion公司RNA研究產品：2006年1月美國應用生物系統公司成功并購RNA產品的專業公司Ambion公司，Ambion公司提供全套RNA研究的試劑：包括：RNA提取、RNA標記、RNA擴增、microRNA和RNA干擾研究。應用市場產品：為公安司法部門提供法醫和親子鑒定提供第一流的全套解決方案；為生物安全和食品安全提供包括禽流感和各種病原微生物檢測與分型的儀器試劑和軟件。串聯四極桿質譜和串聯四極桿線性離子阱質譜儀已廣泛應用于食品飲料的殘留分析及環境保護。蛋白質組研究：4800型TOF-TOF蛋白質組發現系統；QSTARElite高分辨液相串聯質譜儀：3200QTrap和4000QTrap串聯四極桿線性離子阱質譜儀；Voyager系列飛行時間質譜儀；TempoLC快速液相色譜系統；491蛋白質序列測定儀；433型多肽合成儀；公司專利的ICAT和iTRAQ技術可全景式進行兩種樣品內各種蛋白的定量分析和差異蛋白的結構鑒定。新藥開發：液相串聯四極桿質譜AP15000/4000/3200/2000LC/MS/MS；3200QTrap和4000QTrap串聯四極桿線性離子阱質譜儀可用于藥代動力學研究；FMAT8200激光共聚焦細胞檢測系統可用于抗體及藥物篩查。生物信息學與知識產品：全球著名的實驗室信息管理系統LIMS系統。AppliedBiosystems公司和CeleraGenomic公司共同組成了美國Applera公司。AppliedBiosystems公司為生命科學和實驗室儀器領域全球最大的生產廠家，2006年公司全球銷售額達19億美圓，公司在美國紐約證交所上市。AppliedBiosystems公司致力于發展科學技術的創新，AppliedBiosystems公司與廣大生命科學家一起不斷努力，為人類創造更好的醫療健康及生存環境。AppliedBiosystemshasdemonstrateditspositionasatechnologyleaderanddrivingforceinthechangingdynamicsofthelifesciencemarketplace.TheAppliedBiosystemsbusinessisfocusedonthefollowingmarkets:basicresearch,commercialresearch(pharmaceuticalandbiotechnology)andstandardizedtesting,includingforensichumanidentification,paternitytestingandfoodtesting.Thecompanyhasaninstalledbaseofapproximately180,000instrumentsystemsinnearly100countries.Basicresearchincludesworkatuniversity,governmentandothernon-profitinstitutionsthatfocusonuncoveringthebasiclawsofnatureandunderstandinghumandisease.PharmaceuticalandbiotechnologycompaniesuseAppliedBiosystems'productstodiscoveranddevelopnewdrugsmoreeffectively.Standardizedtestingcustomersrequiresystemsthatproducepreciseresultsfromahighvolumeofautomatedtests.FurtherinformationonhowAppliedBiosystemsservesthesecustomerscanbefoundinourpresskit.AppliedBiosystems(symbolABI)isoneofthetwotrackingstocksofAppleraCorporation.CeleraGenomics(symbolCRA)istheother,andbotharetradedontheNewYorkStockExchange.2008年6月12日——Invitrogen公司(NASDAQ:IVGN)和Applera公司今天宣布，雙方的董事會已批準了一項最終的合并協議，Invitrogen將收購Applera的ABI集團的所有股份，現金和股票交易的總值達67億美元。這一戰略合并將創造一個全球領先的生物技術試劑和系統的公司，合并后的公司將具有商業、運營和技術方面得天獨厚的優勢，收益將達35億美元，并將加速和驅動新的發現和商業應用。合并后的公司將集中在關鍵的市場增長領域中，并在遺傳分析、蛋白質組學、細胞生物學和細胞系統等領域具有特殊的技術能力。合并后的公司將命名為AppliedBiosystems,Inc.，公司總部在加州的Carlsbad。PromegaPromega公司是為生命科學產業提供創新型解決方案和技術支持的領導者。公司擁有2,000多種產品，致力于提高全球范圍內的科學家對基因組學、蛋白質組學、細胞分析、分子診斷和遺傳鑒定等領域的認知。公司成立于1978年，總部設在美國威斯康星州麥迪遜市，在15個國家設有分公司，在全球范圍內還有50多個經銷商。在生物技術這個年輕的領域中，普洛麥格公司進駐中國已有26年的歷史。這26年，普洛麥格與國內科學家共同見證了中國生命科學的飛速崛起，并將創新的技術、精良的產品和完美的服務不斷提供給中國生命科學用戶，與廣大代理商真誠合作和共同發展。隨著中國政府對基礎研究和知識創新的大量投入，國內生命科學領域高素質科研團隊不斷成熟和壯大，普洛麥格公司將會有更大的發展空間。未來普洛麥格公司將更有效地運用“為生命而精確設計”的工具和手段，協助推動中國生命科學研究的進步。國內核酸提取儀廠家及型號介紹臺灣圓點奈米技術股份有限公司臺灣圓點奈米技術股份有限公司為臺灣最大的磁性奈米粒子製造廠，我們專注於奈米磁性材料量產與其應用產品開發，本公司建置有一萬等級潔淨室廠房為符合ISO13485與GMP規範之專業醫療器材製造廠。我們開發與生產各種功能性磁性奈米粒子與磁珠式核酸提取試劑組或蛋白質純化磁珠，並且量產多種規格之自動化磁珠操作平臺。臺灣圓點提供分子檢驗前端之完整核酸提取自動化解決方案。圖3-1SmartLabAssist-32核酸提取儀SmartLabAssist-32適用於TANBead磁珠試劑產品，自動化、快速、簡便的操作平臺，搭配專用的96孔盤、單發萃取試劑組，可同時操作1-32個檢體，適於高通量的檢驗單位使用。以生物相容性的磁珠所研發的全自動核酸萃取試劑，是最先進萃取DNA與totalRNA的方式，有別於傳統離心方式的手動操作，使用本機只需加入檢體與試劑於96孔專用載盤或單發萃取試劑組中，選擇適當程式後執行即可，搭配不同種類的磁珠核酸試劑組，可以萃取動、植物組織，血液，體液，刑事檢體等樣品。洛陽惠爾納米科技有限公司洛陽惠爾納米科技有限公司是一家專業從事納米科技研究和納米材料制造的高科技企業。公司注冊資金1000萬元，總部位于河南鄭州高新區國家大學科技園，研發和生產基地位于河南洛陽高新區惠爾納米科技園，所處地理位置優越，交通便利，環境優雅。公司擁有較強的科研力量和完善的管理體系，擁有多項國家專利、科研技術成果和行業核心技術。公司下設有科技研發中心、應用工程中心、產品制造中心、市場銷售中心等四個主要機構。公司的主要研究方向有：1、納米磁性材料用于治療艾滋病、肝炎重癥和敗血病。2、表皮干細胞構建組織工程角膜上皮。3、水不溶和難溶藥物的納米水性化。4、納米中藥包被胰島素口服制劑。5、核酸提取試劑盒6、硬脂酸鹽系列產品水性化及其應用。7、硬脂酸產品水性化及其應用8、納米智能材料用于智能安全電器。9、各種改性納米粉體10、特種PCB油墨的應用11、納米材料用于鋼廠工藝用油、煉油助劑、燃料油添加。12、納米二氧化鈦用于太陽能電池板導電玻璃上的玻璃鍍膜公司擁有良好的經營環境和高素質的專業人才，有研究員2人、教授4人、高級會計師2人、博士后2人、高級工程師4人、工程師9人、助理工程師15人、研究生25人。大專以上學歷的職工占總體的98％以上。隨著各項科研技術成果的成熟轉化及公司綜合力量的不斷提高，公司將快速穩健向前發展，未來前景廣闊！圖3-1HR-003核酸提取儀產品性能★處理體積：20μl-1000μl★樣品通量：1-32★磁珠回收率：大于95%★孔板類型：96孔深孔板★提取孔間差：CV小于3%★磁棒：32根★加熱溫度：可選配加熱模塊，實現裂解加熱（室溫至+120℃）與洗脫加熱（室溫至+120℃）★震蕩混合：多模式多檔可調★試劑種類：磁珠法開放式平臺★操作界面：全中文屏幕彩色液晶+觸控操作★內部程序：可儲存>500組程序★程序管理：新建、編輯、刪除模式程序★紫外照射：有★提取時間：30-60分鐘/次（由所用試劑決定）主要結構由機殼，機械運動機構，紫外殺菌機構，加熱和溫控機構，控制系統組成。適用范圍廣泛用于常規科研、基因組學、食品安全、疾病診斷、法醫鑒定等領域。使用本儀器僅需加入樣品及磁珠法全自動核酸提取試劑于96孔板中，選擇或編輯適當程序后執行即可。搭配不同種類的磁珠法核酸提取試劑，可以快速提取動植物組織、血液、體液、刑事檢材等樣品中的DNA和RNA。西安天隆科技有限公司天隆科技是一家以市場為先導、產學研科技研發為基礎、追求自主品牌的創新驅動型高科技企業，公司針對醫學診斷、食品安全、病原體檢測和生物學醫學科研等市場需求，一直專注分子診斷、核酸檢測、POCT等檢驗儀器、醫療器械及體外診斷試劑的研發、生產和銷售。公司獲得了世界500強排名57位的SK跨國企業集團的投資，經過十多年的努力，天隆已發展為位于西安國家經濟技術開發區占地40畝的西安天隆科技有限公司和位于蘇州新加坡工業園區納米城3800平米的蘇州天隆生物科技有限公司兩部分。圖3-1N