實訓十九附子理中丸中烏頭堿的檢查一、實訓目的掌握中藥制劑中烏頭堿限量檢查的一般操作步驟和技能。理解烏頭堿限量檢查的原理。二、檢驗依據附子理中丸藥品標準［《中國藥典》2005年版（一部）正文部分484頁］【處方】附子（制）100g黨參200g白術（炒）150g干姜100g甘草100g【檢查】烏頭堿限量取本品水蜜丸適量，研碎，取25g,或取大蜜丸適量，剪碎，取36g，加氨試液4ml，拌勻，放置2小時，加乙醚60ml，振搖1小時，放置24小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用無水乙醇溶解使成1ml，作為供試品溶液。取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液12ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-二乙胺（14:4:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上出現的斑點應小于對照品的斑點，或不出現斑點。三、 檢驗原理本品處方五味藥中有附子，附子中含有多種生物堿，其中烏頭堿型生物堿中C、C的羥基分別與乙酸、苯甲酸成雙酯型（烏頭堿型）生物堿存在，如烏頭堿、14 8美沙烏頭堿等。這種雙酯型生物堿親酯性強，毒性大，因此附子需要經過炮制加工降低其毒性。為保證用藥安全，《中國藥典》采用薄層色譜法對烏頭堿進行限量檢查。四、 儀器與試劑硅膠G薄層板、展開槽、微升毛細管或微量注射器、分析天平、水浴鍋、震蕩器、量瓶等。烏頭堿對照品（中國藥品生物制品檢定所）、附子理中丸、乙醚、無水乙醇、苯、乙酸乙酯、二乙胺、氨試液、稀碘化鉍鉀試液等。五、 實驗步驟和內容1?供試品溶液制備取水蜜丸適量，研碎，取25g，加氨試液4ml，拌勻，放置2小時，加乙醚60ml，振搖1小時，放置24小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用無水乙醇溶解使成1ml，作為供試品溶液。2.對照品溶液制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。3?點樣精密吸取供試品溶液12ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上。4?展開在層析槽中放置展開劑苯-乙酸乙酯-二乙胺(14:4:1)適量，預飽和20?30分鐘，放置已點樣的薄層板，展開8?15cm，取出，晾干。5.顯色向已晾干的薄層板上噴以稀碘化鉍鉀試液顯色，對比供試品色譜與對照品色譜相應位置上出現的斑點大小。【操作要點】本品取樣25g，要遵循“隨機、均勻”的原則，應從整批藥品中抽取一定數量的樣本，破碎、混合均勻后，再從中稱取試驗所需數量的樣品。供試品、烏頭堿對照品的稱取要用分析天平精密稱定。供試品溶液制備的過程中需要蒸干濾液，必須在通風櫥中水浴加熱回流濃縮，回收乙醚，不能接觸明火。供試品溶液與對照品溶液的制備時，要用適當容量的容量瓶定容。需使用市售薄層G板，用前需要在110°C，活化30分鐘。使供試品與對照品的點樣點大小一致或相近。展開時，需要預飽和20?30分鐘，并在層析缸口涂凡士林以密閉，以克服邊緣效應。顯色劑噴灑時要均勻。六、檢驗結論根據試驗記錄和結果，填寫檢驗報告，對本品檢查做出結論。七、實訓思考制備供試品溶液時，樣品中為什么先加氨試液攪拌放置？在薄層展開前，在層析缸口涂凡士林的目的是什么？3?通過比較供試品色譜與對照品色譜相應位置上出現的斑點大小的依據是什么？八、實訓測試附子理中丸中烏頭堿限量檢查實訓測試表（百分計）填寫檢驗報告10檢品名稱廠家檢品規格批號送檢單位檢驗項目檢驗方法檢驗結論：檢驗人： 復核人： 檢驗單位蓋章年月曰回答問題制備供