一、潮霉素B潮霉素B（HygromycinB）是由吸水鏈霉菌（Streptomyceshygroscopicis）代謝產生的一種氨基糖昔類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。大腸桿菌（Escherichiacoli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418（GeneticinTM，Zeocin?和BlasticidinS聯合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅蟲功能。（使用方法儲存液的配制（50mg/ml）稱取0.5g潮霉素B加入10ml無菌去離子水內使其完全溶解。先用5ml無菌去離子水預濕潤0.22口m針頭式過濾器，除盡水。之后使用此濾器過濾潮霉素B溶液，除菌后分裝成單次使用的小量（如1ml）放到-20°C凍存，約1年穩定。常用篩選濃度注意：潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000口g/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（killcurve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。一般而言，哺乳動物細胞50-500口g/mL；細菌/植物細胞20-200口g/mL；真菌300-1000口g/mL。殺滅曲線的建立注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素最低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37C，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。2）根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50,100,250,500,750,1000“g/mL。先用去離子水按照1:10的比例將母液稀釋到5mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。）二、G418G418（G-418即G-418sulfate,也稱Geneticin,分子式為C20H40N4O10.2H2SO4，分子量為692.71g/mole）是一種氨基糖類抗生素，其結構與新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似，它通過影響80S核糖體功能而阻斷蛋白質合成，對原核和真核等細胞都有毒性，包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞，也包括原生動物和蠕蟲。是穩定轉染最常用的選擇試劑。當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方后，則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA,從而獲得抗性產物氨基糖苷磷酸轉移酶的高效表達，使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養基中生長。G418的這一選擇特性，已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面得以廣泛應用。G418和篩選篩選之前由于每種細胞對G418的敏感性不同，而且不同的廠家生產的相同濃度的G418的活性不盡相同，所以在篩選之前，一定要確定G418的最佳篩選濃度。具體如下：將細胞稀釋到1000個細胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418濃度范圍內進行篩選，選擇出在10~14天內使細胞全部死亡的最低G418濃度來進行下一步的篩選試驗。由于每種細胞對G418的敏感性不同，一般變動在100ug/ml?1000ug/ml范圍。而且不同的廠家生產的相同濃度的G418的活性不盡相同，所以在篩選之前，一定要確定你的細胞對這一批G418的最佳篩選濃度。盡管如此，特性明確的細胞系G418的最佳用量還是穩定的。《分子克隆》給出了幾個常用細胞系所需G418的最佳用量：細胞系或機體G418濃度（ug/ml）中國倉鼠卵巢細胞700?800Madin-Darby犬腎細胞500人上皮A431細胞400猿CV-1細胞500盤基網柄菌屬10?35植物10酵母125?500三、氨芐青霉素Ampicillin氨茉青霉素Ampicillin是半合成的盤尼西林（penicillin青霉素）衍生物，是一種廣譜的抗生素。P-內酰胺酶可以使它失活，因此要用Amp的時候可考慮使用P-內酰胺酶抑制劑。用于抗革蘭氏陽性菌的時候，它的作用類似于茉青霉素benzylpenicillin；而用于抗革蘭氏陰性菌的時候其作用類似于氯霉素chloramphenicol和四環素tetracyclines。在大腸桿菌中它抑制細胞壁合成。也可用于增強魯米諾（luminol）化學發光。Structure（結構式）：MolecularFormula(分子式)：Ci6Hi8N3O4SNaMolecularWeight(分子量)：371.4CAS#69-52-3Synonyms(別名)：D[-]-a-Aminobenzylpenicillin;6-[D(-)-a-Aminophenylacetamido]penicillanicacidPhysicalDescription(物理性質)：Whitetooff-whitepowderAmpicillinrapidlylosesactivitywhenstoredaboveapHof7.0.Optimalconditionsforstorageareat+4°C,pH3.8to5.Attheseconditionsthesolutionswillretainmorethan90%activityforapproximatelyoneweek.Buffercompositionsmayalsoeffectstability:OptimallyTrisbuffersshouldhaveapHofapproximately5,citratebuffersat7,acetatebuffersat6.Autoclavingsolutionsofampicillinwilldestroyactivity.Solutionscanbesterilizedbyfiltration(0.22umfilter)andstoredfrozen(-20°Corbelow).Frozensolutionscanbestoredforupto3months.pKaValues(at25°C):pKa=2.5(-COOH)pKa=7.3(-NH2)SuggestedEffectiveConcentrations(建議有效濃度)：100mg/literforbothgrampositiveandgramnegativebacteria.Itistypicallystableinmediaat37°Cforapproximately3days.Solubility(溶解性):Solubleinwater(50mg/ml);solublein1