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文檔簡介

吲哚乙酸氧化酶活力的測定P144熟悉運用比色法測定吲哚乙酸氧化酶活力的方法，并掌握測定酶活力的基本要求。實驗目的實驗原理吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活力。植物體內吲哚乙酸氧化酶活力的大小，對調節體內吲哚乙酸的水平起著重要的作用，從而影響植物的生長。酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法測定。IAA+FeCl3→紅色螯合物綠豆芽的下胚軸。實驗材料上胚軸:子葉到第1片真葉之間的部分下胚軸:子葉與根之間的一部分下胚軸取材部位②處理：在試管中加入：MnCl21ml+2，4-二氯酚1ml+IAA2ml+酶液1ml+磷酸緩沖液5ml

對照：在試管中加入：MnCl21ml+2,4-二氯酚1ml+IAA2ml+磷酸緩沖液6ml①稱取1g下胚軸，置于研缽中，加入預冷的磷酸緩沖液(pH=6.1)1ml，研磨成勻漿，再用9ml分2次沖洗，總體積為10ml。離心4000rpm10min，所得的上清夜即為粗酶液。IAA含量的測定方法步驟標準曲線的繪制。IAA氧化酶需要兩個輔助因子：一元酚和二價離子Mn計算時間(h)IAA氧化酶活力=(μg·IAA/h·ml)對照—處理(μg/ml)

×10保溫：30℃溫箱中30min；顯色：三支試管中分別加入處理液、對照液、蒸餾水各2ml后，再分別加入試劑A8ml，搖勻，40℃黑暗處30min(15-20min)；用分光光度計在530nm波長處測A值；查標準曲線；結果總結培養基接種數(瓶*片）最早出愈時間（d）出愈率（%）污染率（%）愈傷生長情況MS+2,4-D1.013*31897.437.69

切口處較多出愈，黃色顆粒狀，偶見灰白色愈傷

MS+2,4-D1.0+6-BA0.412*3171000切口及與培養基接觸處生長愈傷，黃色透明，較濕潤

MS+2,4-D1.0+6-BA1.012*3161000切口及與培養基接觸處生長愈傷，黃白色，濕潤

不同培養基對懷地黃愈傷組織生長情況的影響結果總結I型愈傷組織Ⅱ型愈傷組織Ⅲ型愈傷組織培養基（mg/L)接種數（瓶*株）出芽時間(d)平均葉片數（個/株）增值系數MS+NAA0.0213*32022MS+NAA0.02+6-BA0.212*3

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