酶切位點設計和選擇_第1頁
酶切位點設計和選擇_第2頁
酶切位點設計和選擇_第3頁
酶切位點設計和選擇_第4頁
酶切位點設計和選擇_第5頁
已閱讀5頁，還剩5頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

付費下載

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

PCR擴增出靶基因的時候在核（一）（二）兩個位點應是載體上的，所連接片斷上沒有這兩個位點，且距離不能太近，往往造成兩個promega的闡明書上說，最佳隔四個。尚有一種狀況是：不能有堿基的交叉，例如兩個酶切點最佳不要是同尾酶（切下來的殘基不要互補最佳使用雙酶切有共同buffer最佳使用較慣用的酶（如hind3，bamh1，ecor1等TmTmTmDNADNATmTmTm（除非你的酶切位點也與模板互補Tm過低，是由于他們誤把保護堿TmPCR反映的諸多困難。因此，設計引5'Tm55度以上（58以Tm護堿基，這樣的引物普通都是可用的，即使有小的問題，也能夠挽回。Tm溫度高的引物就33'2+4的公式。Tm90，不涉及酶切位點。引物公司給你發(fā)的單子是涉及酶切位點29、33個堿基，去17、2170多度，實際用的只5055度擴的成果也差不多。其它有關Tm值的計算，PP5.0進行評價的，需要考慮的參數涉及：basenumberGC%、Tm、hairpin、dimer、falsepriming、crossdimer。退普通退火溫度為Tm-5度，退火，Tm的話,2.有人的經驗加入酶切位點的引物能夠和未加入時使用相有關引物二聚體primer或是其它設計引物的軟件進行計算一下另外，所加的三個核苷酸的保護序列通過盡心設計有時也能夠減少二聚體的△G20bp28bp左右了。而我們在設)PCR產物連接到載體。53AT。先用軟件設計出適宜的引物，引物的應盡量避免在引物3’端的第一位堿基是A（容易錯配）引物3’端最佳堿基的選擇是最少隔上3個堿基，PCR產物很難被酶切，因此就會造成連接5‘5‘端加5其3（NEB網站1B采用了一系列含識別序列（這里用的是寡核苷酸！！而不是末端帶酶切位點的肽鏈！（例如在多接頭上切割位點很靠近時ANEB就提供了一種表，有關鏈長和切割效otI10259％的效率，204個堿基，也沒見出現問題。2將線性載體與對應內切酶（10units/μg）60分鐘，隨即進（EcoRI酶切位點NNNGNNC3PCR4個額NotI7100(2)BluescriptSK-Spe4100(1)BluescriptSK-Ksp198(2)BluescriptSKXba 酶切割率220Not00NsiPac0000Pme0000Pst0000Pvu000SacSac00Sal00GScaSma00Spe00Sph000StuXba00Xho00Xma00酶切割率220Acc000000Afl00AscAvaBamHBgl00BssH0000BstE0Bst

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論