血小板血型系統及檢測技術1編輯ppt教學內容血小板血型抗原及其抗體血小板血型檢測技術血小板血型的臨床應用適合型血小板輸注2編輯ppt教學目的重點掌握：血小板輸注無效掌握：血小板血型檢測技術熟悉：血小板血型抗原及其抗體血小板血型的臨床應用了解：適合型血小板輸注3編輯ppt一、血小板血型抗原

及其抗體4編輯ppt〔一〕血小板血型抗原定義:指用同種免疫抗體檢測出的血小板外表抗原分類：血小板相關抗原血小板特異性抗原5編輯ppt1.

血小板相關抗原

(platelet-associatedantigen)定義：血小板外表存在的與其他細胞或組織共有的抗原分類：紅細胞血型系統相關抗原(ABO等〕組織相容性抗原〔HLA〕6編輯ppt血小板上的紅細胞血型抗原存在ABO、Lewis、I和P抗原缺失Rh、Duffy、Kell、Kidd和Lutheran系統的抗原7編輯ppt血小板HLA系統血型抗原

Chromosome6DPDQDRBCAClassIIClassI存在HLA-A和B位點的抗原HLA-C位點的抗原未發現HLA-DP、DQ和DR等位點抗原。但經細胞因子刺激，可產生HLA-DR抗原

8編輯ppt2.血小板特異性抗原即人類血小板抗原〔humanplateletantigen，HPA〕血小板特有的，其他組織細胞沒有表現血小板獨特的遺傳多態性均存在于血小板膜糖蛋白〔GP〕上9編輯ppt10編輯pptHPA的命名1990年國際血液學標準化委員會(ICSH)/國際輸血協會〔ISBT〕血小板血清學研討會對血小板抗原系統進行國際命名2003年國際輸血協會〔ISBT〕和國際血栓和止血協會〔ISTH〕建立的血小板命名委員會〔PNC〕11編輯ppt命名規定在系統前冠以HPA按發現順序用數字編號只有在2個對偶抗原全被檢測出來后，才能被稱為系統，對偶抗原按其在人群中頻率由高到低，用字母命名，高的為a，低的為b尚未發現對偶抗原的，給予暫時命名，在等位基因數字后加后綴w表示12編輯ppt13編輯ppt〔二〕血小板抗體產生機理：機體對血小板外表或相關抗原免疫臨床分類：血循環里的游離抗體結合于血小板上的抗體(PAIgG)血型學分類：血小板同種抗體自身抗體見于：血小板輸注治療無效同種免疫血小板減少癥自身免疫血小板減少癥藥物、病毒、細菌引起的血小板減少癥14編輯ppt血小板外表存在眾多復雜抗原，因此反復大量輸注血小板的患者約50%以上產生血小板同種抗體據報道HLA抗體占多數，約80%左右HPA抗體單獨存在的頻率較低〔2%-3%〕HPA抗體與HLA抗體共存〔18%〕左右必須首先識別并去除血清中存在的HLA抗體，才能分析血小板抗體的特異性〔二〕血小板抗體15編輯ppt鑒別有無HLA抗體存在的方法淋巴細胞毒試驗混合淋巴細胞培養除去血小板外表HLA抗原方法氯喹或酸溶液在0℃處理血小板16編輯ppt二、血小板血型檢測技術血清學檢測分子生物學檢測

17編輯ppt〔一〕血清學技術血小板免疫熒光試驗簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗改進的抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗流式細胞儀檢測技術微柱凝膠血小板定型試驗當HLA類抗原在血小板定型時出現強表達時，要用氯喹或酸進行預處理，去除血小板上的HLA抗原18編輯ppt1.血小板免疫熒光試驗

(plateletimmunofluorescencetest,PIFT)19編輯ppt原理用多聚甲醛〔PFA〕或氯喹預處理的血小板，參加異硫氰酸熒光標記的抗血小板抗體，通過流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測血小板抗原抗體結合情況20編輯ppt21編輯ppt臨床應用同種異體抗體與血小板的反響活性檢測血小板配型22編輯ppt方法學評價優點熒光信號只評估血小板，防止了由細胞碎片引起的非特異性反響多特異性的抗球蛋白試劑可以識別IgG、IgA和IgM抗體最可靠的方法之一缺點對反響不敏感。血小板至少要結合1000個IgG分子才能得到陽性結果23編輯ppt2.簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗

〔SimplifiedSensitizedErythrocytePlateletSerologyAssay,SSEPA〕24編輯ppt原理將血小板抗原固定在U型孔壁上，與被檢血清反響后洗凈，以抗IgG〔或抗IgM)指示細胞反響結果如果血小板上結合了血小板抗體，那么致敏在指示細胞上的抗IgG〔抗IgM〕與血小板抗體結合，指示細胞向孔底移動被組織，廣泛覆蓋在固定的血小板單層上，為陽性結果假設血小板上無抗體，那么指示細胞向孔底移動不受阻，聚集在孔底中央，呈扣狀，為陰性結果25編輯ppt陽性結果陰性結果26編輯ppt結果圖示27編輯ppt方法直接測定法：測定血小板外表結合的血小板抗體間接測定法：測定血清內的血小板抗體交叉配血試驗：選擇配合的血小板供體28編輯ppt臨床應用血小板抗體鑒定血小板血型研究開展母嬰血小板血型及多種血液病的研究適合性血小板輸注29編輯ppt方法學評價簡單、微量，重復性、特異性和敏感性均較理想應用范圍廣，可用于檢測血小板抗原抗體以及交叉配合試驗；可開展大量樣本的檢測工作及研究工作固相化的血小板及指示細胞能長期保存備用不需要特殊的儀器設備，易于推廣30編輯ppt3.單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗

(Monoclonalantibody-specificimmobilizationofplateletantigensassay,MAIPA)31編輯ppt原理在血小板上先結合人的同種抗體，然后再結合鼠抗人血小板抗體，裂解血小板后，把裂解產物移至包被的羊抗鼠IgG微孔板內，通過辣根過氧化物酶標記羊抗人IgG檢測人的血小板同種抗體32編輯ppt單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗33編輯ppt方法學評價優點：敏感性強。可檢測出被污染的抗體、微量抗原〔HPA-5〕、低頻率抗原。缺點：在未知抗原檢測時必須使用一組單克隆抗體，而又不能對所有糖蛋白具有活性如果人抗體與單克隆抗體和同一個抗原決定簇反響，就會引起假陰性結果34編輯ppt4.改進的抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗

(ModifiedantigencaptureELISA,MACE)35編輯ppt原理血小板與抗體致敏，將形成的抗原-抗體復合物分別參加包被有抗GPIb、GPIIb、GPIIIa、GPIX、HLA等鼠抗人單克隆抗體的微孔內，再參加酶標羊抗人IgG底物顯色，終止反響后測405nm吸光度36編輯ppt方法學評價及應用優點：特異性較高缺點：非特異的物質和某些血清中的IgG結合非常牢固應用：對于已經去除了HPA-1a的大量標本的定型常使用競爭性ELISA技術37編輯ppt5.流式細胞儀檢測技術

(Flowcytometry,FCM)38編輯ppt原理免疫熒光標記技術，抗原抗體結合同一激光光源激發得到特異熒光色細胞體積、結構、熒光種類及性質等多種參數分析39編輯pptFCM檢測血小板相關抗體40編輯ppt6.微柱凝膠血小板定型試驗

〔microcolumegeltestforplatelettyping〕41編輯ppt原理向微柱凝膠中依次參加待檢血清、血小板、指示紅細胞陽性結果：假設待檢血清中存在血小板抗體，那么形成血小板-血小板抗體-抗IgG-指示紅細胞四位一體的免疫復合物不能通過凝膠柱陰性結果：假設待檢血清無血小板抗體，那么不能形成免疫復合物，指示紅細胞離心后沉于柱底42編輯ppt43編輯ppt44編輯ppt45編輯ppt46編輯ppt47編輯ppt方法學評價方法快速、敏感、操作簡單操作標準化〔試劑、設備、工作程序〕標本試劑用量少結果判斷客觀準確結果保存時間長〔數天或數周〕平安：減少醫源性傳播48編輯ppt〔二〕分子生物學檢測22個HPA抗原中除HPA-14bw基因外，其它所有HPA基因多態性都表現為SNP〔單核苷酸多態性〕，因此檢測SNP的方法根本上適用于HPA基因分型共同特點：以聚合酶鏈反響〔polymerasechainreaction，PCR〕為根底，所不同的只是在于PCR引物設計以及檢測PCR產物的方法49編輯ppt方法PCR-SSP:首選，最簡單常用，快速經濟PCR-RFLP:繁瑣，無法對HPA-4基因分型PCR-ASO:繁瑣，不太容易判斷結果SSCP：不適合常規HPA檢查DNA序列分析法:操作復雜，本錢較高50編輯ppt51編輯ppt〔三〕血清學檢測與分子生物學檢測的關系血清學檢測簡單、快速本錢低主要用于血小板抗體檢測和交叉試驗血型抗原的血清學定型是基因分型的前提52編輯ppt三、血清學檢測與分子生物學檢測的關系分子生物學檢測結果準確、可靠不需要特異性抗體的血小板基因組DNA的來源：可為尿沉淀物、口腔黏膜細胞和羊水細胞主要用于血小板血型抗原分型53編輯ppt三、血小板血型的臨床應用血小板輸注無效輸血后紫癜新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜特發性血小板減少性紫癜54編輯ppt〔一〕血小板輸注無效

(platelettransfusionrefractoriness,PTR)55編輯ppt1.

定義指患者在輸注適宜劑量的血小板后沒有產生“適當的反響〞，即連續兩次輸注足量隨機供者血小板后，沒有到達適宜的校正血小板計數增加值〔CCI〕，臨床出血表現亦未見改善長期依靠血小板支持治療這是臨床輸血中頗為棘手的問題56編輯ppt2.

原因免疫因素〔17.5%〕：HLA抗體、HPA抗體、ABO抗體、自身抗體、藥物抗體、循環免疫復合物等非免疫因素〔67.5%〕：發熱、敗血癥、脾腫大、骨髓移植、DIC、靜注抗菌素等；血小板質量非免疫+免疫因素〔15%〕57編輯ppt3.

判定指標臨床:出血趨勢不減輕，或出現輸血性紫癜，出血加重血小板計數較輸注前不僅不增高，有時還會下降校正血小板計數增加值(correctedcountincrement,CCI)CCI=(輸注后血小板計數-輸注前血小板計數)×體外表積(m2)輸入血小板總數〔×1011／L〕PTR判定標準:1小時CCI﹤7.5×109／L20-24小時CCI﹤4.5×109／L血小板回收率(percentageplateletrecovery,PPR)PPR=(輸注后血小板數－輸注前血小板數)×血容量(L)輸入血小板總數×2/3PTR判定標準：1小時PPR﹤30%20-24小時PPR﹤20%58編輯ppt4.

預防措施選用單一供者血小板〔機釆血小板〕自身血小板輸注去除血小板中白細胞：WBC＜5×106/L去除血小板外表抗原：用氯喹或枸櫞酸解離技術去除HLA抗原紫外線照射滅活抗原提呈細胞〔antigenpresentingcell,APC〕功能59編輯ppt5.

處理流程首先要考慮血小板質量問題，可輸注ABO同型的非庫存血小板，以排除ABO系統的抗體或血小板質量因素↓假設有發熱、感染、DIC等導致血小板消耗增加的因素存在，積極治療原發病，并增加輸注劑量↓假設有同種抗體存在，那么挑選HLA、HPA相合的供者血小板，或使用激素、免疫抑制劑或靜脈注射免疫球蛋白↓假設病人持續輸注血小板效果不佳而又找不到明確的原因，那么應考慮藥物性抗體的存在，停用或換用相關藥物60編輯ppt6.

處理

供者選擇：ABO和Rh相合HLA相合HPA相合大量靜脈注射免疫球蛋白〔IVIG〕血漿置換免疫抑制劑抗纖溶藥物等61編輯ppt病因處理免疫性因素

HLA同種抗體輸注HLA抗原配合的血小板或交叉配合試驗相合的血小板血小板特異性抗體輸注血小板特異性抗原（HPA）配合的血小板或交叉配合試驗相合的血小板自身抗體IVIG、皮質類固醇、脾切除術藥物（如肝素）停用誘發藥物非免疫性因素脾腫大治療病因藥物（如兩性霉素B）若可能時，停用誘發藥物消耗增加治療病因敗血癥治療病因PTR的病因及處理62編輯ppt〔二〕輸血后紫癜

(post-transfusionpurpura,PTP)63編輯ppt1.

定義及臨床表現

定義指輸注全血或血小板后引起的急性、暫時性的同種免疫性血小板減少綜合征

臨床表現在輸血后1周左右突然發生皮膚瘀點、瘀斑和黏膜出血，嚴重者有內臟和顱內出血大多數的患者是女性，有輸血或妊娠史64編輯ppt2.

病因出現血小板特異性同種抗體常見的是抗HPA-1a通常發生于HPA-1a陰性患者，歐美多見65編輯ppt3.

預防和治療措施血小板抗體篩選血小板交叉配血試驗，選擇配合型的血小板供體輸注免疫抑制劑血漿置換大量靜脈注射免疫球蛋白66編輯ppt〔三〕新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜

(neonatalalloimmunethrombocytopenicpurpura,NAITP)67編輯ppt1.

定義妊娠期間由于母嬰間血小板血型不合，胎兒血小板抗原刺激母體產生血小板相關抗體，通過胎盤進入胎兒體內，導致胎兒和新生兒血小板減少常見，病死率較高，約13%68編輯ppt69編輯ppt

內臟和中樞神經系統出血腦水腫出生時有嚴重而廣泛的瘀點和瘀斑出生時正常，2-3天后出現血小板顯著減少2.臨床病癥70編輯ppt3.

實驗室檢查血小板抗原的鑒定血小板抗體的檢查指標HDNNAITP母細胞表面缺乏常見抗原紅細胞抗原鑒定血小板抗原鑒定抗體特異性紅細胞抗體篩選血小板抗體篩選嬰兒血細胞包被有IgG直接抗人球蛋白試驗血小板相關Ig檢測低頻率抗原抗體母血清+父紅細胞母血清+父血小板71編輯ppt治療患者輸入母體中同種抗體無不良反響性的血小板對患者進行換血治療給新生兒靜脈內注射免疫球蛋白預防隨時監測母親血清中血小板抗體效價高時可對母親作血漿置換治療，降低母親血漿中抗體的含量4.

治療及預防72編輯ppt〔四〕特發性血小板減少性紫癜

(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)73編輯ppt1.

定義及臨床表現定義：由于患者自身免疫系統失衡，體內產生針對自身血小板相關抗原的抗體，導致血小板大量破壞，