解百憂口服液對(duì)抑郁大鼠行為及中樞神經(jīng)遞質(zhì)的影響

解百友口服是在古代專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)的一種中藥新制劑。它由牡丹、柴胡和其他藥物組成。具有平肝健脾解郁的功效，對(duì)治療高血壓和療效有顯著影響。本文采用多種不同的應(yīng)激方法建立了穩(wěn)定的大鼠抑郁模型,并觀察解百憂口服液對(duì)抑郁模型大鼠行為及中樞神經(jīng)遞質(zhì)的影響,探討解百憂口服液的作用機(jī)理,為臨床合理用藥提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)材料1質(zhì)量合格健康SD大鼠(清潔級(jí))48只,♀♂各半,體重180g~210g,由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,合格證:滬動(dòng)合證字(152)號(hào)。對(duì)照組每籠飼養(yǎng)4只,其余各組每籠飼養(yǎng)1只,各組大鼠均在相同條件下,自由飲水、攝食,保持自然光照。大鼠專(zhuān)用飼料由阜陽(yáng)穎泉康樂(lè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料廠提供。2明片、藥房有限責(zé)任解百憂口服液由安徽省藥物研究所自制,批號(hào):20000302,濃度3.15g/mL,設(shè)5、10、15g/kg三個(gè)劑量組(分別相當(dāng)于臨床用量的2.5、5.0、7.5倍);鹽酸氯米帕明片,天津藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號(hào):961013;重酒石酸去甲腎上腺素(NE)、鹽酸多巴胺(DA)、5-羥色胺硫酸肌酐(5-HT)、5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)標(biāo)準(zhǔn)品均由中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司提供,進(jìn)口分裝,瑞士Fluka產(chǎn)品;L-半胱氨酸鹽酸鹽,批號(hào):990508,中國(guó)上海曹揚(yáng)第二中學(xué)化工廠產(chǎn)品;鄰苯二甲醛(OPT),批號(hào):W981215;高碘酸鈉,批號(hào):F990712;碘化鈉,批號(hào):F000317;抗壞血酸,批號(hào):F980611,均由中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司提供,其他均為市售分析純?cè)噭?ysd-4g實(shí)驗(yàn)儀大鼠行為測(cè)定儀及刺激儀,本所自制;850-熒光分光光度計(jì),日本日立公司產(chǎn)品(由中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)結(jié)構(gòu)中心提供);YSD-4G藥理生理多用實(shí)驗(yàn)儀,蚌埠無(wú)線電二廠產(chǎn)品;HG101-電熱鼓風(fēng)干燥箱,南京實(shí)驗(yàn)儀器廠產(chǎn)品;80-2沉淀離心機(jī),上海手術(shù)器械廠產(chǎn)品;玻璃勻漿器等。實(shí)驗(yàn)方法1單次給藥及多次給藥選用Open-Field法評(píng)分相近的大鼠48只,隨機(jī)分為6組,即生理鹽水組、模型組、氯米帕明組、解百憂低、中、高劑量組,除生理鹽水組外,各組共接受21d各種不同的應(yīng)激,包括電擊足底(36V交流電,每隔1min刺激1次,每次刺激10s,共30次)、冰水游泳(4℃,5min)、熱應(yīng)激(45℃,5min)、搖晃(1速率次/s,15min)、夾尾(1min)、禁水(24h)、禁食(48h)和晝夜顛倒等刺激,平均每種刺激各2次,按上述次序連續(xù)刺激2輪,第一輪刺激結(jié)束開(kāi)始給藥,解百憂低、中、高劑量組分別給予解百憂口服液1mL/100g(5、10、15g/kg),氯米帕明組給予氯米帕明溶液1mL/100g(20mg/kg),生理鹽水組及模型組分別給予等量的生理鹽水。分別在實(shí)驗(yàn)的第1、7、14和21d測(cè)定動(dòng)物的體重變化,第7、14和21d測(cè)定動(dòng)物的行為變化,第22d測(cè)定糖水消耗量,第23d測(cè)定中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量。2動(dòng)物雙足活動(dòng)Open-Field法測(cè)定行為。本實(shí)驗(yàn)所用敞箱為圓柱形,高40cm,直徑80cm,周壁為黑色,底面按扇形分成面積相等的25塊。以動(dòng)物穿越底面塊數(shù)為水平活動(dòng)(crossing)得分,動(dòng)物一般靠邊行走,穿越1格為1次,如動(dòng)物按直徑方向行走,一般以每10cm為1次;以直立次數(shù)為垂直活動(dòng)(rearing)得分,動(dòng)物雙足離開(kāi)底面為垂直活動(dòng),無(wú)論動(dòng)物站立多長(zhǎng)時(shí)間直至動(dòng)物雙足放下為1次活動(dòng)。每只動(dòng)物每次僅進(jìn)行一次測(cè)定,每次測(cè)定時(shí)間為3min。3糖的消耗實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行糖水消耗實(shí)驗(yàn)時(shí)所有動(dòng)物均單籠飼養(yǎng),每只動(dòng)物加1%蔗糖溶液130mL,同時(shí)所有動(dòng)物進(jìn)行禁食,計(jì)算動(dòng)物24h飲用1%蔗糖溶液的量。4酸性正丁醇對(duì)腦組織勻漿的制備動(dòng)物連續(xù)給藥12d,于末次給藥30min~60min后,斷頭處死大鼠,去顱骨,完全暴露腦組織,在枕骨大孔處迅速剪斷延髓,取出大腦組織,除去大腦皮層,放于硫酸紙上稱(chēng)重。迅速將腦組織放入裝有3mL預(yù)冷的酸性正丁醇溶液中,退除紙重,求出腦組織凈重。按1∶30左右比例補(bǔ)充酸性正丁醇至7mL,制備組織勻漿。將組織勻漿倒入帶塞離心管中,振蕩5min,在3000r/min下離心10min,取適量的酸性正丁醇上清液按文獻(xiàn)方法進(jìn)行提取和測(cè)定,NE測(cè)定時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)為290nm,發(fā)射波長(zhǎng)為374nm,DA測(cè)定時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)為326nm,發(fā)射波長(zhǎng)為381nm,5-HT及5-HTAA測(cè)定時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)為360nm,發(fā)射波長(zhǎng)為500nm,計(jì)算出各組動(dòng)物中樞單胺神經(jīng)遞質(zhì)的含量。結(jié)果1第14d和21d模型組體重下降通過(guò)21d各種不同方法的應(yīng)激,各組與生理鹽水組相比較,在第7d動(dòng)物體重的增加已有降低趨勢(shì),第14d和21d模型組體重下降具有顯著和極顯著意義(P<0.05~0.01),說(shuō)明應(yīng)激可使動(dòng)物體重的增加明顯下降。服用解百憂口服液和氯米帕明后,對(duì)動(dòng)物因應(yīng)激造成的體重增加降低無(wú)明顯的改善作用(結(jié)果見(jiàn)表1)。2應(yīng)激對(duì)抑郁動(dòng)物活動(dòng)的影響經(jīng)過(guò)21d各種不同方法的應(yīng)激后,我們通過(guò)Open-Field法測(cè)定動(dòng)物行為的水平活動(dòng)(crossing)得分和垂直活動(dòng)(rearing)得分,與生理鹽水組相比較,在第7d動(dòng)物兩種活動(dòng)次數(shù)已有減少趨勢(shì),第14d和第21d兩種活動(dòng)次數(shù)均顯著減少(P<0.05~0.01)。說(shuō)明應(yīng)激可使動(dòng)物的活動(dòng)明顯減少,產(chǎn)生抑郁癥狀。我們用解百憂口服液和氯米帕明對(duì)抑郁動(dòng)物進(jìn)行治療,結(jié)果在第21d(即給藥后第10d),解百憂能顯著增加抑郁動(dòng)物的活動(dòng)次數(shù)(P<0.05~P<0.01),與氯米帕明具有同等的藥理作用,但無(wú)明顯量效關(guān)系(結(jié)果見(jiàn)表2)。動(dòng)物從第12d開(kāi)始給藥,第14d時(shí)動(dòng)物給藥僅3d。3低p>0.1學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)通過(guò)各種不同方法的應(yīng)激后,與生理鹽水組相比較,模型組動(dòng)物的糖水消耗量明顯降低(P<0.01)。服用解百憂口服液和氯米帕明后,可明顯增加因應(yīng)激造成的動(dòng)物糖水消耗量的下降,解百憂低、中、高劑量組與模型組比較P<0.05~0.01,但無(wú)明顯的量效關(guān)系,氯米帕明組與模型組相比較P<0.01(結(jié)果見(jiàn)表3)。4應(yīng)激對(duì)動(dòng)物顯神經(jīng)遞質(zhì)的影響經(jīng)過(guò)21d各種不同方法的應(yīng)激后,用熒光光度計(jì)法測(cè)定動(dòng)物中樞神經(jīng)遞質(zhì)的含量,與生理鹽水組相比較,結(jié)果模型組動(dòng)物大腦中樞中NE、DA、5-HT、5-HIAA的含量均明顯降低(P<0.01),說(shuō)明應(yīng)激已造成動(dòng)物中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化,差異具有顯著意義。動(dòng)物服用解百憂口服液和氯米帕明后,可使模型動(dòng)物中樞中NE含量明顯升高(P<0.05),5-HT、5-HIAA的含量也明顯升高(P<0.05~P<0.01),DA的含量有升高趨勢(shì),但無(wú)顯著差異(P>0.05),解百憂口服液與氯米帕明相比具有同等的藥理作用,但無(wú)明顯的量效關(guān)系(結(jié)果見(jiàn)表4)。抑郁癥模型動(dòng)物活性成分的檢測(cè)結(jié)果我們綜合運(yùn)用應(yīng)激和分養(yǎng)兩種經(jīng)典方法,利用長(zhǎng)期不可預(yù)見(jiàn)性的中等強(qiáng)度應(yīng)激,造成分養(yǎng)動(dòng)物抑郁狀態(tài),抑郁動(dòng)物在行為上表現(xiàn)為:在規(guī)定時(shí)間內(nèi)的水平行活動(dòng)和垂直活動(dòng)次數(shù)減少,體重增加減輕,糖水消耗量降低,水平活動(dòng)反映動(dòng)物的活動(dòng)度,垂直活動(dòng)反映動(dòng)物對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度,糖水消耗量反映動(dòng)物的獎(jiǎng)賞反應(yīng)程度。本模型動(dòng)物表現(xiàn)出來(lái)的抑郁狀態(tài)、興趣喪失、快感缺乏與抑郁癥臨床診斷中的精神運(yùn)動(dòng)改變、興趣或快感的喪失有一定程度的相似性。同時(shí),通過(guò)對(duì)動(dòng)物中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)抑郁動(dòng)物中樞神經(jīng)遞質(zhì)NE、5-HT、5-HIAA含量降低,支持經(jīng)典的抑郁癥發(fā)病的5-HT能與NE能神經(jīng)低下假說(shuō)。因此,我們認(rèn)為該模型是較為理想的抑郁動(dòng)物模型。抑郁癥屬中醫(yī)“郁證”范疇。其病理機(jī)制為氣機(jī)失調(diào),內(nèi)氣及血,導(dǎo)致肝氣郁結(jié),心神失養(yǎng)。在治療方面歷代醫(yī)家多主張治郁先治氣,調(diào)氣先治肝。現(xiàn)代醫(yī)家認(rèn)為,抑郁癥發(fā)病與5-HT、NE、DA、Ach、GABA等遞質(zhì)密切相關(guān),尤其是5-HT和NE,目前較公認(rèn)的抑郁癥發(fā)病的生化機(jī)制仍是單胺假說(shuō),主要是5-HT能低下假說(shuō)和NE能低下假說(shuō)。解百憂口服液具有疏肝健脾解郁之功,本方重用白芍直入肝經(jīng),以益其匱乏之氣,自然血生而火熄;白術(shù)、當(dāng)歸健土以生血,柴胡解郁,