替米考星腸溶微丸的制備及體外釋藥特性研究

季美沙是泰樂菌素處理產物的半合成。它對預防和治療由胸膜肺炎、巴氏桿菌和桿菌引起的肺炎、鳥類感染和乳頭生成的乳腺炎非常有效。由于替米考星在酸性環境中不穩定,目前國內外上市的替米考星劑型僅有替米考星預混劑、注射液等［２］,這些劑型不僅成本高,而且給藥不方便。微丸屬于口服多劑量劑型,不僅給藥方便,而且藥物的體內吸收速度均勻且個體間生物利用度差異較小［３］。為了解決替米考星在酸性環境中不穩定［４］口服在胃中易被破壞以及藥物味苦［１］的問題,本實驗將替米考星制備成腸溶微丸制劑,并對其進行了表征和初步評價。1替米考星微丸的制備與釋放度測定1.1材料替米考星和花生殼粉(河南官渡獸藥制造有限公司)、微晶纖維素(安徽山河藥輔料股份有限公司)、藥用淀粉和藥用糊精(曲阜市藥用輔料有限公司)、十二烷基硫酸鈉(山東聊城安信藥用輔料有限公司)、歐巴代?腸溶薄膜包衣預混劑(上海卡樂康包衣技術有限公司)。1.2儀器設備E-50擠出滾圓設備(重慶英格造粒包衣技術有限公司)、MiniDPL0.2型流化床(重慶精工機械)、RCZ-8B溶出儀(天大天發科技有限公司)、NikonEclipse80i型熒光顯微鏡(日本Nikon公司)、UV-2450紫外分光光度計(日本島津)、Nicolet380-紅外分光光度計(美國賽默飛世爾科技)、DSC-200F3差示掃描量熱儀(德國耐馳科學儀器貿易上海有限公司)。1.3制備方法1.3.1微丸的制備按處方量稱取藥物與輔料,過100目篩,混合均勻,以1%羥丙基甲基纖維素為粘合劑制軟材,用孔徑1.0mm的篩網以30r/min的擠出速度擠出,擠出后在滾圓機內以800r/min的速度滾轉1.5min,微丸于60℃流化床干燥1h,篩分后取16~24目的微丸作為合格的微丸。1.3.2微丸的包衣用80%的乙醇配制濃度為10%的腸溶包衣液,磁力攪拌1h,使其充分溶解,過100目篩備用。將合格的微丸置于流化床中,設置進風溫度為70℃,物料溫度為60℃。風機頻率25Hz,霧化壓力0.06MPa,蠕動泵流速2mL/min,包衣結束后,固化30min［５］,得替米考星腸溶微丸。1.4替米考星含量測定紫外分光光度計掃描替米考星溶液,結果顯示其在292nm波長處有最大吸收。在此波長下測系列濃度的供試品溶液和各供試品溶液的吸光度［６］。以樣品吸光度(A)對濃度(C)進行線性回歸,得直線方程A=0.0559C-0.0045(R２=0.9999)。結果顯示替米考星濃度在6~45μg/mL范圍內與吸光度有良好的線性關系,可用于替米考星的含量測定。取替米考星微丸適量,研細,精密稱取適量(約相當于替米考星25mg),置于100mL容量瓶中,加水至使其完全溶解,定容至刻度。量取10mL稀釋至100mL,作為供試品溶液。同法稱取原料藥適量,制得25μg/mL的替米考星作為對照品溶液,在292nm的波長下,分別測定吸光度,計算得到替米考星微丸相對含藥量為103.00%。1.5替米考星微丸釋放度的測定參照2010版《中國藥典》附錄XD釋放度測定法第二法［７］,以900mL0.lmol/L鹽酸溶液作為溶出介質,設置溫度(37士0.5)℃,各取1g微丸投入溶出杯中,采用槳法,轉速100r/min,分別于20、40、60、80、100、120min取樣,取樣量2mL,10mL容量瓶定容。結束后,棄去酸液,立即加入pH6.8的磷酸鈉緩沖溶液繼續運轉,分別于130、140、150、160min取樣,取1mL溶出液至10mL容量瓶定容,紫外測定吸光度,計算藥物的累積釋放量［８］。1.6替米考星微丸的確證將藥物、藥物與輔料的物理混合物和替米考星腸溶微丸進行紅外掃描,比較其紅外光譜圖,可以判斷藥物在微丸中的變化,由替米考星主要官能團的特征峰的變化,進一步確定藥物在制劑中的存在狀態。另外,差示掃描量熱儀分別測3組物質的熔點,根據其熔點的變化,可以推斷藥物在制備的過程中藥物存在形式的變化。2替米考星微丸的表征根據預實驗結果和文獻報道［９］,影響微丸成型的因素主要是微晶纖維素的處方量,而包衣增重對微丸釋放度影響較大。因此,本文就這兩個因素進行考察,結果如下。2.1不同處方量的微晶纖維素對微丸成型性的影響保持其他因素不變,通過改變填充劑花生殼粉和微晶纖維素的量來制備微丸。結果如圖1所示,微晶纖維素的處方量分別是15%、25%、30%時,在電子顯微鏡下觀察,4倍鏡下微丸的形狀分別如圖1中A、B、C所示;40倍鏡下微丸的表面分別如圖1中D、E、F所示。2.2包衣增重量對微丸釋放度的影響腸溶微丸的溶出度主要受到腸溶包衣材料性質的影響,腸溶包衣材料的厚度在一定程度上決定著微丸的釋放速率［１０］。固定處方中原輔料的量,考察不同包衣增重(5%、10%、15%)對藥物釋放的影響。由圖2可知,在酸性介質中,包衣增重不同的微丸2h后釋放度分別達到67.46%、9.98%、5.97%。在pH6.8的磷酸緩沖鹽介質中,最終累積釋放量分別達到94.00%、90.78%、69.60%。2.3替米考星微丸的確證2.3.1紅外分析替米考星、替米考星與輔料的物理混合物、替米考星微丸紅外光譜見圖3所示。根據參考文獻［１１］其中在特征區3450cm－１,指紋區1200cm－１是叔醇羥基的特征峰,2960cm－１、2920cm－１是甲基、亞甲基的伸縮振動峰,1650cm－１是叔胺中碳氮鍵的伸縮振動峰,1050~1100cm－１是六元單氧環中碳氧單鍵伸縮振動峰。2.3.2差示掃描量熱分析替米考星、替米考星與輔料的物理混合物、替米考星微丸DSC圖譜見圖4所示。替米考星為單峰,熔點為101.2℃;替米考星和輔料物理混合物的熔點在105.1℃;替米考星微丸在100℃沒有固定的熔點。3不同藥物釋放量釋放的比較本實驗考察微晶纖維素用量與替米考星微丸成型性的關系,15%的微晶纖維素成型性最差,滾圓后成不規則狀,表面粗糙;30%的微晶纖維素成型性相對較好,微丸粒徑也比較均勻,表面光滑。結果表明微晶纖維素用量越大,微丸越圓整、成型性越好、收率也越高。包衣膜增重對替米考星釋放的影響顯著,且隨著包衣增重的增加,藥物在酸性釋放介質中的釋放度逐漸降低,隨著時間的延長,在緩沖鹽釋放介質中包衣膜出現不同程度的溶解,導致釋放速率增大。包衣增重5%的處方在酸中釋放較快,2h內藥物釋放量達到60%以上,140min后在磷酸鹽中釋放量達到90%以上;包衣增重15%的處方在酸中釋放緩慢,在磷酸鹽中釋放不足70%;包衣增重10%的處方在酸中2h內釋放不超過10%,在緩沖鹽介質釋放實驗中,藥物達到腸溶的效果,160min后藥物釋放達到90%以上。按照腸溶制劑的要求［７］,腸溶制劑在酸中釋放量不超過10%,在磷酸鹽中釋放不低于70%。因此包衣增重10%的微丸在腸道中溶解釋放的效果最好。擠出滾圓法是制備球形微丸一種比較理想的方法,其設備操作簡單,生產能力強、成本低,制得的含藥微丸載藥量高［１２］。紅外圖譜結果顯示:A、B在3450cm－１的位置出現強的-OH伸縮振動峰,但C中此特征峰消失,說明藥物中的-OH被掩蓋起來,同時在1050~1100cm－１處,A、B中有明顯的藥物中六元單氧環的特征峰,但在C中此官能團的特征峰消失,初步證明了替米考星制成微丸后是以固體分散體的形成存在［１３］。結合差示掃描量熱分析實驗結果,替米考星微丸圖C與物理混合物圖B相比,峰形發生比較大的變化,其中100℃左右的峰完全消失,也沒有形成新峰,進一步證實替米考星以無定型固體共沉淀物的形式形成固體分