豬下丘腦內開花樣內orexina的分布

1998年發現的一種神經遺產（也稱為殘留素和殘留因子）是1998年發現的一種神經遺產。它可以調節動物的喂食、睡眠和覺醒周期、神經內政部、生殖和內臟活動。開胃素有開胃素A(33肽)和開胃素B(28肽)兩種,它們都是前開胃素原(propreorexin)的蛋白水解產物。人、豬、犬、牛和鼠的開胃素A的氨基酸序列一致;豬和犬的開胃素B序列一致,與人的開胃素B只有1個氨基酸差異。開胃素通過其受體發揮作用。開胃素受體有兩種亞型:OX1R和OX2R,屬寡受體家族的G蛋白偶聯受體(GPCR)。關于開胃素及其受體在人、小鼠、大鼠、綿羊和雞的分布都有報道。開胃素在腦內主要分布于下丘腦的外側區,在某些外周器官(胃腸道、胰、睪丸、垂體、松果體和腎上腺等)也存在。開胃素受體的分布更為廣泛。但關于豬開胃素及其受體的分布定位僅見Lin等少量報道,未見詳細的研究報道。本試驗用免疫組織化學方法研究了開胃素A在豬下丘腦各核團內的分布,為探討開胃素的作用部位及其生理功能提供形態學資料。1材料和方法1.1疫組化染色試劑盒和aec顯色試劑1月齡健康蘇鐘仔豬5頭,購自江蘇省農業科學院種豬場。即用型SABC免疫組化染色試劑盒和AEC顯色試劑均購自武漢博士德生物工程有限公司。開胃素A(C-19)抗血清(SC-8070),由SantaCruzBiotechnologyInc生產,購自上海吉泰科技有限公司。1.2實驗方法1.2.1mlk-1的麻醉實驗動物腹腔注射20g·L-1氨基甲酸乙酯(5mL·kg-1)麻醉,經心臟灌注用0.1mol·L-1PBS配制的4g·L-1多聚甲醛固定。固定后取下丘腦,置同一固定液中后固定4～6h。1.2.2冰激凌切片固定好的組織塊經0.1mol·L-1PBS充分洗滌后,置于用0.1mol·L-1PBS配制的20g·L-1蔗糖溶液,在4℃待其下沉后做冰凍切片。片厚20μm,貼于經多聚賴氨酸處理的載玻片上,室溫干燥后置于-20℃冰箱備用。1.2.3不同的免疫組化切片經37℃恒溫箱干燥過夜后,按以下程序進行操作:①切片經蒸餾水洗滌5min;②用新鮮配制的0.5%H2O2/甲醇室溫處理30min以滅活內源性過氧化物酶,蒸餾水洗滌3次;③正常兔血清封閉(室溫,30min);④加一抗:山羊開胃素A抗血清(37℃,置濕盒中)孵育1.5h;⑤加二抗:生物素標記的二抗(37℃)孵育30min;⑥SABC溶液中(37℃)作用30min;⑦顯色:AEC顯色10～30min。對照實驗:用0.1mol·L-1PBS代替一抗,其余步驟不變。1.3觀察用Olympus雙目顯微鏡對切片進行觀察,并選取典型部位顯微拍照。2免疫陽性細胞分布實驗結果表明,開胃素A免疫陽性神經元胞體分布于豬下丘腦的視前內側區、室周核、室旁核、視上核、背內側核、穹隆周核、乳頭體核、前區、外側區和后區等部位,以下丘腦外側區、乳頭體核和視上核出現的免疫陽性神經元最多,以室周核的最少(圖1、圖2-1～圖2-8)。陽性神經元胞體形態多樣,胞漿內有紅色顆粒沉著,胞核內無紅色顆粒沉著。對照實驗結果為陰性(圖2-9)。免疫陽性細胞詳細分布情況如下:下丘腦外側區出現大量的開胃素A免疫陽性神經元(圖2-1),并且主要分布于穹隆周圍區。神經元呈三角形、卵圓形或紡錘狀,突起比較明顯,以中、小型細胞為主。視上核有大量開胃素A免疫陽性神經元分布,但神經元免疫反應較弱,細胞形態多樣,多屬小型細胞,分布比較密集。室旁核開胃素A免疫陽性神經元分布較為密集(圖2-2),胞體較大,多為卵圓形,突起比較明顯。乳頭體出現大量的開胃素A免疫陽性神經元,其內側核和外側核分布相似,但神經元免疫反應較弱。室周核出現少量開胃素A免疫陽性神經元(圖2-3),細胞中等大小。視前內側區陽性神經元數量較少,散在分布(圖2-4),神經元胞體較小,無明顯的突起。未定帶免疫陽性神經元多呈紡錘形,胞體中等大小(圖2-5)。下丘腦后區免疫陽性神經元分布比較稀疏(圖2-6),胞體多為圓形或卵圓形。下丘腦前區免疫陽性神經元胞體較大,數量不多。背內側核免疫陽性神經元中等大小,為單極、雙極和多極神經元(圖2-7)。穹隆周核免疫陽性神經元圍繞穹隆分布,數目不多,呈紡錘狀或三角形(圖2-8)。3評論員群體在煥腦之外區的生殖調控研究發現在人、鼠、犬、貓和猴腦內,開胃素免疫陽性神經元主要位于下丘腦。綿羊的開胃素免疫陽性神經元分布于下丘腦背內側核、下丘腦外側區、未定帶和穹隆周核,少數細胞位于下丘腦后區。在大鼠腦內,開胃素神經元胞體僅見于下丘腦,雙側對稱地位于下丘腦外側區,可能主要在穹隆周區。散在的開胃素神經元胞體也見于正中隆起、下丘腦后部、背側部、背內側部、弓狀核和subincertal核。本研究結果與在嚙齒類和綿羊上獲得的結果有諸多相似之處,但也存在一些差異,如開胃素A在豬視前內側區、室周核、室旁核、視上核、乳頭體核和下丘腦前區等部位分布,文獻中未見報道。實驗結果的異同,既說明開胃素在種系發生上具有保守性,也反映出種間存在差異。下丘腦腹內側核、室旁核和外側下丘腦區屬于下丘腦食欲調節網絡的“網絡中