原子吸收光譜法測定全血中微量元素

人體含有各種必要的、不需要的和有害的微金屬元素。準確檢測這些微量元素,有利于控制人體體液的離子平衡,保障身體健康,指導人們的膳食結構。檢測人體內微量元素的樣本可以是唾液、體液、尿液、血液、頭發和組織器官。血液樣本能全面反映人體內微量元素含量情況,取樣方便,已成為檢測人體內微量元素最主要的樣本。微波消解樣品快速、完全、元素無揮發性損失、玷污小,目前在分析領域越來越受到重視和應用。本文采用微波消解全血樣,消解液定容至一定體積后直接上機火焰法測銅、鋅;消解液稀釋20倍后上機火焰法測鐵、鎂;消解液用25g/L鑭溶液稀釋5倍后上機火焰法測鈣;消解液直接上機石墨爐法測鉛;消解液稀釋10倍后上機石墨爐法測鎘,用標準曲線法定量。結果滿意。1材料和方法1.1銅的氧化預處理AA6800原子吸收光譜儀(日本島津),附ASC6100自動進樣器;MK-Ⅱ型壓力自控微波溶樣系統(上海新科微波技術研究所);旋轉振蕩器;1000mlGILSON微量移液器。鑭溶液(25g/L):稱取氧化鑭25g,加75ml鹽酸于1L容量瓶中,用去離子水定容。磷酸二氫銨(20g/L):稱取磷酸二氫銨20g,以水溶解稀釋至1000ml。必要時用氨水(1+1)和鹽酸(1+1)調節pH值,用二硫腙去除磷酸二氫銨液中殘留的鉛。鐵、鋅、鈣、鎂、銅、鉛和鎘標準儲備液(1.00mg/ml):由北京標準物質研究所購得。硝酸(1%,v/v)。水為重蒸去離子水,硝酸為工藝超純,其它試劑為優級純。1.2顯示工作條件1.2.1火焰法測定見表1。1.2.2石墨法測定1.2.2.峰面積積分測定測定波長283.3nm,燈電流10mA,光譜通帶1.0nm,氬氣作保護氣,峰面積積分測定,氘燈扣背景。石墨爐升溫程序:干燥110℃,斜坡升溫20s,保持10s;灰化850℃,斜坡升溫25s,保持15s;原子化1550℃,瞬間升溫,保持2s;去殘2100℃,瞬間升溫,保持2s。原子化時停氣。1.2.2.峰面積積分測定測定波長228.8nm,燈電流8mA,光譜通帶1.0nm,氬氣作保護氣,峰面積積分測定,氘燈扣背景。石墨爐升溫程序:干燥110℃,斜坡升溫20s,保持5s;灰化700℃,斜坡升溫20s,保持13s;原子化1500℃,瞬間升溫,保持2s;去殘2100℃,瞬間升溫,保持2s。原子化時停氣。1.3標準溶液的制備用標準儲備液逐級稀釋成標準使用液系列,見表2。1.4微波消解和標準測定全血樣(抽靜脈血,用60g/LEDTA-2Na抗凝,置于冰箱中)于旋轉振蕩器上振蕩混勻,用微量移液器吸取血樣1000μl置于聚四氟乙烯內膽中,加入5mlHNO3,混勻,先放入電熱預消解器上進行預消解,再加2mlH2O2混勻,蓋上內蓋進行微波消解1檔3min,2檔3min。消解至無色,于預消解器上脫硝后自然冷卻,用硝酸定容至10ml。同時做空白試驗。取此消解液直接上機火焰法測Cu、Zn,標準曲線法定量。取此消解液直接上機石墨爐法測Pb,自動進樣器進樣,進樣量:10μl消解液+5μl磷酸二氫銨,標準曲線法定量。此消解液用硝酸溶液稀釋10倍后石墨爐法測Cd,進樣量:10μl消解液+5μl磷酸二氫銨,標準曲線法定量。取此消解液0.50ml,用硝酸溶液稀釋定容至10ml,上機火焰法測Fe、Mg,標準曲線法定量。取此消解液1.00ml,用鑭溶液稀釋定容至5ml,上機火焰法測Ca,標準曲線法定量。2結果與討論2.1消解溶劑的選擇試驗用HNO3、H2SO4、HClO4、HCl分別與H2O2混合作為消解混合酸。結果表明,僅HCl消解效果不佳。考慮到H2SO4介質存在對原子吸收測定影響很大,而HClO4直接與有機物接觸有爆炸的危險,本法選擇HNO3和H2O2混合作為消解用酸。試驗表明,5mlHNO3+2mlH2O2微波1檔3min,2檔3min能很好地消解全血樣。2.2條件選擇2.2.1灰化溫度的影響由于全血樣組成復雜,不加基體改進劑直接測定干擾很大,測定結果很不理想。鉛、鎘均屬于易揮發元素,如不加基體改進劑,灰化溫度鉛高于450℃,鎘高于350℃損失會很大。加入基體改進劑磷酸二氫銨20g/L后,鉛的灰化溫度可提高到850℃,鎘的灰化溫度可提高到700℃而元素不損失。在此灰化溫度下,樣品中大部分干擾成分被消除。試驗表明,樣品消解液進樣量10μl,20g/L磷酸二氫銨進樣量5μl,吸光度最大且穩定而背景吸收最小。2.2.2擴大線性范圍鋅鎂在火焰原子吸收靈敏線上測量靈敏度很高,以至于線性范圍太窄,影響測量。旋轉燃燒頭150以適當降低儀器靈敏度擴大線性范圍。這樣,鋅在0～1.6μg/ml,鎂在0～0.80μg/ml成線性關系。2.2.3劑能生成磷酸介質中存在的磷酸根等雜質干擾鈣的測定,釋放劑鑭能與其生成更穩定的磷酸鑭而有效地把鈣釋放出來。試驗表明,用25g/L鑭溶液稀釋血樣消解液能很好地消除干擾成分對鈣的測定。2.2.4譜線干擾的測定鐵的靈敏線附近譜線很復雜,容易出現光譜干擾,適當減小狹縫可濾去一些不必要的譜線以提高測定的準確度。本法測鐵選擇光譜通帶為0.2nm,結果理想。2.3建立待測組線性回歸以標準溶液的吸光度(Y)對相應的濃度(X)進行線性回歸,得7種待測組分的回歸方程及相關系數。方法檢出限以空白液重復測量所得標準偏差的3倍為準,方法檢出限乘以稀釋倍數便得原始血樣的最低檢測濃度,見表3。2.4標準曲線的消解取同一血樣3份,在其中2份中分別加入一定量的待測元素標準液,按