rp-hplc法測(cè)定青海藥丸中2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷的含量

七寶美贊丸是衛(wèi)生部藥物標(biāo)準(zhǔn)（中藥成方制劑第一卷）中提取的。它是由三七罐、當(dāng)歸、補(bǔ)骨脂、枸杞、兔蠶絲籽、椰子和牛膝制成的中藥丸劑。具有益肝、腎、精血的功效。處方選用《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版(一部)規(guī)定使用的蓼科植物何首烏PolygonummulitifoorumThunb.的干燥塊根入藥,其主要成分為2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用高效液相色譜法建立了七寶美髯丸中2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法,現(xiàn)報(bào)道如下。1藥品、試劑與儀器島津LC-10AVP高效液相色譜儀和SPD-10AV紫外檢測(cè)器(日本島津)。乙腈為色譜純,其他試藥均為分析純。2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):110844-200404,供含量測(cè)定用),七寶美髯丸(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部提供,規(guī)格:每袋9g,批號(hào):050901,050902,050903,060201,060202,060203)。2方法和結(jié)果2.1流動(dòng)相、柱溫色譜柱:鉆石ODS柱(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(25:75);流速:1.0mL·min-1;柱溫:室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):320nm。2.2溶液的制備2.2.1,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷的合成取2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品10mg,精密稱定,用50%乙醇溶解并定容至100mL量瓶中,搖勻,即得(每1mL溶液中含2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷0.1mg)。2.2.2超聲處理法取研細(xì)的供試品3g,精密稱定,置于50mL量瓶,加水20mL,超聲處理(功率250W,頻率20kHz)20min,再加乙醇20mL,超聲處理(功率250W,頻率20kHz)10min,取出,放冷,加乙醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),取濾液定容至50mL即得。2.2.3陰性樣品溶液的制備取缺何首烏的陰性樣品3g,同法制成陰性樣品溶液。2.3,4’-四羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷峰的計(jì)算分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算,應(yīng)不低于3000;2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰與其他組分峰基線分離,R>1.5,保留時(shí)間為15.7min,陰性樣品溶液在2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰相應(yīng)位置上無(wú)吸收。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液(濃度為0.1084mg·mL-1)2,5,10,15,20,25μL注入液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=1.049×106X-15313(r=0.9994)。進(jìn)樣量在0.217～2.710μg,進(jìn)樣量和積分面積間線性關(guān)系良好。2.5’-四羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷的檢測(cè)精密吸取供試品溶液10μL,每隔1h進(jìn)樣測(cè)定1次,考查6次,2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積平均值1215906,RSD=0.82%。精密吸取對(duì)照品溶液10μL,每隔2h進(jìn)樣測(cè)定一次,考查6次,積分面積值平均值是1133488,RSD=0.30%。表明供試品溶液和對(duì)照品溶液穩(wěn)定性較好。2.6羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷的合成取同一批樣品(批號(hào):050901),平行試驗(yàn)6次,每份吸取供試液10μL,注入液相色譜儀,按前述方法進(jìn)樣測(cè)定,2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的平均含量2.033mg·g-1,RSD=1.4%。2.7羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷峰面積精密吸取供試品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次,2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積平均值1226435,RSD=1.5%。2.8加標(biāo)回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量(2.033mg·g-1)樣品9份,分別加入對(duì)照品溶液(濃度為0.252mg·mL-1)6.0,6.0,6.0,8.0,8.0,8.0,10.0,10.0,10.0mL,按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,精密吸取10μL,按上述方法測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。2.9羥基二苯乙烯-2-o--d-葡萄糖苷的測(cè)定取樣品6批,分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,精密量取10μL進(jìn)樣;按外標(biāo)峰面積法(對(duì)照品溶液中2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的濃度是0.126mg·mL-1,進(jìn)樣量10μL)測(cè)定并計(jì)算樣品中2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。結(jié)果批號(hào)為050901,050902,050903,060201,060202,060203的6批樣品,平均含量分別為2.033,2.156,2.462,1.903,1.866,2.315mg·g-1。3張量的確定—討論含何首烏的制劑多以大黃素、大黃酚等成分為指標(biāo)進(jìn)行定量,但大黃素、大黃酚不是何首烏的專屬性成分。《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版(一部)“何首烏”項(xiàng)下選用2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為指標(biāo)進(jìn)行何首烏的含量測(cè)定,專屬性較強(qiáng)。筆者據(jù)此選用2,3,5,4’