第第頁甘草中甘草酸含量測定論文【關鍵詞】甘草

甘草為豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch)、脹果甘草（glycyrrhizainflatabat）或光果甘草(glycyrrhizaglabral)的干燥根及根莖，始載于《本經》，藥用歷史悠久。其功能補脾益氣、潤肺止咳、緩急止痛、清熱解毒、緩和藥性。主要含有甘草酸及甘草苷類成分，其中甘草酸為現代藥理應用研究證實具有抗纖維化、抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強免疫功能等作用［1］。目前針對甘草的內在質量控制，主要圍繞甘草酸成分進行定性、定量一類的檢查。2005版《中國藥典》收載了RP-HPLC三元等度洗脫法測定甘草酸的方法，規定甘草酸含量不得低于2%［2］。本實驗依托2005版《中國藥典》一部甘草酸含量測定（附錄VID）項下操作主線，采用RP-HPLC法測定甘草酸的含量，方法簡便、快速，重現性好，結果穩定，用于甘草酸的檢測專屬性強，

1儀器與試劑

1.1儀器

Agilend1100系列液相色譜儀、四元泵、在線真空脫氣、DAD檢測器、化學工作站、1200型自動進樣器。

1.2試劑

甘草酸單銨鹽（monoam0niumglycyrrhitinate）對照品（中國藥品生物制品檢定所）；甘草(glycyrrhizainflatabat)樣品，產地新疆（華東醫藥股份有限公司）；甲醇（色譜純）、醋酸銨（分析純）、冰醋酸（分析純）、水（雙蒸水）。

2實驗方法與結果

2.1色譜條件

美國ZORBAXExundC18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）為固定相；甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67∶33∶1）為流動相；檢測波長250nm；流速1ml·min-1；柱溫為室溫。柱效以甘草酸計，理論塔板數不應低于2000。結果被測成分于7min內即可出完，三元等度洗脫全程為0～20min。記錄的色譜圖結果見圖1，2。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取80℃干燥至恒重的甘草酸單銨鹽0.1g對照品，置100ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，使成每ml含有甘草酸單銨鹽1mg對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取甘草，研細（過3號篩），置烘箱內80℃干燥至恒重，精密稱取0.3g，置100ml量瓶中，加流動相約45ml，超聲處理（功率250W，頻率20KH2）30min，取出，放冷，加流動相至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.4測定方法

精密吸取對照品溶液及供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液色譜圖中甘草酸的峰面積（3次平均）外標法計算甘草中甘草酸的含量（%，W/W）。

2.5線性關系

精密吸取對照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml于100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10μl，記錄峰面積。以進樣量（μg）為橫坐標（X），峰面積(A)為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。甘草酸回歸方程為Y=3.00029X+1.23099r=0.99989，線性范圍0.1033～1.0330μg。

2.6精密度試驗

精密吸取供試品溶液與上述色譜條件下進樣10μl，重復5次，以被測成分峰面積分別計算，結果甘草酸RSD=1.21%。

2.7穩定性試驗

精密吸取供試品溶液10μl，分別于0、2、4，6、8h進樣，記錄峰面積，結果甘草酸RSD=1.45%。(n=5)。

2.8重現性試驗

取同一批次甘草藥材按2.3項下提取制備5份供試溶液，分別精密吸取10μl進樣，記錄峰面積，結果甘草酸RSD=1.32%。

2.9回收率測定

取已知含量的甘草樣品粉末約0.2g，精密稱定9份，置10ml的量瓶中，樣本中添加1mg/ml甘草酸對照品溶液1ml，按2.3項下操作，進樣10μl，依2.4法測定,記錄峰面積并計算回收率，甘草酸平均回收率為99.04%RSD=0.79%，結果見表1。表1甘草酸加樣回收率實驗結果（略）

2.10樣品測定

取6批樣品，按2.3項下提取制備，依2.4項方法測定，重復測定3次，結果生藥甘草的平均含量為7.85%RSD=0.85%。

3討論

3.1洗脫溶劑系統的選擇

本實驗為RP-HPLC三元等度洗脫法。選擇甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：33：1）作為洗脫溶劑，是基于甘草酸對三元等度洗脫系統的適應性的考量。脹果甘草中含有甘草酸、甘草苷等成分，因此只要選擇適宜的洗脫溶劑系統，以促使各組分的分配系數較大，達到基線分離的效果。實驗證明該方法簡單、易行，設備要求相較梯度洗脫為低，早期一類設備都可用于檢測，且抗干擾性強，具有專屬性特點。

3.2關于甘草酸

由生藥甘草中提取的甘草酸，通常稱之天然甘草酸，天然甘草酸存在順反異構，且以順式甘草酸含量為高，反式甘草酸含量極低。本實驗未能揭示該異構體基線分離，可能與該異構體化學結構相似抑或是脹果甘草本身未含有反式甘草酸有關，尚待進一步研究。