鷹嘴豆豆葉和豆莖中總黃酮含量的測定

鷹嘴豆是薔薇科植物。因?yàn)樗姆N子像鷹嘴一樣尖，所以叫它。是維吾爾族使用藥材,維吾爾語里叫“Nukut”直譯“奴乎提”或“諾胡提。鷹嘴豆豆粉中含有鐵、銅、鋅、錳、鍶等微量元素和11種氨基酸,在醫(yī)藥方面的應(yīng)用已有悠久的歷史。維吾爾族用它治療支氣管炎,結(jié)膜炎、霍亂、便秘、痢疾、消化不良、腸胃氣脹、糖尿病、高脂血癥、性欲降低、皮膚瘙癢、中暑等疾病。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明其具有抗菌、抗病毒、平喘鎮(zhèn)咳、祛痰、抗過敏、止血、增強(qiáng)免疫力、護(hù)肝利膽、解熱鎮(zhèn)靜、抑制心臟收縮及降壓等廣泛的藥理作用。是目前糖尿病、高血壓、高血脂等特殊人群的首選健康食品。對(duì)鷹嘴豆中總黃酮的分析,目前很多文獻(xiàn)已有報(bào)道,鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢中黃酮含量未見報(bào)道。本文以鷹嘴豆中黃酮含量較高的蘆丁作為對(duì)照品,測定波長為260nm,采用紫外分光光度法測定了鷹嘴豆中總黃酮含量,提供了一種測定鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢中總黃酮含量的簡便方法。1儀器和試劑分光光度計(jì),石油醚,甲醇,電子分析天平,鷹嘴豆豆莖、豆葉樣品,蒸餾水。2實(shí)驗(yàn)方法2.1氯化鋁乙醇溶液的制備三氯化鋁反應(yīng):取鷹嘴豆豆葉、豆莖提取液,點(diǎn)在濾紙上,滴加1%三氯化鋁乙醇溶液,吹干。在紫外光下呈一個(gè)黃色熒光斑點(diǎn)。通過上述顯色反應(yīng),表明鷹嘴豆豆葉、豆莖中含有黃酮類化合物。2.2對(duì)照溶液的制備精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品7.50mg,至于50ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配成150μg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.3脂溶性成分提取法精密稱取1.0g固體樣品(5份),研細(xì),置于容量瓶中,加石油醚(60-90℃),超聲提取30min,用石油醚(60-90℃)提取脂肪等脂溶性成分,棄去石油醚提取液,剩余物揮去石油醚,加入甲醇50ml和25%HCL5ml,再超聲提取30min,取出后快速冷卻至室溫,甲醇定容。2.4紫外可見掃描結(jié)果取對(duì)照品溶液1.0mL置于25mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,以甲醇作空白對(duì)照,在200—600nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外可見掃描。結(jié)果表明:蘆丁在260nm處有最大吸收峰;準(zhǔn)確吸取豆葉樣品溶液0.5mL和豆莖樣品溶液1.0ml,同上操作進(jìn)行紫外可見掃描,發(fā)現(xiàn)樣品也在260nm附近處有最大吸收峰。故選擇在260nm下對(duì)樣品液中總黃酮含量進(jìn)行測定。2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0(相當(dāng)于蘆丁0、75、150、225、300、375、450μg),移入比色管中,加入甲醇稀釋至刻度,于260nm波長處測定吸光度,以甲醇為空白,以蘆丁含量(μg)為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。進(jìn)行回歸分析,得回歸方程:y=0.095x-0.0037(r=0.9998)3結(jié)果與討論3.1黃酮的總含量的測定3.1.1總黃酮含量的測定準(zhǔn)確吸取0.5mL豆葉樣品溶液5份,分別置于25mL容量瓶中,各加入甲醇溶液至刻度,搖勻,以試劑為空白對(duì)照,于260nm波長處測定吸光度。根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出所取樣品溶液中的總黃酮含量。結(jié)果見表13.1.2總黃酮含量的測定準(zhǔn)確吸取1.0mL豆莖樣品溶液5份,分別置于25mL容量瓶中,各加入甲醇溶液至刻度,搖勻,以試劑為空白對(duì)照,于260nm波長處測定吸光度。根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出所取樣品溶液中的總黃酮含量。結(jié)果見表23.2儀器精密度試驗(yàn)準(zhǔn)確吸取一定量的樣品溶液于25mL容量瓶中,按上述操作方法測定其吸光度,連續(xù)測定6次,測RSD值為0.13%表明儀器精密度良好。3.3吸光度的測定準(zhǔn)確吸取一定量的樣品溶液按上述操作方法測定其吸光度,每隔30min測定一次,連續(xù)測定6次。測得其RSD值為0.76%表明樣品溶液在6h內(nèi)基本穩(wěn)定。3.4吸光度的測定準(zhǔn)確量取豆葉樣品溶液0.5mL于25mL容量瓶中,添加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0ml,定容至刻度,搖勻,以試劑為空白,在260nm波長處分別測定試液的吸光度。平行操作5份,計(jì)算回收率,結(jié)果見表3。準(zhǔn)確量取豆莖樣品溶液1.0mL于25mL容量瓶中,添加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0ml,同樣方法進(jìn)行操作,計(jì)算回收率,結(jié)果見表4從表3和表4可以看出,本實(shí)驗(yàn)的回收率達(dá)到基本要求,說明該方法可以用于鷹嘴豆中總黃酮的檢測。4紫外分光光度法