動物實驗室的生物

安全防護病毒學國家重點實驗室武漢大學醫學病毒學研究所

主要內容實驗動物的護理和使用原則實驗過程的行為規范實驗動物的使用程序和要求動物生物安全實驗室設施與防護要求一、實驗動物的護理和使用原則

實驗動物是經過科學的育種，遺傳背景清楚，攜帶的微生物狀況明確，并對其生態學、生物學、生物化學、形態結構了解的特殊動物，因此，對其護理和使用也有嚴格的要求。實驗動物飼養和使用應遵守國家有關法律和規定。應明確使用實驗動物的理由和目的。明確實驗所使用動物的種類和數量，動物的數量應滿足統計學的要求。完善操作規程，避免或減輕因實驗對動物造成的不適和痛苦。包括使用適當的鎮靜、鎮痛或麻醉方法；禁止不必要的重復。嚴格按程序實施實驗后動物的處理，包括麻醉、止痛、實驗后的護理或用麻醉方法處死。實驗過程中要求保證實驗動物的良好生活條件，包括飼養環境、符合需求的飼料及細心的護理等。研究人員和實驗動物操作人員應接受實驗動物的基本知識和操作技能等方面的培訓。使用過程中要求保證周圍環境和實驗人員的安全。實驗動物的護理和使用原則二、動物實驗過程的行為規范物理限制手術操作飲食的限制廢棄物和尸體處理1.物理限制

指在實驗過程中包括檢查、收集標本、給藥、治療或實驗操作等，用手或工具限制動物活動的過程。

根據實驗內容不同，限制時間有差異，但要求盡量縮短限制時間。有些動物，如狗和靈長類動物可以通過簡單的訓練達到目的。限制的工具不能作為常規的飼養工具。工具的設計應合理，不要僅考慮實驗的便利，主要考慮盡量減少動物的不適，避免傷害。盡量減少限制的時間，以達到實驗目的為基準。在限制過程中，如果發生損傷或嚴重的行為改變，應暫?；蚪瓜拗疲⒔o予處理或治療。保證實驗人員和周圍人員的安全。物理限制的主要原則和要求

有些實驗需要對動物進行手術，即打開或刺穿動物的身體，對動物的物理或生理機能產生較大的損害。

實驗人員也容易被血液，體液污染或被器械、針頭刺傷，存在潛在生物污染的威脅。操作一定要使用適當的鎮靜、鎮痛或麻醉方法。不提倡利用一個動物進行多個手術實驗，但是，為充分利用動物資源，經動物倫理委員會許可，在可能的條件下可以實施。禁止不必要的重復操作。嚴格實驗操作規程，防止發生血液，體液外濺和針刺傷，避免生物污染。手術后的動物、標本以及所用器具材料等必須按規定程序妥善處置。2.手術操作

實驗用動物原則上要求隨時飲食，如果一些實驗需要動物限制食物或水的攝入量，應保證動物存活所需要的最低需求量。根據研究的目的，食物的限量應經過科學的論證，其限量的標準應容易操作，如正常攝入量的百分比或動物體重的百分比。

對于水分的限量攝入，一定要防止動物發生脫水現象，并要保持動物的膳食平衡。3.飲食的限制1.血液和體液標本的處理用于抗體、抗原、病原微生物、生化指標等檢查的血液和體液，按照要求進行處理并檢測，檢測后的標本經121℃，30min高壓消毒處理。2.動物臟器組織的處理

動物器官組織，尤其是用于病原微生物分離的組織按照標準程序進行處理；用于病理切片的組織，均需要經過甲醛固定后再進行切片。剩余的組織經121℃，30min高壓消毒處理。4.廢棄物和尸體處理3．動物尸體的處理

安樂處死后的動物尸體，取材完畢后，經121℃30min高壓滅菌處理后，集中送環保部門處理。動物生物安全三級實驗室及以上級的實驗室的感染動物尸體需經室內和雙扉兩道高壓滅菌，才能移出實驗室。4.動物咽拭子的處理

用于病原分離和PCR檢測的咽拭子，按照各自的要求處理后，進行病毒分離和PCR檢測，剩余的標本經121℃，30min高壓消毒處理。5.病原分離培養物的處理

病原分離的培養物，不論是陽性還是陰性結果，均需經121℃，30min高壓消毒處理。。

4.廢棄物和尸體處理三、實驗動物使用程序和要求1.實驗動物的基本使用程序和要求實驗室如需要使用實驗動物，應首先向生物安全和倫理委員會提出申請，填寫申請表。見附件實驗動物使用申請表使用實驗室得到認可后，根據申請表中申請的動物種屬和數量，安排實驗動物的飼養和使用。實驗動物必須在指定的區域內飼養和使用，禁止在實驗室飼養動物。實驗操作結束時，動物須返回指定的飼養區域內，不能在實驗室內過夜。動物實驗應在實驗室內指定的區域進行。

實驗動物使用申請表批準號：_____________批準日期：_____________有效日期：_____________一、申請者基本情況科室課題負責人電話傳真E-mail課題名稱申請目的□初次申請，□延長或□修改原申請（原申請批準號______________）二、所需實驗動物種類年齡體重/大/小性別來源飼養場所實驗場所數量_________+__________+__________=___________（第一年）（第一年）（第一年）（總計）三、動物的運送（是否需要運送，如果需要，說明運送的路線和使用工具等）四、研究的目的（簡單描述研究的目的，和該研究對人類，或動物，或科學研究的貢獻）五、使用實驗動物的原理（解釋使用動物的原理；闡述選擇動物屬種和數量的依據）六、描述動物實驗的設計和操作程序（具體包括：注射或接種的物質、劑量、部位、體積和針次等；血標本的收集體積、部位、方法、時間；非手術的操作步驟（手術操作見第七項）；限制動物的方法；放射性同位素的使用劑量和時間；識別動物的方法，如耳朵標簽、飼養籠的卡片等；對動物的損害，如疼痛、腹水等；實驗終結標準，如腫瘤的大小、體重降級的百分比、行為學的改變、中毒癥狀等，及何時執行安樂死。）七、手術操作程序（如需要，請填寫本目錄）具體操作步驟手術操作人及培訓情況手術執行的地點實驗后的護理是否在同一動物上進行多個手術□否□是，具體說明：八、導致疼痛的分類實驗動物的數量第一年第二年第三年□A輕微，或一過性，或無疼痛__________________________________□B有疼痛，但能夠解除__________________________________□C不能緩解的疼痛__________________________________九、麻醉，鎮痛（對第八項目中的B或C類動物，應說明使用麻醉或鎮痛的方法，包括麻醉劑的名稱、劑量、使用方式和時間）十、實驗終結后，如何終止動物的生命（麻醉劑的名稱、劑量和使用方法）和如何處理動物尸體涉及感染性材料的操作要在生物安全柜中進行，并防止泄露在安全柜底面。操作包括感染動物的解剖、組織的取材、采血及動物的病原接種。動物籠具在清洗前先做消毒處理。污物、一次性物品需放入醫療廢物專用垃圾袋中，經高壓滅菌后方可拿出實驗室。動物尸體用雙層醫療廢物專用垃圾袋包裹后，放入標有動物尸體專用的容器中，用消毒液噴霧容器表面后，運至解剖區域剖檢。生物安全柜使用后應用消毒液擦拭、揩干。2.含有感染性材料的動物實驗要求2.含有感染性材料的動物實驗要求廢液需按比例倒入有消毒液的桶中，倒入時需沿容器壁輕倒并戴眼罩，防止濺入眼中。如果有感染性物質濺到生物安全柜上、地上以及其他地方，應按菌，毒外溢在臺面、地面和其他表面處理。每天工作結束時，應用消毒液擦拭門把手和地面等表面區域。廢物放入高壓滅菌器內時需粘貼指示條，物品移出前觀察指示條是否達到滅菌要求。顏色不符時需重復高壓滅菌。高壓滅菌器需每月做滅菌測試一次，并作記錄。

3.小動物的飼養

小動物主要指小鼠、大鼠、豚鼠等嚙齒類動物，其飼養應遵循下列原則使用動物必須按國家標準或實驗特殊要求檢驗合格，充分準備后進入動物實驗室，飼養人員應按實驗設施規定程序要求進入實驗室。及時觀察動物飲食、精神狀況，有無異常表現，患病或死亡。動物應可自由進食、飲水。定期檢查水、料是否充足并及時補給。同時保證其他飼養條件完備。4.大動物飼養

大動物主要指狗、豬及非人類靈長類動物等，飼養原則使用動物必須按國家標準或實驗特殊要求，檢驗合格，充分準備后方可進入動物實驗室。應將每只動物日攝取總量分批次喂給，以保證動物的進食量和減少浪費。應經常檢查飲水裝置，及時補充不足。動物飼養區域應每天打掃，保持清潔，每周將地面消毒三次。喂給瓜果、蔬菜等須洗凈消毒。禁止喂給腐爛發霉不潔的食物，飲水要清潔。對飼喂動物所用的小推車、食物、水容器等用品每周進行兩次消毒。室內光照，要求明暗各12h自動交替。。

5.動物的檢疫

實驗動物進入檢疫室在檢疫室的緩沖間內，用75%酒精噴灑動物的外包裝進行消毒，打開紫外燈照射10～15min。將經上述處理的動物移入檢疫室，根據要求進行檢疫。各動物的檢疫期不同，大動物為2周，小動物為1周。在檢疫期內觀察動物的精神狀態、食欲、營養狀況、排泄物等，如有任何異常，動物不得用于實驗，應退出動物檢疫室。檢疫合格的動物經適當處理后由緩沖間或物流通道進入動物實驗室。6.動物實驗的有關操作

1.給藥根據實驗要求，按不同的動物，不同途徑給藥。主要包括灌胃和靜脈注射。對接種了高致病性病原微生物的動物，尤其是大動物，將動物麻醉后方可進行灌胃或靜脈注射。小動物灌胃或靜脈注射可根據情況選擇是否麻醉，靜脈注射時需使用保定器。2.采樣

原則上活檢時應對動物進行麻醉。對接種了病原體的大動物進行采血或體檢時，要求將動物麻醉。對小動物進行灌胃、注射和采血時，可不麻醉動物，但要防止動物咬抓。7.獸醫職責了解所飼養動物的健康狀況，建立疾病預警機制，對工作環境與生產管理提出改善建議，確保實驗動物的品質。主管獸醫師由單位主任指定，不得接觸有病原污染的物品主管獸醫師每天檢查實驗動物各項健康事項，檢查各區域工作環境和衛生條件。主管獸醫師在檢查完后應提出報告，動物是否進一步隔離觀察和實驗室檢查建議四、動物生物安全實驗室設施與防護要求由于實驗內容不同，尤其是進行微生物實驗研究，使用的動物也有具體要求，因而，關于動物實驗室中使用的微生物的危害評估，需要考慮以下因素病原微生物的傳播途徑病原微生物標本使用的容量和濃度病原微生物接種途徑和方法病原微生物能否和以何種途徑被排出體外病原微生物的總體危險程度對于使用的動物，需要考慮的因素包括動物的自然特性，包括動物的攻擊性和抓咬傾向性自然存在的體內外微生物和寄生蟲等易感的動物性疾病動物接種病原微生物后可能產生的結果等動物實驗室所使用微生物的危害評估應考慮的因素一級動物生物安全防護實驗室

AnimialBio-safetyLevel-1

ABSL-11.標準微生物學規范實驗人員從事在實驗工作，需由實驗室負責人批準，并決定限制或禁止其他人員進入實驗室,門進系統。工作面每天消毒一次，并及時對濺落活微生物的材料進行消毒。采用機械吸液裝置，禁止用嘴吸液。在實驗區內禁止飲食、吸煙、處理隱性眼鏡及化妝，食物應存放在專用的儲藏柜或冰箱內，保存食物的柜子或冰箱應放置在實驗區以外。實驗人員在操作活微生物材料及動物，離開實驗室之前均應洗手。所有污染的液體或固體廢棄物在處理前應去除污染。感染動物尸體需用防漏、有蓋容器運出并焚化。所有操作均應按規程仔細小心進行，使氣溶膠的產生減至最低限度。實驗室應有防昆蟲及鼠類的措施。

門進系統監控系統污染區半污染區清潔區雙扉高壓滅菌器焚燒爐浸泡槽2.特殊規范需告知進入實驗室人員潛在危害，符合特定要求人員方能由負責人批準進入。實驗室要制定生物安全手冊，供需要進入的工作人員閱讀并按程序執行。建議穿長工作服，以防止污染或濺污便服。動物房工作服不能穿到其它實驗區域。需運至實驗室外進行消毒處理的污染材料，應裝入堅固、不漏的容器、密封室。制定安全使用銳利器具的方案。

3.防護設備初級屏障

ABSL－1一般不要求使用專用防護設備。接觸非人靈長動物的人員應進行黏膜暴露危險評估，并且應用合適的眼部和頭部防護設備。

4.實驗室的設施要求

二級屏障動物設施應與大樓內的公共區分開。動物飼養區的門需能自動關閉，向內開啟，平時保持關閉狀態。實驗室設計與建筑應便于清潔。實驗臺表面不透水，耐酸、堿、有機溶劑、并耐熱。實驗室設備堅固。實驗臺、柜及設備之間的空間應有適當距離便于清潔。實驗室區及動物飼養區應設洗手池。如實驗室有可開關的窗子應裝上紗窗。實驗室空氣直接外排，不得再循環或回流至其它動物飼養區。動物用籠架具可用手洗及機洗。機洗最后沖洗溫度最少應為90℃。二級動物生物安全防護實驗室

ABSL－2

該級與動物實驗一級生物安全水平相似，適用于那些對人及環境有中度潛在危險的微生物和動物實驗工作。其不同點在于

(1)人員經過操作病原性物質專門訓練，并由能勝任的科學人員監督管理。(2)正在工作時限制外人進入實驗室。

(3)某些產生傳染性氣溶膠的工作在生物安全柜或其他物理封閉設備內進行。

應有適當的醫療監測方案實驗室人員須針對所應用的病原體或潛在的病原體接受適當的免疫和檢測如乙肝疫苗，