金蓮花微囊制備工藝的研究

金蓮花系毛科金蓮花科的干燥花主要包括黃酮、氨基酸、酸和蒸發成分。根據近代藥理學研究可知,其有效成分為總黃酮類,對綠膿桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌等均有明顯的抑制作用,對副流感病毒、A型流感病毒、呼吸道合胞病毒以及ECOH、CoxA24、CoxB3等病毒也有程度不等的抑制作用。目前應用于臨床的金蓮花制劑主要有片劑、顆粒劑以及袋泡茶等劑型,但抗菌、抗病毒作用都不如其水提液,所以有研究者認為這或與其制劑類型有關,應當對金蓮花的新劑型進行相關研究。作為近年來發展起來的新型制劑,微囊除具有掩蓋藥物不良口味氣味、提高藥物穩定性、防止藥物在胃內失活和減少其對胃的刺激等特點處,更具有緩釋作用,可長時間維持穩定的血藥濃度,而提高其藥物生物利用度。因此將金蓮花制成微囊,用以延長其有效成分的釋放時間,維持均衡穩定的血藥濃度,提高生物利用度,進而提高其療效,具有較重要的意義。筆者采用相分離成囊技術之單凝聚法制備了金蓮花緩釋微囊,結果表明金蓮花微囊制備工藝穩定、釋藥性良好。1試劑與試劑金蓮花提取物(自提,為棕黃色粉末,總黃酮含量65.15%),藥用明膠(天津化學試劑廠,20040910),司盤60(天津化學試劑廠,20010908),液體石蠟(AR,萊陽化學試劑廠,20050426),甲醛(AR,北京化工廠,20060515),異丙醇(AR,天津科密歐化學試劑廠,20051104),正己烷(AR,北京化工廠,20060420),磷酸二氫鉀(AR,天津天大化學試劑廠,20040710),硝酸鋁(AR,天津博迪化工有限公司,20040622),亞硝酸鈉(AR,天津化學試劑六廠,20020911),氫氧化鈉(AR,天津津東天正精細化學試劑廠,200411108),0.8μm微孔濾膜。AB-204N電子分析天平(上海),DF-10IS集熱式恒溫電磁攪拌器(鄭州長城科工貿公司),紫外分光光度計(756PC上海),D-800智能藥物溶出儀(天津大學精密儀器廠),電子顯微鏡。2方法和結果2.1金蓮花微囊檢測條件的確定根據預試驗結果及相關文獻的報道,確定本實驗考察因素為:轉速(X1),液體石蠟用量(X2),囊心物用量(X3),利用均勻設計2.10統計軟件選取混合水平U6(62×3)均勻設計表,即因素X1、X2為六水平,因素X3為三水平,以金蓮花總黃酮的包封率作為評價指標,來篩選制備金蓮花微囊的最佳條件,其具體因素水平見表1。2.2司盤-60lg/液體石蠟的溶解稱取明膠3g,加水20mL充分溶脹,保溫溶解,按照設計條件加入金蓮花提取物,充分攪拌,保溫;于一定量的液體石蠟中加入司盤-60lg,在55℃下以一定轉速攪拌,使其充分溶解并保溫;將藥物的明膠溶液緩緩加入液體石蠟中,攪拌20min,迅速冷卻至4℃以下,保持20min,加異丙醇50mL脫水,再加甲醛30mL固化,冰箱冷藏24h,抽濾,以適量的異丙醇及正己烷洗滌,抽干,烘箱60℃干燥。2.3計算微囊密封率2.3.1對照品溶液的制備取105℃下常壓干燥至恒重的蘆丁對照品適量,精密稱定,置50mL量瓶中,加人工腸液35mL,超聲15min,放至定溫后,加入人工腸液定容。精密量取5mL置于50mL量瓶中,以人工腸液定容,搖勻,過濾,得對照品溶液。精密量取該溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL,置于25mL量瓶內,分別加水至6mL,各加5%NaNO2溶液1mL,依次每隔6min加入10%Al(NO3)3溶液1mL、4%NaOH溶液10mL,最后用水稀釋定容,搖勻,放置15min。在500nm處測定其吸收度,考察標準溶液濃度與吸收度的線性關系,得到回歸方程A=11.0753C+0.0015(r=0.9988),表明總黃酮以蘆丁計在0～0.048mg/mL范圍內線性關系良好。2.3.2人工腸液轉移精密稱取金蓮花微囊0.4g,置于研缽內,加入少許人工腸液,充分研磨后用15mL人工腸液轉移至25mL量瓶中,超聲處理至微囊被完全破壞,放冷,以人工腸液定容。過濾后,于500nm處測其吸光度,代入標準曲線回歸方程中求C,并按照中國藥典2005版第二部附錄計算包封率。具體實驗結果見表2。2.3.3顯著性條件優化以藥物的包封率作為評價指標,利用均勻設計2.10統計軟件處理實驗結果。將實驗結果輸入計算機,進行逐步回歸分析,并進行檢驗,得到關于微囊包封率的回歸議程:Y=69.5-0.131X2-11.2X3,s=0.437,R=0.9993,在顯著性水平a=0.05時,其檢驗值Ft=463.8,臨界值F(0.05,3,2)=19.16,Ft>F(0.05,3,2),可知此回歸方程有顯著性意義,而因素X1對Y影響不顯著。對本均勻設計進行回歸分析后,獲得的最佳實驗條件是:囊心物用量為0.667g(即囊心物:囊材=1∶4.5),液體石蠟用量45mL(即油水相比為2.25∶1),轉速1200r/min,優化結果Ymax=55.6%(±0.701%)。按照該優化條件,進行驗證實驗(n=3),測得金蓮花微囊的平均包封率為55.02%,與優化值相近。2.4微囊形狀和粒度分布的測量2.4.1電子顯微鏡觀察取微囊適量,置于白紙上,觀察其外觀性狀。另取微囊少許,用液體石蠟輕涂于載玻片上,在電子顯微鏡下觀察微囊的形態。所得微囊為棕褐色粉末,分散性好,外形圓整,粒徑分布均勻。見圖1。2.4.2質量百分率測定取40,60,80,100,120,160目藥典統一標準篩,將微囊在各篩中分別過篩稱重,計算各粒徑范圍內微囊的質量百分率。根據測定結果可知,有86.60%的微囊集中在80～120目之間(90μm<d<180μm),這表明微囊粒徑的集中度好。見圖2。2.5外溶2.5.1累積釋放百分率測定總體水分率2.按中國藥典2005年版二部溶出度測定方法第二法漿法進行度驗,釋放介質為人工腸液900mL。精密稱取適量金蓮花微囊(相當于含金蓮花總黃酮200mg),撒于溶出杯內,(37±0.5)℃下,以50r/min的速度進行攪拌。分別于30min、45min、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0h取樣5mL,同時補充同體積新鮮溶出液,樣品液經微孔濾膜濾過,測定各時間點樣品溶液的吸收度,代入標準曲線回歸議程中計算C,按以下公式求累積釋放百分率。Q%=Cn?V+Vi∑i=0n=1CiW×DL%×100%Q%=Cn?V+Vi∑i=0n=1CiW×DL%×100%Cn:第n個時間點所取樣品濃度;V:釋放介質總體積;Vi:第i個時間點的取樣體積;Ci:第i個時間點所取樣品濃度(V0及C0均為零);W:所取微囊質量;DL%:金蓮花微囊載藥量。2.5.2金蓮花微囊制劑的外科環境結果見圖33微囊測試結果3.1同囊心物及液體石蠟用量相比,攪拌速度對包封率和載藥量的影響并不顯著,但考慮其對微囊粒徑大小的影響,故選擇1200r/min。其它條件,以溫度控制在55～60℃,明膠濃度在15%左右為宜。3.2在此優化條件下,所得微囊平均包封率為55.02%,而且本實驗方法簡單,條件易控制,所得微囊呈圓球形,表面光滑,性狀良好。其體外溶出結果也較為理想,具有緩釋作用。3.3在本實驗各因素中,所考察的囊心物用量與液體石蠟用量,實際上是對心材比與油水兩相比的反映。除