獨立的HIV篩查實驗室。為了使檢測工作能夠正常進(jìn)行，保證HIV檢根據(jù)HIV檢測實驗室工作的需要，我科配備從事HIV檢測工作人員3名，其中專職工作管理人員2名，中級衛(wèi)生技術(shù)職稱人員2名，所有人員從業(yè)年限均在5年以上。并積極參加省級、市級舉辦的HIV寇燕波HIV篩查實驗室工作管理程序一、目的HIV篩查實驗室工作流程圖HIV篩查實驗室規(guī)章制度2、努力學(xué)習(xí)政治，刻苦鉆研業(yè)務(wù)，發(fā)揚救死扶傷，實行革命人道主義，對3、熱愛本職工作，服從分配，遵守勞動紀(jì)律，做到不遲到、不早退，不擅4、嚴(yán)格執(zhí)行規(guī)章制度，盡職盡責(zé)，及時做好各項檢驗結(jié)果記錄，自覺抵制5、識大體，顧大局，關(guān)心集體，團(tuán)結(jié)友愛，不背后議論，搬弄是非。6、講究文明禮貌、積極參加愛國衛(wèi)生運動，美化環(huán)境，保持醫(yī)院科室整潔，7、HIV篩查實驗室應(yīng)制定嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程，工作人員必須1、崗位責(zé)任制是保證工作質(zhì)量和醫(yī)療安全，提高工作效率的重要環(huán)節(jié)。建立崗位責(zé)任制，做到人人分工職責(zé)明確，事事有人負(fù)責(zé)，立足本職，團(tuán)結(jié)互助，相互協(xié)調(diào)，保證各項任務(wù)的勝利完成。2、HIV篩查實驗室由有實踐經(jīng)驗的技術(shù)人員負(fù)責(zé)。3、牢固樹立把質(zhì)量放在第一位的思想，在工作中必須加強檢查和復(fù)查制度，4、交接工作必須認(rèn)真負(fù)責(zé)，須核對實物和記錄，對工作一般情況、存在問題和注意事項應(yīng)進(jìn)行具體交待，否則，發(fā)生問題由交班人負(fù)責(zé)。5、職工臨時因故離開工作崗位，必須將工作委托給能勝任該項工作的人員，否則，發(fā)生問題由原擔(dān)任該項工作者負(fù)責(zé)。6、新參加工作的職工，在未熟悉和掌握工作前不能獨立工作不能頂崗位，7、建立HIV篩查實驗室專用的精密儀器和重要設(shè)備專責(zé)崗位制，其他人不得任意使用。嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程操作，不可擅自亂改設(shè)置。8、凡是一物多人使用的，除共同負(fù)責(zé)外，應(yīng)指定一人為該崗位責(zé)任制負(fù)責(zé)人，負(fù)責(zé)指導(dǎo)正確操縱，定期安全檢查，經(jīng)常維護(hù)保養(yǎng)，保持正常運轉(zhuǎn)，該負(fù)責(zé)人有權(quán)制止任何違章操作和有害設(shè)備安全的行為。每日正班人員負(fù)責(zé)樣品的采集，接收，執(zhí)行檢驗任務(wù)，做好檢驗記錄，填報檢驗數(shù)據(jù)，簽發(fā)報告及實驗室儀器設(shè)備的日常維護(hù)和保養(yǎng)。副班人員負(fù)責(zé)協(xié)助正班人員做好實驗室的所有日常工作，并負(fù)責(zé)對檢驗工作三、標(biāo)本管理制度(1)、用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置1~2h,待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min,吸出血清備用。(1)、用加有抗凝劑的真空采血管(或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管),反復(fù)輕搖，分離血漿和血細(xì)胞備用。(3)、用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在4～8h內(nèi)分離PBMC和血傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。(5)、采血時一定要注意安全，采血用一次性注射器，謹(jǐn)慎操作，防止發(fā)生(6)、離心機要使用密閉的罐和密封頭，以防液體溢出或在超/高速離心時(二)樣品的保存1、用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20℃以下，短期(1周)內(nèi)進(jìn)行檢測的樣品可存放于2-8℃。2、用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于-20℃以下，進(jìn)行病毒RNA檢測的樣品如需保存3個月以上應(yīng)置于-80℃。3、用于CD4'/CD?T淋巴細(xì)胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過48h(三)樣品的運送1、實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。2、應(yīng)采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)：第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標(biāo)簽(數(shù)量，收、發(fā)件人)。3、血清和血漿樣品應(yīng)在2～8℃條件下由專人運送。用于CD?'/CD?T淋巴細(xì)胞測定的樣品應(yīng)在室溫下18～23℃運送。每一包裝的體積以不超過50ml為宜。4、運送感染性材料必須有記錄。5、如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝血-20℃以下凍存，采用冰壺冷藏運輸，避免凍融。6、特殊情況下如需對個別樣品進(jìn)行復(fù)測，可以用特快專遞形式投寄，但必須按三級包裝系統(tǒng)將盛樣品的試管包扎好，避免使用玻璃容器，以保證不會破碎(四)樣品的接收1、含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培2、核對樣品與送檢單，認(rèn)真核對標(biāo)本上病人姓名、年齡、性別、病區(qū)、床4、打開標(biāo)本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能7、不符要求的標(biāo)本，必須及時填寫退回理由單，及時通知送樣人，說明情(五)標(biāo)本檢測2、在標(biāo)本足夠的情況下，不能浪費、隨意丟棄或損壞標(biāo)本。應(yīng)象操作未知檢驗標(biāo)本先用含2-3g/L有效氯消毒劑浸泡半小時，再用高壓鍋高壓消毒。四、試劑管理制度五、環(huán)境消毒隔離制度5、一次性醫(yī)用器具包括采血針，注射器、尿杯、血紅蛋白微量吸血吸管，應(yīng)嚴(yán)格做好領(lǐng)發(fā)登記，注射器先浸泡消毒后由供應(yīng)室一對一調(diào)換，統(tǒng)一處理，其余一次性器具浸泡消毒后裝入污物袋送焚燒爐焚燒。6、檢驗人員在進(jìn)行靜脈抽血時應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作技術(shù)，操作前必須洗手必須戴好帽子與口罩，操作臺和手被污染時應(yīng)用肥皂和流水認(rèn)真洗手，必要時用消毒液浸泡雙手，酒精、碘酒瓶每周更換消毒兩次。7、溢出試管外的血液，應(yīng)立即用碘酒棉簽擦拭干凈，注意防止玻璃碎片刺9、實驗室操作時應(yīng)戴上手套。吸取標(biāo)本，離心振蕩等應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程，防10、已檢查標(biāo)本與容器分別浸泡于次氯酸鈉(2000mg/L)中兩棄，一次性容器送焚燒，重復(fù)使用的經(jīng)清洗消毒和滅菌后再使用，均要有記錄。有毒化學(xué)試劑和放射性試劑使用后要經(jīng)無害化處理，防止污染環(huán)境。11、非科室工作人員不準(zhǔn)進(jìn)入實驗室，外來人員參觀需經(jīng)科主任同意方可進(jìn)六、實驗臺消毒措施1、實驗臺消毒措施必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。由專人按特定程序和方法進(jìn)行清潔和消毒。2、臺面的清潔消毒，保持清潔、濕式打掃。每天開始工作前用濕布抹擦1次，地面用濕拖把擦1次，禁用干抹干掃。抹布和拖把等清潔用具實驗室專用，0.2～0.5%過氧乙酸或75%乙醇抹擦1次。也可用便捷式高強度紫外線消毒器近距3、應(yīng)象操作未知傳染風(fēng)險樣品一樣進(jìn)行消毒與滅菌，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的血液、質(zhì)量控制和參考物質(zhì)，若被上述物品明顯污染，如具傳染性的標(biāo)本或培養(yǎng)物外溢，濺潑或器皿打破，灑落于臺面，應(yīng)立即用消毒液消毒，用5000mg/L有效氯消毒劑、過氧乙酸或乙醇灑于污染的臺面，并使消毒液浸過污染表面，保持30～60min后再擦，拖把用后浸于上述消毒液內(nèi)1h以上4、各類在實驗室實驗臺上操作后的廢棄物品均應(yīng)視作物染物分類處理，所七、廢棄物處置和實驗室消毒2、HIV常用的物理消毒方法壓力蒸汽消毒，121℃,保持15～20min;干燥空氣烘箱消毒(干烤消毒),140℃,保持2～3h。HIV最常用的化學(xué)消毒劑是含氯消毒劑(次氯酸鈉，含有效氯2000~5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30min。八、消毒液的配制及使用措施1、HIV實驗室最常用的化學(xué)消毒劑是含氯消毒劑(次氯酸鈉，含有效氯2000-5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30min。2、含氯消毒劑的配制：次氯酸鈉原液使用前進(jìn)行1:20～1:50稀釋(2000-5000mg/L)或聯(lián)昌84使用前進(jìn)行1:10～1:25(2000-5000mg/L)稀釋消毒。0.04%的過氧乙酸用于實驗室工作人員手浸泡1～20分鐘，再用肥皂洗手。九、消防安全制度1、根據(jù)"誰主管、誰負(fù)責(zé)"的原則，實行科室負(fù)責(zé)制。2、主管領(lǐng)導(dǎo)和保衛(wèi)科對全體職工經(jīng)常進(jìn)行消防安全教育，提高思想認(rèn)識，3、嚴(yán)格執(zhí)行《安全防火管理制度》各種火種與易燃易爆物品，必須嚴(yán)格分6、各種機電設(shè)備、高溫電器設(shè)備、耐高壓容器和設(shè)施，使用時必須有專人7、各防火區(qū)域設(shè)置的消防器材和設(shè)備，應(yīng)定期進(jìn)行檢查，維修和更換，隨8、任何人發(fā)現(xiàn)火、水災(zāi)等隱患者，必須及時向科領(lǐng)導(dǎo)報告。科主任及時向十、生物安全防護(hù)制度1、上崗工作人員應(yīng)是經(jīng)過崗前安全與技術(shù)培訓(xùn)，取得合格證，具有獨立工2、進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣、戴手套，必要時(如對篩查陽性標(biāo)本進(jìn)行復(fù)測或檢測高危標(biāo)本)要戴防護(hù)眼鏡，防止污染暴露的皮膚和衣物。3、嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。操作過程中，不得用戴手套的手觸摸暴露的皮5、操作中手套破損，應(yīng)立即丟棄，洗手后戴上新手套繼續(xù)操作，不慎發(fā)生7、實驗操作完畢后，應(yīng)按照實驗室清理與消毒程序，進(jìn)行善后處理。同時8、工作結(jié)束后，應(yīng)先洗戴手套的手，然后脫去手套丟棄，再脫去工作衣，十一、職業(yè)暴露的防護(hù)及處理措施HIV檢測實驗室職業(yè)暴露是指檢驗工作人員在從事檢測工作過程中意外被艾1.醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行有可能接觸病人血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴手3.受傷部位的傷口沖洗后，應(yīng)當(dāng)用消毒液，如75%的酒精或者0.5%的碘伏等4.在暴露后的0周、第四周、第八周、第十二周及六個月時抽血進(jìn)行檢測艾實施，最遲不得超過二十四小時；即使超過24小時，也應(yīng)當(dāng)實施預(yù)防性用藥，連續(xù)使用28天。1、篩查試劑目前國內(nèi)外主要使用第三代(雙抗原夾心法)試劑，少數(shù)使用第二代試劑。四代ELISA試劑)用于血源篩查。第四代ELISA試劑是最近發(fā)展起來的HIV抗原試劑相比，檢出時間提前了4～9d。其優(yōu)點在于能同時檢測抗原抗體，降低血源隨著對HIV感染者和AIDS病人抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的進(jìn)展，及對無癥狀HIV感染者提供自愿咨詢檢測(VCT)的迫切需求，簡便、快速的HIV檢測方法被廣泛應(yīng)用。常用的主要有以下幾種：①、明膠顆粒凝集試驗(PA):PA是HIV血清抗體檢測的一種簡便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫(一般為室溫)。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，共同致敏的PA試劑(AFDHIV-1/2PA),已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)注冊批準(zhǔn)；HIV-1、HIV-2抗原分別致敏的PA試劑(SERODIA-HIV-1/2)可初步區(qū)分HIV-1型和HIV-2型，目前我國尚未引進(jìn)。②、斑點EIA或稱斑點ELISA(dot-EIA):以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應(yīng)時間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。③、斑點免疫膠體金(或膠體硒)快速試驗：與斑點EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體，而代之以紅色的膠體金(或膠體硒)A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。試劑穩(wěn)定，可室溫長期保存。試驗時不需任何設(shè)備，迅速、簡便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA,適用于應(yīng)急檢測、門診急診個體檢測。目前已有在國內(nèi)被SFDA批準(zhǔn)注冊的國外進(jìn)口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品。一般可在10～30min內(nèi)判讀結(jié)果。④、艾滋病唾液檢測卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時檢測含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測唾液中的HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。但樣品預(yù)處理時間長且售價較高。以唾液為樣品測定HIV抗體的ELISA、免疫印跡法(WB)試劑已經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)。⑤、其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測(HomeAccessSystem)等。3、尿液HIV抗體檢測1996年美國FDA首次批準(zhǔn)HIV-1尿液ELISA試劑，我國也正在研制尿液HIV抗體檢測試劑。主要適用于靜脈注射毒品(IDUs)人群和其它高危人群的大面積流行病學(xué)調(diào)查、監(jiān)測。篩查陽性者仍需采血做確認(rèn)試驗才能確定。4、篩查試驗根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進(jìn)行初篩和重復(fù)檢測(復(fù)檢)。5、初篩試驗：以第三代ELISA(雙抗原夾心法)為例。(1)實驗準(zhǔn)備：試驗開始前將試劑和樣品放置在室溫(18~23℃),按實驗室磷酸鹽緩沖液：若液體內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解，用蒸餾水1:25稀釋濃縮液，4℃保存2周。TMB底物液：使用前配制，TMB液和過氧化脲液等量混勻。1M硫酸終止液：85ml蒸餾水中加入5ml濃硫酸。備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質(zhì)控血清后，按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護(hù)要求進(jìn)行篩查檢測。(2)實驗操作①、裝好所需使用數(shù)目的孔條，每孔均加入100μ1樣品稀釋液。設(shè)3個陰性對照孔，1個HIV-1陽性對照孔，若需要可再設(shè)1個HIV-2陽性對照孔。②、每孔加入50μ1待檢樣品及對照(對照要后加),未用孔用樣品稀釋液加滿以溶解結(jié)合物球，以免堵塞洗板機孔。可震搖15S,37±2℃孵育60±5min。③、置洗板機上洗滌6遍(用洗液將反應(yīng)孔完全加滿，靜置30~60S,共洗滌6遍，洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干)。④、每孔加入100μ1底物液，勿攪動，室溫避光孵育30±2min。⑤、每孔加入100μ11M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。⑥、在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm,或雙波長450/630nm測OD值。(3)實驗結(jié)果NC必須<0.25方可用，排除NC≥0.25的值，計算NC平均值。NC界限范圍：0.6倍NC均值<NC<1.4倍NC均值。②、符合以下條件的實驗成立：兩個以上的NC可用。PC1-NC均值≥0.4,PC2-NC均值≥0.4。③、Cutoff值=陰性對照均值+0.100。小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性。(4)報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實施檢測的實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報告。對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實驗室進(jìn)行確認(rèn)(見圖1)。對HIV抗體篩查試驗，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報告(可用附表1);對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告(附表1)。2),經(jīng)1名檢驗人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。送當(dāng)?shù)匕?、HIV測定(膠體金法)結(jié)果的判定方法(3)、無效：如無紅線(或只有反應(yīng)線)出現(xiàn)，表明實驗無效，須重新檢測。2、HIV測定(ELISA法)結(jié)果的判定方法(2)、臨界值=陰性對照A均值+0.12(3)、正常情況下，陰性對照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對照的OD值>0.1應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.1,應(yīng)重復(fù)實驗。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。(4)、正常情況下，陽性對照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對照的OD值<0.8應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實驗。樣品OD3、HIV測定(蛋白印跡法)結(jié)果的判定方法十四、檢測結(jié)果報告規(guī)程3、初篩檢測試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、中國藥品生4、按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》的要求建立健全質(zhì)量管理制度、實驗5、檢測結(jié)果報告前應(yīng)填寫好原始實驗記錄資料，包括試驗日期，試驗操作6、將試驗結(jié)果存檔保存，處理試驗廢物，擦凈實驗臺，做好實驗室消毒衛(wèi)7、結(jié)果報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具“HIV抗體篩查報告”(見附表1)陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報告。8、復(fù)檢試驗：對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告“HIV抗體篩查報告”(見附表1)陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，則應(yīng)按照《全國HIV檢測管理規(guī)范》的要求送艾滋病確認(rèn)實驗室進(jìn)行確證試驗。HIV抗體檢測的結(jié)果有三種，分別是陽性、陰性和不確定，絕大多數(shù)情況下都是陽性或陰性，出現(xiàn)不確定結(jié)果的情況很少。(一)、陽性結(jié)果的解釋1、表明一個人感染了HIV,具有傳播性當(dāng)一個人HIV抗體檢測結(jié)果為陽性，表明這個人已經(jīng)感染了HIV,具有把HIV傳播給別人的可能。一個人是否感染了HIV,陽性結(jié)果并非就意味著一個人已經(jīng)得了艾滋病，也不能說明患者處于疾病發(fā)展的哪個階段。若要判斷疾病的進(jìn)展，則要做另外的實驗檢測CD4細(xì)胞記數(shù)和HIV病毒載量檢查。3、對于剛出生的嬰兒，情況則不一樣剛出生的嬰兒，不能根據(jù)其HIV抗體檢測呈陽性反應(yīng)而判斷該嬰兒感染了HIV。因為出生半年以內(nèi)的嬰兒，其抗體主要是由該嬰兒從其母體獲得，不管他(她)感染HIV與否，只要其母親感染了HIV,母體內(nèi)存在HIV抗體，嬰兒出生后HIV抗體檢測-般都是陽性。如果要判斷一個嬰兒是否感染HIV,則應(yīng)該等到一歲半(18個月)以后再做檢測，檢測結(jié)果陽性時才能說明該嬰兒感染了HIV。(二)、陰性結(jié)果的解釋HIV從感染到能夠檢測出來有一段時期，這段時期稱為窗口期，窗口期一般是2周到2個月。拿到一個陰性結(jié)果，首先要確定窗口期是否已過，如果確定最后-次危險行為距抽血作檢測時已過窗口期，這時基本可以確定檢測者未感染HIV。如果窗口期末過或者抽血化驗之后又發(fā)生了危險行為(如又共用針具或未采取保護(hù)措施的性行為),同樣也不能確定抽血者沒有感染HIV。如果檢測結(jié)果陰性，最后-次危險行為又過了窗口期，那可以判定檢測未又夠陽性標(biāo)準(zhǔn)，界乎于陽性與陰性之間的一種結(jié)果。出現(xiàn)不確定結(jié)果一般建議1、感染處于窗口期，從HIV進(jìn)人體內(nèi)到檢測這段時間還不夠長，因此血清十六、檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存要時記錄通信地址)等。4、文件存檔器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存15年以上。并同時使用計算機保未設(shè)置未設(shè)置艾滋病篩查中心實驗室的地區(qū)十七、呈陽性反應(yīng)標(biāo)本的處理程序(可用附表1);對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同查報告”(見附表1)陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，則應(yīng)按照《全國HIV應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告(附表1)。2、初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品，需送上級實驗室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”(附表2),經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)人和1名專業(yè)檢驗人員審核簽3、初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品，進(jìn)一步送檢、本室冰凍保存后不在需要的樣范(2002年版)》。6、嚴(yán)格HIV實驗室的廢棄物的消毒處理制度，做好登記。1、艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點應(yīng)于每季度首月5日前填寫“HIV抗體檢測數(shù)季報表”(附表6),向艾滋病篩查中心實驗室報告上季度檢測情況。沒有艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點每季首月5日前報告上季檢測情況艾滋病篩查中心實驗室每季首月5日前每季首月5日前報告上季檢測情況艾滋病確認(rèn)中心實驗室每季首月15日前報告上季檢測情況中國CDC性艾中心省衛(wèi)生行政部門同級衛(wèi)生行政每季首月10日前報告上每季首月10日前報告上季檢測情況艾滋病確認(rèn)2、艾滋病篩查中心實驗室應(yīng)于每季度首月10日前將本實驗室和本轄區(qū)內(nèi)各篩查實驗室上季度報告的檢測情況(附表6)匯總，報告艾滋病確認(rèn)中心實驗室。3、艾滋病確認(rèn)實驗室應(yīng)于每季度首月10日前將上季度檢測情況匯總后(附表6),報告當(dāng)?shù)匕滩〈_認(rèn)中心實驗室和同級衛(wèi)生行政部門。4、艾滋病確認(rèn)中心實驗室應(yīng)及時收集、整理和分析轄區(qū)內(nèi)HIV抗體檢測情日前向省級衛(wèi)生行政部門和中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心(簡稱中國疾控中心性艾中心)參比實驗室報告。同時，按艾滋病疫情報告的有關(guān)規(guī)定上報疫情。5、在非送檢樣品中(如專項調(diào)查與研究等)發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性者，應(yīng)向所在地的省疾病預(yù)防控制中心報告，并填寫“HIV抗體確認(rèn)檢測報告單”(附表3),報中國疾控中心性艾中心參比實驗室。6、實驗室上報檢測結(jié)果的同時，應(yīng)隨時報同級監(jiān)測人員，以便及時隨訪調(diào)(一)、追蹤人群1、有明確受血或血液制品史，并排除性傳播、母嬰傳播、經(jīng)國家確證實驗室確認(rèn)的艾滋病病毒抗體陽性者；2、無償獻(xiàn)血工作中發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性獻(xiàn)血人員。(二)、工作步驟1、對供血或受血的追訪，須以健康跟蹤服務(wù)或科研的名義進(jìn)行，系統(tǒng)體檢并采血預(yù)備有關(guān)的檢驗。2、對發(fā)現(xiàn)的受血艾滋病病毒感染者制定詳細(xì)的個人追蹤方案，確定追蹤人員，應(yīng)有一名近期參與治療的醫(yī)生參加。3、對供血者追蹤，由衛(wèi)生防疫機構(gòu)會同采供血機構(gòu)的專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行。對受血的艾滋病病毒感染者由縣衛(wèi)生防疫機構(gòu)制定專人建立健康檔案，實施預(yù)防監(jiān)護(hù)、醫(yī)療照顧和管理。并定期進(jìn)行隨訪和醫(yī)療保健咨詢服務(wù)。特別必要時(四)、對HIV抗體陰性者，如近期有高危行為如性亂史、吸毒史、受血史、獻(xiàn)血漿史，或有急性流感癥狀等情況，為排除窗口期的可能，建議每3個月復(fù)查一次，連續(xù)2次。1、HIV檢測實驗室的所有工作人員要具有高度的保密意識。不得對無關(guān)人2、HIV檢測實驗室要有專人負(fù)責(zé)妥善保存與HIV/AIDS相關(guān)檢測項目的所有資料(包括送檢單、各種實驗記錄、感染者檔案、報告單的發(fā)放),不得擅自修改和銷毀。未經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門許可，不得向無關(guān)人員或單位提供任何情況。嚴(yán)格遵守保密制度，杜絕泄密事件的發(fā)生。2、我院HIV實驗室屬于篩查實驗室，檢測的結(jié)果也不是最終結(jié)果，檢測到陽性結(jié)果應(yīng)及時啟動應(yīng)急預(yù)案，根據(jù)WHO提出的三級包裝系統(tǒng)送到上級實驗室作3、確認(rèn)實驗室確認(rèn)陽性結(jié)果，以機密級向送檢單位出具陽性報告；送檢單位接到報告后，由專人負(fù)責(zé)接收，并應(yīng)及時會同醫(yī)院感染科上報縣衛(wèi)生防疫站和衛(wèi)生局。在對陽性者告知檢測結(jié)果時要先做好法律、醫(yī)學(xué)、生活等方面的咨詢。4、經(jīng)確認(rèn)的陽性標(biāo)本，包括在實驗室留存的標(biāo)本，應(yīng)送省級HIV抗體確認(rèn)中心或省級衛(wèi)生行政部門指定的單位保存，不得擅自處理。標(biāo)本保存時間至少55、當(dāng)發(fā)生職業(yè)暴露事故后，無論職業(yè)暴露事故級別的大小，對涉及的職業(yè)暴露者，均應(yīng)注意做好保密工作。任何一個得到信息的人都要做好保密工作。保密守則：1、不該說的機密絕對不說；9、不在普通電話、明碼電話、普通郵件傳達(dá)機密事項；10、不攜帶機密材料游覽、參觀、探親、訪友和出入二十一、質(zhì)量管理制度1、根據(jù)省臨檢中心的有關(guān)規(guī)定，開展實驗室室內(nèi)的質(zhì)量控制，繪制HIV實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制圖，包括20次OD值、S、靶值、CV%值。對室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)每日有記錄，有每月的S、靶值、CV%值。對失控情況有糾正方法，有預(yù)防性措施。2、積極參加省臨檢中心組織的室間質(zhì)控活動，對每次質(zhì)控評價應(yīng)有記錄。3、計量儀器應(yīng)定期校正，每年一次。4、精密分析儀器由專人負(fù)責(zé)，有使用記錄和維修記錄。5、商品化的試劑盒的申購由專業(yè)組長負(fù)責(zé)申報，每月一次報科主任審批，不得使用過期，無批準(zhǔn)文號的劣質(zhì)試劑，進(jìn)貨統(tǒng)一由科室管理，自配試劑須嚴(yán)格6、建立完整的HIV篩查實驗室標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，并應(yīng)嚴(yán)格按程序執(zhí)行。7、當(dāng)日發(fā)出的全部檢驗報告單須經(jīng)當(dāng)日科室總值班人員嚴(yán)格審核后方可發(fā)8、科室在完成嚴(yán)格的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制體系的同時，應(yīng)逐步建立全面質(zhì)量控制體系，對標(biāo)本的采集，運送，保存等納入嚴(yán)格的管理之中。二十二、室內(nèi)質(zhì)控失控分析管理制度室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)失控時，應(yīng)填寫失控報告單，并上交專業(yè)主管，由專業(yè)主管做出是否發(fā)出與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批患者標(biāo)本檢驗報告并分析及登記失控原因。失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、試劑、校此時，首先要盡量查明導(dǎo)致的原因，然后再隨機挑選出一定比例(例如5-10%)的患者標(biāo)本進(jìn)行重新測定，最后根據(jù)既定標(biāo)準(zhǔn)判斷先前測定結(jié)果是否可接受，二十三、外部質(zhì)控血清的制備和保存1、質(zhì)控血清的制備和保存(以ELISA試驗檢測HIV抗體為例)(2)、外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值(Cut-off)的2～3倍為2、外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活，3000r/min,離心15min。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制(可加入不影響檢測結(jié)果的防腐劑)用0.2μm濾膜過濾除菌。3、外部對照質(zhì)控血清的保存(1)、按一周實驗用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃凍存于非自動除霜(2)、外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放2~8℃,供一周內(nèi)4、外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。5、外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異(CV<20%=,并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA反應(yīng)的防腐二十四、儀器的使用維護(hù)(一)、設(shè)立常用儀器的維護(hù)及校準(zhǔn)制度，以保證正常運轉(zhuǎn)。每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進(jìn)行校準(zhǔn)并保留記錄。2、移液器1年至少應(yīng)該標(biāo)定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進(jìn)行校準(zhǔn)。2、儀器應(yīng)放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下。4、操作環(huán)境溫度應(yīng)在15°C-40°C之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間。6、對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參7、使用后蓋好防塵罩。出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸HIV篩查實驗室儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程美國寶特酶標(biāo)分析儀操作維護(hù)規(guī)程1.儀器原理和適用范圍1.1采用垂直光路進(jìn)行光電比色，檢測標(biāo)準(zhǔn)液和待檢物質(zhì)的吸光度，經(jīng)內(nèi)置微機進(jìn)行分析計算，測出待檢物質(zhì)的含量。1.2適用于ELISA檢測、微生物微孔板培養(yǎng)檢測、化學(xué)或生物化學(xué)微量分析法檢測。1.3儀器工作條件：適宜溫度10℃~30℃;相對濕度<70%;電源220×1.4環(huán)境條件——防塵、防磁、防震、避強光、無腐蝕性氣體。2.技術(shù)參數(shù)2.1波長：100nm-700nm;配置有405nm、450nm、492nm、630nm;2.2濾光片特性：正確度±3.0nm;半寬度≤12nm;峰值透射比≥35%;2.3測量范圍及吸光度誤差：測量范圍0.1～3.0A;吸光度誤差在0.1～1.0A時為1.0%(±0.01A)、1.0～2.0A時為2.0%(0.02A)、2.0～3.0A時為10.0%2.4線性誤差：線性誤差0.1～1.0A時為±1.25%、1.0～2.0A時為±2.0%、2.0～3.0A時為±8.0%;2.7工作方式：單波長或雙波長；2.8顯示：120×100英文觸摸屏幕；2.11輸出：原始吸光度、定性判定結(jié)果、S/CO值、濃度值及質(zhì)控值；3.操作步驟3.1打開電源后儀器進(jìn)入自檢程序，自檢正常時熒屏顯示主菜單，應(yīng)預(yù)熱20分鐘以上后儀器方能穩(wěn)定，其后進(jìn)行實際檢測操作；3.2根據(jù)儀器《使用說明書》進(jìn)行編程，對檢測方式(臨界值檢測方式、濃度檢測方式、吸光度檢測方式)的項目設(shè)置、孔位設(shè)置、波長選擇、計算方式、陰性對照值限定、定性方式選擇、振板方式、無效性判斷、孔位、報告方式、標(biāo)準(zhǔn)值設(shè)置等進(jìn)行編程，請記住您設(shè)置的檢測項目及方式的程序編號，以便能直接調(diào)用；3.3根據(jù)預(yù)先設(shè)置的檢測項目及方式的程序編號，或按3.2要求臨時實用編程，按照儀器《使用說明書》進(jìn)行人機對話操作。3.4按樣品測試鍵，選擇布板方式、振動方式、測定項目，輸入樣品號，設(shè)定空白、質(zhì)控、對照等，按開始鍵開始檢測，顯示數(shù)據(jù)后按打印鍵打印。3.5若使用外接電腦的酶標(biāo)儀軟件接受、顯示、打印、儲存，按其說明書操3.6檢測結(jié)束后，按"返回鍵"返回主菜單進(jìn)入關(guān)閉程序，等待儀器提示關(guān)閉電源，拔下電源插頭，罩上防塵罩。4.注意事項4.1ELX-800酶標(biāo)分析儀安全分類為I類B型，管理分類為II類，出廠前業(yè)經(jīng)嚴(yán)格調(diào)試與檢驗，用戶必須在專業(yè)技術(shù)人員指導(dǎo)下開機檢修；4.2電源必須接有可靠的接地線，更換濾光片、調(diào)試光源燈應(yīng)在專業(yè)技術(shù)人員指導(dǎo)下進(jìn)行，更換保險管前應(yīng)切斷電源，換用相應(yīng)規(guī)格的保險管。5.儀器維護(hù)5.1日常維護(hù)——酶板托盤日常應(yīng)注意清潔勿使污染，儀器外表有污物時，應(yīng)用中性洗滌劑搽除，并及時用清水抹凈。5.2定期、期間核查按儀器設(shè)備管理程序進(jìn)行，定期每年一次、其間1-2次，采用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行核查。6.相關(guān)記錄儀器使用記錄、定期維護(hù)記錄、期間核查記錄、校準(zhǔn)記錄美國寶特ELX-800酶標(biāo)儀日常操作指南1.開機后儀器出現(xiàn)主菜單2.按“READ”鍵，顯示：SELECTASSAYNUMBER:01(項目號)3.用數(shù)字鍵輸入相應(yīng)的項目代號(如：02:代表HBsAg等)4.選定檢測項目后，按ENTER(回車鍵),顯示：ENTERMUMERSAMPLES10(樣品數(shù)),按數(shù)字鍵選擇所要檢測的樣本數(shù)，如10代表檢測10個樣本數(shù)。5.選擇樣本數(shù)后，連續(xù)按ENTER(回車鍵)3次，檢測板載入檢測程序，顯示：RUNNING:HBsAg(項目),提示正在進(jìn)行檢測，請6.檢測完畢后，儀器自動計算檢測值，并自動打印結(jié)果1、平常不用時，拔掉電源插頭。一定要拿下測試完的反應(yīng)板，千萬不要將反應(yīng)板留在載物臺上，并且要把載物臺彈進(jìn)酶標(biāo)儀內(nèi)。3、若有液體濺到載物臺或酶標(biāo)儀外壁，應(yīng)用濕抹布及時擦去。酶標(biāo)儀軟件操作幫助編美檢驗中文報告系統(tǒng)-酶標(biāo)儀-BR680-[報告錄入-—2006/09/15]性別年齡備注6始文檔1-hcroro端美檢驗中文報告.代號名稱33參考值陰性報告單代號HBsA酶標(biāo)儀設(shè)項目需要設(shè)項目的公式，在參數(shù)里設(shè)置如圖。比如設(shè)HBsAg先要對著試劑的說明書設(shè)CUTOFF公式然后可以設(shè)置下弱陽性判斷公式和陽性判斷公式，如有些項目不需要弱陽性可以不填弱陽性公式。陰性對照的上下限和陽性對照的上下限也是根據(jù)試劑說明書來的，HbsAg里試劑說明書里規(guī)定為陰性對照做出來低于0.05的都按0.05計算那我們就設(shè)置為陰性對照下限為0.05。檢驗項目維護(hù)名稱陰性通道號臨床意義|打印順序設(shè)定|濾光片波長對照表.說明：公式中陰、陽對照、空白請測試模式·終點法で兩點法空白形式·空氣試劑試劑維護(hù).濾光片設(shè)置在濾光片波長對照表里設(shè)置按照儀器的濾光片來設(shè)置。濾光片號波長1234新增(A)存盤(s)羅放棄(G昌打印P導(dǎo)出(Q)退出(X)試劑維護(hù)里可以填試劑的批號，廠商，有效期。常用試劑常用試劑廠商方法設(shè)置好以后按重啟接口會出來酶標(biāo)儀操作界面。測試項目選你需要做的項目，在下面的微孔板里布酶標(biāo)板里標(biāo)本放的位置一定要和酶標(biāo)板里放的一樣。板子布好后可以存為模板用于以后做的時候不用重新布板。如做不了96個標(biāo)本可以在標(biāo)本號區(qū)間里選取當(dāng)天所做標(biāo)本的數(shù)量，全部設(shè)置好后就可以按測試讀板。標(biāo)本選擇標(biāo)本選擇測量參數(shù)參考波長630(4)空白形式空氣測試波長450(1)參考波長630(4)空白形式空氣振板頻率高進(jìn)板方式隨續(xù)測試板號060915HBsAg004退出×235678NCNC123456B7B89CDEFGH測試好數(shù)據(jù)如下圖：黑的就代表陰性，咖啡色代表弱陽性，紅的代表陽性。CDEFGM52.18360.1040.05070.2230.286890.132按預(yù)覽可以看原始結(jié)果，會提示你數(shù)據(jù)是否要入庫，如板子做的好的話就直接入庫，入庫就可以入到病人信息里了，如做的不好可以先按否預(yù)覽原始結(jié)果。如下3圖：CD配標(biāo)位測tHRRRICutoff數(shù)據(jù)尚未入庫或修改后未重新入庫，你是否要入庫?EFGⅡ編美檢驗中文報告系統(tǒng)-酶標(biāo)儀-BR680-【報告錄入-—2006/09/15]輸入C)查詢①)統(tǒng)計⑤工具I質(zhì)控(Q)字典@)設(shè)置(@)幫助QD重啟接口批打印批輸入查詢陽性表總匯表∑統(tǒng)計品項目零注銷?幫助檢驗日期2006/09/15姓名標(biāo)本號姓名住院號類型床號科室始22程瑞美檢驗中文報告..rw都市水族灣-群 B789+CD測試日期2006/09/15秒秒秒秒C酶標(biāo)儀參數(shù)設(shè)定通訊口LCOM流控制0無命令超時(短)讀板超時(長)80數(shù)據(jù)二次處理(為空表示保持原始結(jié)果)錯誤結(jié)果表示為結(jié)果錯誤(目標(biāo)儀器為空時使用默認(rèn)值，不要隨意改動!)□原始結(jié)果隱藏S/CO值□原始結(jié)果隱藏陰性結(jié)果標(biāo)識確定取消瑞美檢驗中文報告系統(tǒng)-酶標(biāo)儀-BR680BcAb乙肝核心抗體陰性參考波長4630弱陽性公式0D2有效性校驗陰性對照上限陽性對照下限陽性對照上限#除振板頻率◎高○中○低備注酶標(biāo)儀測試BR680標(biāo)本選擇C普通標(biāo)本sC空白對照BCC陰性對照NCC陽性對照PC模板測試項目HBsAg乙肝表面抗原振板頻率進(jìn)板方式陣?yán)m(xù)陽性公式空白形式空氣存為模板冊除模板測試(D清空(C)查詢(@設(shè)置(S)微孔板BCDEFGNST1ST2ST3ST4ST5122345678945濃度設(shè)定(D)89C標(biāo)準(zhǔn)品濃度設(shè)定濃度濃度224488Ⅱ、TECAN洗板機的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)實驗室名稱制定日期嘉峪關(guān)市第二人民醫(yī)院檢驗科HIV篩查實驗室洗板機標(biāo)準(zhǔn)操作程序NEYJH-SOP-YQ-0022007年07月26日d.上班時用Prime:Ch2灌注洗滌通道。Prime:Ch2,按yes鍵洗板機自動用洗滌液灌注洗滌通道。yes,按yes整板洗滌(即12排96孔洗滌),洗板機將按照程序進(jìn)行5-6次的重復(fù)洗滌，洗滌完成后洗板機將自動發(fā)出鳴叫聲，提示洗板結(jié)束。f.如果洗滌不是整板，通過-,+調(diào)節(jié)到所需要的板條數(shù)，按yes鍵洗板機將按照所設(shè)定的板條數(shù)進(jìn)行5-6次的重復(fù)洗滌，洗滌完成臨床實驗室后洗板機將自動發(fā)出鳴叫聲，提示洗板結(jié)束。h.完成清洗后，關(guān)閉洗板機電源。【洗板機的維護(hù)保養(yǎng)】1.平常不用時，拔掉電源插頭。2.每天洗板機工作結(jié)束時，要對內(nèi)外其進(jìn)行清潔，用濕抹布擦洗洗板機的外壁及載物臺，以保證其潔凈。用蒸餾水將所有的管道清洗一遍，防止洗液的結(jié)晶堵塞管道。3.及時倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機的故障。4.保證待洗的反應(yīng)板的孔邊緣不要過高且水平，以免造成吸液針損傷。5.定期將洗液及廢液管道拆卸下來進(jìn)行沖洗，以保證管道的通暢。【目的】規(guī)范儀器設(shè)備的操作程序，保證加樣器的正常狀態(tài)。【適用范圍】本實驗室加樣器的操作。【操作步驟】一、設(shè)定容量值：轉(zhuǎn)動加樣器的調(diào)節(jié)旋鈕，反時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕，可提高設(shè)定移液量。順時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕，可降低設(shè)定移液量。在調(diào)整設(shè)定移液量的旋鈕時，不要用力過猛，并應(yīng)注意使移液器顯示的數(shù)值不超過其可調(diào)范圍。二、預(yù)洗：當(dāng)裝上一個新吸頭時應(yīng)預(yù)洗吸頭，先吸入兩次液體并排回原容器2、取液之前，所取液體應(yīng)在室溫(15℃-25℃)平衡。1、一般維護(hù)可用中性洗滌劑清潔，或者用60%的異丙醇，然后用蒸餾水反【目的】【適用范圍】【操作步驟】二、殺菌操作：按一下"殺菌(UV)"鍵，語音提示："殺菌啟動",紫外燈打開進(jìn)行殺菌，50分鐘后再按一下"殺菌"鍵，語音提示："殺菌關(guān)閉"。關(guān)),可升降前視窗，當(dāng)前視窗達(dá)到200MM高度時會自動停下(此時前視窗下沿與窗高標(biāo)志線相齊),如繼續(xù)升降前視窗，約延時1S后前視窗會繼續(xù)運動，直到松開手動開關(guān)為止。在風(fēng)機運轉(zhuǎn)狀態(tài)下，當(dāng)前視窗高度超過或低于200時，系統(tǒng)聯(lián)鎖報警啟動，控制面板上的"窗高異常"指示燈亮，語音提示："窗高異常",此時應(yīng)將前視窗調(diào)整到200高度，報警自動消除。四、風(fēng)機啟動/停止操作：按鍵"風(fēng)機WM",風(fēng)機開始運轉(zhuǎn)。由于風(fēng)機機械異常",這是正常情況。如果風(fēng)機運轉(zhuǎn)正常，且各過濾器狀態(tài)良好，約1分鐘后，熱穩(wěn)定后再開始工作。)五、輔助照明操作：按下"照明LIGHT"鍵，語音提示："照明啟動",照明七、鍵盤鎖定功能操作：按住"鍵鎖"鍵約2S后，指示燈亮，語音提示："鍵盤鎖定",此時前面開啟的鍵盤已鎖定。當(dāng)需要解鎖時按住"鍵鎖"鍵約2S1、日常維護(hù)可用70%的乙醇，或其他中性洗滌劑將生物安全柜的內(nèi)、外部電熱恒溫水浴箱操作規(guī)程本電熱恒溫水浴箱主要用于科研單位、醫(yī)療單位及化驗所檢查化驗病理血清等用。2.技術(shù)性能：工作環(huán)境：常溫常壓條件下正常工作。技術(shù)指標(biāo)：溫度調(diào)節(jié)范圍：37℃~65℃溫度均勻性：±1℃3.使用方法：3.1使用是必須加入溫水，可縮短加熱時間和節(jié)約用電。3.2打開電源開關(guān)，電源指示燈亮表示電源接通。3.3旋轉(zhuǎn)恒溫控制器旋鈕，加熱指示燈亮表示電源接通，當(dāng)溫度表上的溫度達(dá)到所需使用的溫度時，將恒溫控制器的旋鈕調(diào)整在恒溫指示燈忽亮忽熄點，待數(shù)分鐘后即能自動恒溫控制。3.4恒溫控制器的刻度，僅可作溫度對照指示，并非溫度指示刻度。4.1為保證水浴箱溫度的準(zhǔn)確性必須每日使用溫度計測量水浴箱內(nèi)水溫，并做好日溫度記錄。4.2每半年由設(shè)備科檢測校正一次，且附有原始記錄。5.1箱外殼必須有效接地。5.2在未加水前，切勿開電源，以防止電熱管內(nèi)的電熱絲燒壞。5.3非必要時，請勿拆開右冊蓋板，以利安全。1.儀器分析原理和適用范圍1.1原理：主要利用其高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的高離心力場的作用，可將不同大小或不同密度的顆粒分開。顆粒是指細(xì)胞、細(xì)胞器或病毒、大分子等。1.2適用范圍：血清、血漿或體液標(biāo)本的離心處理。2.儀器性能參數(shù)2.1最大轉(zhuǎn)速：7000rpm2.2時間控制：0-30min/連續(xù)/短時運轉(zhuǎn)2.3最大容量：4×60×7ml2.5最大離心力：4920g2.7重量：41Kg3.操作規(guī)程3.1樣品準(zhǔn)備：未抗凝標(biāo)本垂直放置30-60分鐘后離心。3.2標(biāo)本配平。3.3標(biāo)本放入離心機。3.4蓋上離心機蓋，鎖上安全鎖。3.5打開離心機電源，設(shè)定離心轉(zhuǎn)速及離心時間。3.6一般檢測項目的未抗凝血離心3000轉(zhuǎn)(rpm)7分鐘或2400轉(zhuǎn)(rpm)15分鐘。抗凝血或特殊檢測項目的樣本離心按作業(yè)指導(dǎo)書設(shè)定。3.7待離心機轉(zhuǎn)速停止后或離心轉(zhuǎn)速降至0時，輕輕取出標(biāo)本，關(guān)閉離心機3.8離心后立即將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至干凈不含抗凝劑或防腐劑的試管，同時此管應(yīng)具有可識別標(biāo)簽。4.維護(hù)保養(yǎng)項目：每日用軟布和中性洗滌劑清潔儀器內(nèi)外表面，離心轉(zhuǎn)筒每周及需要時消毒。5.校準(zhǔn)：廠家校準(zhǔn)。6.相關(guān)記錄：儀器使用記錄、定期維護(hù)記錄、期間核查記錄、校準(zhǔn)記錄(-)高壓蒸汽滅菌器用途：本滅菌器用于醫(yī)院，生物實驗室等進(jìn)行常規(guī)濕熱滅菌。無需操作人員看管，全部滅菌過程可自動完成，工作結(jié)束后有聲音提示。(二)高壓蒸汽滅菌器主要技術(shù)參數(shù)：工作溫度115℃~132℃滅菌時間0～60分鐘可調(diào)工作電壓額定壓力內(nèi)桶容積外型尺寸(三)高壓蒸汽滅菌器性能特點：(四)高壓蒸汽滅菌器使用方法：2、滅菌操作：3、高壓蒸汽滅菌器故障處理①工作進(jìn)程中，若出現(xiàn)異常，按住故障鍵即可停止加熱同時排除壓力；②機內(nèi)壓力超高時，超壓保護(hù)系統(tǒng)會自動停止加熱，壓力回落后會自動恢復(fù)。③工作時如迂突然停電會終斷本次工作程序。如若要取出物品可按住手動排閥壓力減至零時可打開門蓋。(五)高壓蒸汽滅菌器維護(hù)、保養(yǎng)和存放①本機工作用水盡量使用蒸餾水，特別是水咸較大的自來水不可用。(如使用自來水視不同水質(zhì)而定可否);②鍋體內(nèi)底部的測水電極應(yīng)經(jīng)常保持清潔，特別是經(jīng)常使用自來水的用戶，應(yīng)定期擦拭；③電源開關(guān)設(shè)有漏電保護(hù)器，每月應(yīng)進(jìn)行一次漏電保護(hù)測試，以確保功能正常；④本機若長期停用，應(yīng)將鍋體內(nèi)及廢水桶內(nèi)的水排HIV篩查實驗室檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程I、HIV測定(膠體金法)時帶有一條質(zhì)控包被線作為對照，所以當(dāng)出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線和一條(或兩條)紅色反應(yīng)線時判斷為陽性。當(dāng)待測標(biāo)本HIV如無紅色質(zhì)控線(或只有反應(yīng)線)出現(xiàn)，則實驗無效。本方法適用于血清標(biāo)本檢(1)標(biāo)本類型：血清。(2)標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊。(3)標(biāo)本儲存和運輸：新鮮血清2～8℃貯存時間不超過72小時。(4)標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染，嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測定。6、試劑(1)試劑名稱：人類免疫缺陷病毒(HIV-1+2)抗體診斷試劑(膠體金法)。(2)試劑生產(chǎn)廠家：杭州艾康。北京萬孚(3)包裝規(guī)格：1個測試/包裝袋；25個測試/盒。(4)試劑盒組成：單人份包裝測試板，每盒25人份。說明書一份。HIV-1+2抗體診斷試劑盒操作流程(2)、用塑料吸管吸2-3滴血清標(biāo)本(70-100微升)加入標(biāo)本孔中。(3)、無效：如無紅線(或只有反應(yīng)線)出現(xiàn)，表明實驗無效，須重新檢測。其他體液或混合樣品可干擾反應(yīng)，不可用EDTA抗凝的全血血漿。正常人為陰性監(jiān)測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體，用于幫助檢測受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品檢測陽性者，需進(jìn)一步確證。必須按規(guī)定使用經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有"檢定合格"防偽標(biāo)1、檢驗?zāi)康模簯?yīng)用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法原理(ELISA)定性檢測人血清、血漿標(biāo)本中的HIV(1+2)型抗體的測定，用于HIV感染的輔助診斷，抗HIV藥物治療的效果的監(jiān)測。采用夾心ELISA方法檢測血清或血漿標(biāo)本中人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體，預(yù)包被高純度基因重組HIV(1+2)型抗原，可與標(biāo)本中的抗-HIV抗體反應(yīng)，加入HRP標(biāo)記HIV(1+2)型抗體抗原結(jié)合，形成抗原一抗體一酶標(biāo)抗原復(fù)合物，然后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀檢測吸光度(OD值),根據(jù)OD值判斷HIV抗體的存在與否。3、性能參數(shù)靈敏度高(0.5ng/ml)(1)標(biāo)本類型：血清，血漿。(2)標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊(3)標(biāo)本儲存和運輸：室溫放置不超過8小時，2-8℃不超過72小時，-20℃可長期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融(4)標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染，嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測定。(1)試劑名稱：人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體診斷試劑盒。(2)試劑生產(chǎn)廠家：北京萬泰生物藥業(yè)有限公司(3)包裝規(guī)格：96T/Kit性及陰性對照血清；④、顯色劑A液和B液；⑤、此外還有濃縮洗滌液、終止液、自封袋、封板膜、說明書等。移液器：上海求精，每年由國家計量單位進(jìn)行一次校準(zhǔn)。8、校準(zhǔn)程序送嘉峪關(guān)市計量檢測所校準(zhǔn)①、配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備②、編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板設(shè)陰性對照3孔、陽性對照I型、Ⅱ型各1孔，空白對照1孔。③、加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽性對照100μ1,用封板膜封板后置37℃溫育30min。④、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇5次程序，洗板后拍干。⑤、加酶：每孔加酶結(jié)合物100μ1(空白對照孔除外),充分混勻，用封板膜封板后置37℃溫育30min。⑥、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇5次程序，洗板后拍干。。⑦、顯色：每孔加入顯色劑A液和B液各50μl,輕輕振蕩混勻，封板后置37℃避光顯色15min。⑧、測定：每孔加終止液50μ1,輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm),空白調(diào)零，讀取各孔OD值。⑨、判斷結(jié)果：計算臨界值(cut-off)(CO)值。臨界值=陰性對照A均值+0.12正常情況下，陰性對照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對照的OD值>0.1應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.1,應(yīng)重復(fù)實驗。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。正常情況下，陽性對照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對照的OD值<0.8應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實驗。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。注意：對于篩查陽性標(biāo)本，應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按照《全國HIV檢測管理規(guī)范》送HIV確證實驗室進(jìn)行確證試驗。每塊板設(shè)陰陽性及空白對照，并于每次試驗用自制質(zhì)控血清作質(zhì)控，將質(zhì)控血清孔OD值采用"即刻法"計算或標(biāo)在質(zhì)控圖上，如質(zhì)控有效，表明試驗可靠；13、患者檢驗結(jié)果的可報告區(qū)間陽性表示HIV病毒感染。14、臨床意義用于HIV感染的輔助診斷，抗HIV藥物治療的效果的監(jiān)測。按規(guī)定必須使用經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有"檢定合格"防偽標(biāo)應(yīng)用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法原理(ELISA)定性檢測人血清、血漿標(biāo)本中的HIV(1+2)型抗體的測定，用于HIV感染的輔助診斷，抗HIV藥物治療的效果的采用夾心ELISA方法檢測血清或血漿標(biāo)本中人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體，預(yù)包被高純度基因重組HIV(1+2)型抗原，可與標(biāo)本中的抗-HIV抗體反應(yīng)，加入HRP標(biāo)記HIV(1+2)型抗體抗原結(jié)合，形成抗原一抗體一酶標(biāo)抗原復(fù)合物，然后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀檢測吸光度(OD值),根據(jù)OD值判斷HIV抗體的存在與否。靈敏度高(0.5ng/ml)(1)標(biāo)本類型：血清，血漿。(2)標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊(3)標(biāo)本儲存和運輸：室溫放置不超過8小時，2-8℃不超過72小時，-20℃可長期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融(4)標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染，嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測定。(1)試劑名稱：人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗體診斷試劑盒。(2)試劑生產(chǎn)廠家：上海科華生物工程股份有限公司性及陰性對照血清；④、顯色劑A液和B液；⑤、此外還有濃縮洗滌液、終止液、①、配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水25倍稀釋至1000ml備②、編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板設(shè)陰性對照2孔、陽性對照3孔，空白對照2孔。③、加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽性對照100μ1,用封板膜封板后置37℃溫育60min。④、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇5次程序，洗板后在干凈紗布⑤、加酶：每孔加酶結(jié)合物100μ1(空白對照孔除外),充分混勻，用封板膜封板后置37℃溫育30min。⑥、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機選擇5次程序，洗板后在干凈紗布置37℃避光顯色10min。⑧、測定：每孔加終止液50μl,輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630nm),空白調(diào)零，OD臨界值=陽性對照值×10%。(若陽性對照OD值>2.5按2.5計算)正常情況下，陰性對照孔的OD值≤0.08。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。若1孔陰性對照的OD值>0.08應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對照的OD值>0.08,應(yīng)重復(fù)實驗。正常情況下，陽性對照孔的OD值≥0.80。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。若1孔陽性對照的OD值<0.8應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陽性對照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實驗。HIV檢測管理規(guī)范》送HIV確證實驗室進(jìn)行確證試驗。血清孔OD值采用"即刻法"計算或標(biāo)在質(zhì)控圖上，如質(zhì)控有效，表明試驗可靠；必須按規(guī)定使用經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有"檢定合格"防偽標(biāo)1.檢驗?zāi)康闹饕怯糜谌祟惷庖呷毕莶《镜牡脑\斷、了解病毒感染者的恢復(fù)情況、療效2.方法原理采用ELISA夾心法，反應(yīng)的微孔板包被基因工程重組HIVAg,加入待測血液，洗板后，再加入HIVAg-HRP,與抗原形成結(jié)合，加入底物TMB時顯色，判斷陰陽性結(jié)果。3.性能指標(biāo)此方法快速簡便、特異性強、檢測靈敏度度0.5NCU/ml。4.1標(biāo)本類型：靜脈血或動脈血的血清或血漿標(biāo)本均可作為檢測標(biāo)本(抗凝劑可用肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA,抗凝劑的質(zhì)量應(yīng)符合化試藥品要求——化學(xué)純或分析純，使用的比例以廠家推薦為準(zhǔn));其他體液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等體液可以作為檢測標(biāo)本，但加熱滅活的血清和血庫的庫存血則不宜作為檢測標(biāo)本。4.2標(biāo)本留取：以空腹為宜，收到標(biāo)本后最好立即離心留取血清或血漿(凝固血應(yīng)待其充分凝固后收集血清),不能有殘留的紅細(xì)胞、纖維蛋白絲，使用肝素治療的病人宜在肝4.3標(biāo)本保存：留取的標(biāo)本最好在3小時內(nèi)檢測，不能立即檢測的應(yīng)放置于2-8℃最長達(dá)14天(可以含有凝塊但要密閉以防蒸發(fā)),或者-10℃最長達(dá)14天(不能反復(fù)凍融也不能4.4標(biāo)本容器：盛放標(biāo)本的容器應(yīng)為潔凈的一次性真空采血管、玻璃試管、一次性的不同規(guī)格的塑料離心管4.5標(biāo)本外送：如涉及到需要外送的標(biāo)本，必須以規(guī)定的容器(0.5ml塑料離心管)存放并密封，并根據(jù)郵寄規(guī)則和要求進(jìn)行包裝，運送時還要放入冰袋(2-8℃)或干冰(-10℃)由專人運送至指定地點指定接收人。4.6拒收標(biāo)本：凡與4.1-4.5所述內(nèi)容不符的標(biāo)本，檢驗人員應(yīng)向臨床或就診者說明拒收標(biāo)本的原因，并提出解決的方案或建議。5.2分析試劑：為山東濰坊3V公司提供的配套的HIV(1+2)試劑盒，規(guī)格為96test/盒，2-8℃貯存，有效期12個月；在效期內(nèi)使用試劑。6.1每孔加入待測標(biāo)本50微升。6.2充分混勻，封板，置37℃孵育60分鐘。6.3手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。6.4除空白對照孔外，每孔加入酶結(jié)合物50微升，充分混勻，封板，置37℃孵育306.5手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。6.6每孔加顯色劑A液、B液各50微升，充分混勻，封板，置37℃孵育15分鐘。6.7每孔加入終止液50微升，混勻。7.1每次實驗設(shè)陰性、陽性各2孔，并設(shè)空白對照1孔隨常規(guī)標(biāo)本一起檢測。7.2質(zhì)控結(jié)果登記到本年度的"免疫室定性檢測項目室內(nèi)質(zhì)控登記表"。7.3一旦發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)即時查找和分析原因，并在該結(jié)果欄作詳細(xì)的批注和記錄解決的過程；失控情況處理及原因分析詳見8"失控處理"。7.4每月進(jìn)行質(zhì)控小結(jié)。并將原始數(shù)據(jù)打印和存盤留檔。8.1失控情況處理：操作者在分析質(zhì)控結(jié)果時，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫失控報告單，上交專業(yè)室主管(組長),由專業(yè)室主管(組長)做出是否發(fā)出或重測與質(zhì)控品8.2失控原因分析：失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、照物以外的原因則應(yīng)判為真失控，與對照物相關(guān)的同批次病人標(biāo)本重新檢測；如是對照物本身的原因，則判為假失控，與對照物相關(guān)的同批次病人標(biāo)本不必重測，可以發(fā)出報告。當(dāng)失控信號出現(xiàn)時，可以采取以下步驟去尋找原因：8.2.1立即重測同一對照物。此法主要用于查明人為誤差，每一步都應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)的操作，以查明失控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測的質(zhì)控結(jié)果應(yīng)在允許范圍(在控),可以認(rèn)為該批次的病人標(biāo)本不必重測。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。8.2.2新開一瓶對照物，重測失控項目。如果新開的對照血清結(jié)果正常，那么原來那瓶對照血清可能過期或在室溫放置時間過長而變質(zhì)，或者被污染，此時可以認(rèn)為該批次病人標(biāo)本不必重測。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。8.2.3進(jìn)行儀器維護(hù)，重測失控項目。檢查儀器狀態(tài)，檢查光源是否更換，對儀器進(jìn)行清洗維護(hù)，然后再測質(zhì)控品，如在控，則說明是儀器原因，該批次的病人標(biāo)本應(yīng)重測。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。8.2.4更換另一試劑盒，重測失控項目。檢查試劑是否過期或貯存環(huán)境，更換試劑盒重新檢測對照物，如在控則說明試劑存在問題，該批次病人標(biāo)本應(yīng)重測。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。9.注意事項9.1從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡30分鐘后方可使用，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時，待測標(biāo)本應(yīng)需置平衡30分鐘后再行測試。9.2使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄1-2滴后垂直滴加。9.3封片不能重復(fù)使用。9.4結(jié)果判斷需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。9.5不同批號的試劑不能混用。9.6待測標(biāo)本不可用NaN3防腐，如需稀釋標(biāo)本，請用小牛血清稀釋。9.7本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。10.結(jié)果計算10.1CutoffValue計算：COV=陰性對照平均值+0.1010.2標(biāo)本OD值≥COV為陽性，標(biāo)本OD<COV為陰性11.警告值當(dāng)HIVOD值略大于COV一般視為低濃度區(qū)或灰區(qū)。12.1標(biāo)本的吸光度值<COV被認(rèn)為HIV陰性，反之則被認(rèn)為陽性結(jié)果。12.2對處于灰區(qū)或可疑標(biāo)本，應(yīng)重復(fù)檢測或進(jìn)一步做確證試驗。12.3對于假陽性結(jié)果的原因可能有：血清標(biāo)本中含有顆粒性物質(zhì)(紅細(xì)胞)或纖維蛋白絲、前一份血清標(biāo)本含有高滴度的HIV使得在加樣時存在攜帶污染、非特異性反應(yīng)存在。12.4對于其他體液標(biāo)本和血庫庫存血的檢測結(jié)果只能作為參考。12.5對于反復(fù)凍融的血標(biāo)本或含有顆粒性物質(zhì)的血標(biāo)本應(yīng)離心后再進(jìn)行檢測。12.6肝素治療病人的血標(biāo)本可能由于部分凝固而存在潛在的纖維蛋白絲，因此可能產(chǎn)13.1對任何一份標(biāo)本(包括質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品及檢測試劑等)都應(yīng)視其為具有傳染性，操作人員在工作時應(yīng)戴乳膠手套、穿工作服。13.2一旦發(fā)生標(biāo)本容器劃破手或身體、液體濺進(jìn)眼睛等粘膜處，應(yīng)立即用大量的水沖洗，同時向上級醫(yī)師或科領(lǐng)導(dǎo)報告，必要時施以丙種球蛋白預(yù)防。14.常見的誤差源14.1儀器原因：儀器的性能、儀器的校準(zhǔn)等。14.2試劑原因：試劑過期、定標(biāo)14.3標(biāo)本原因：標(biāo)本處理、收集不符合要求等。14.4人為原因：結(jié)果填寫錯誤等。15.參考文獻(xiàn)山東濰坊三維公司人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒說明書。全國臨床檢驗操作規(guī)程室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒炇颐Q編號制定日期XX第二人民醫(yī)院檢驗科ELISA方法NEYJH-SOP-0022007年07月26日【方法】室使用3-6個月的量)。2、通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源(基因工程或合成多肽),片段的組合(按比例混合或化學(xué)合成),片段的長短等判斷試劑的優(yōu)劣。3、參考室間質(zhì)評報告中對試劑的評價結(jié)果，了解不同試劑的質(zhì)控成績。4、根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評價結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。【儀器質(zhì)控】為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍),水浴箱(溫箱),洗板機和酶標(biāo)儀。1.移液器：ELISA加樣量小(5-100u1),其準(zhǔn)確性直接影響實驗結(jié)果，利用2.水浴箱：經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實測溫度3.洗板機：每個廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul,人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞。持良好的工作性能。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以“*”或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000～2.900,而其線性范圍僅0.000～2.000,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意。【酶標(biāo)儀校正程序】1、濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用UV-2201型紫外-可見分光光度計(波長精度±0.3nm)于可見光區(qū)對每個濾光片進(jìn)行掃描，其檢測值與標(biāo)定值之差為濾光片波長精度。一般nm550nm或630nm濾光片。450nm濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長為2、通道差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯(杯底須光滑，透明，無污染)以酶標(biāo)板架作載體，將其(內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右)置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，于490nm不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示。孔間差的測量是選擇同一廠家，同一批號酶標(biāo)2板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.100A左右)先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，于490nm處檢測，其誤3、零點飄移(穩(wěn)定性觀察):取8只小孔杯分別置于8個通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測一次，觀察各個通道44、精密度評價：每個通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同濃度的甲基橙溶解，蒸餾水調(diào)零，于490nm作雙份平行測定，每日測二次(上下午各一次),連續(xù)測定205、線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制5個系列的溶液，于490nm平行測8次，取其均值。計算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計誤差S,并用±入3種不同濃度的溶血液(測定波長為490nm,校正波長為585nm),先后于8個通道檢測，每個通道測3次，比較各組之間是否具有統(tǒng)計學(xué)差異，以考察雙波長1、標(biāo)本采集時應(yīng)盡量避免溶血，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本會增加非特異2、細(xì)菌污染的標(biāo)本同樣的道理也易產(chǎn)生假陽性，因菌體中可能含有內(nèi)源性3、抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗5、ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上，標(biāo)本間的污染要盡量避免，尤其不應(yīng)1、加樣應(yīng)用微量移液器(加樣槍)按規(guī)定的量加入微孔板底部，避免加在1、抗原抗體反應(yīng)需要在一定溫度下(37°C),經(jīng)過一定的時間才能達(dá)到反遍(即注滿孔后即甩去);3)微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動；4)2、一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度(一般為37°C,10-15分鐘)恒定反3、或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0.2左右使的時間而恒定反應(yīng)時間。1、顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色(30分鐘內(nèi))。2、常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種，以后者最為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色，測定波長為490nm;TMB終止后顯黃色，測定波長為450nm,二種底物的校正波長均用630nm。3、使用雙波長的優(yōu)點可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光【分析后質(zhì)控】【報告方式】1、夾心法和間接法以S/COV≥1為陽性；競爭法與中和法以S/COV<1為陽2、COV的計算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：不足0.05時按0.05計),此公式由P/N>2.1換算而來，常用于夾心法。2)、COV=0.5×N,從抑止率公式換算而來，常用于競爭，中和法。3)、COV=N+C(C為常數(shù)),用于間接法。4)、COV=CXP+N(C為常數(shù)),用于間接法。此公式最客觀，但對廠家要求很高，陰陽性對照測定值要基本恒定。的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上。2、現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要【記錄】1、所有實驗的原始資料均應(yīng)存檔；所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊；原始登界值S/C.0≥1,高值質(zhì)控血清S/C.0≥10,正常人血清A值在0.05～0.07之間。【"即刻性"質(zhì)控】2、計算X和S;>規(guī)定值，失控。室間質(zhì)量評價的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(EQA)實驗室名稱編號制定日期XX第二人民醫(yī)院檢驗科ELISA方法NEYJH-SOP-0032007年08月01日【目的】【該SOP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作【基本概念】【質(zhì)量控制】的誤差原因，是指除去隨機誤差以外的其他原因。在GLP概念里QC即指IQC,其2、規(guī)定控制對象的標(biāo)準(zhǔn)(預(yù)期值);5、比較或較對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明原因。超出預(yù)定誤差6、采取行動，解決差異。恢復(fù)原狀(原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài))的手段發(fā)揮作用。【灰區(qū)概念】范圍內(nèi)則報告+(陽性)。灰區(qū)概念對血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。灰區(qū)的設(shè)1、COV×(1±CV),CV為該試劑的批內(nèi)CV(一般在15-20線性走向不是呈平臺狀無限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀 現(xiàn)象的分子機理有"分子變構(gòu)說"和"濃度效應(yīng)"等推論。一步法和二步法均存在“HD-H0OK”效應(yīng)，只是前者出現(xiàn)的更早些，大多數(shù)是高值低吸光度，很少陰冰凍狀態(tài)融化使用時，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃