PAGEPAGE9目錄[摘要] 1[關鍵詞] 1引言 11.實驗材料和方法 11.1材料與試劑 11.2實驗方法 22實驗及結果 22.1溶液的配制 22.2測定波長的確定與標準曲線 22.3總黃酮含量測定 32.4初步實驗操作及結果分析 32.4.1藥材提取時間的選擇 32.4.2提取加水量研究 32.5正交實驗的結果 42.670%乙醇提取工藝的研究 72.7水提取甲殼素沉淀除雜法工藝研究 73實驗結果與討論 74.結論 8[參考文獻] 8致謝 9聲明 10

小葉榕浸膏生產工藝研究[摘要]目的研究小葉榕浸膏生產的最佳工藝條件。方法通過初步實驗和正交實驗，以總黃酮含量為指標，對小葉榕浸膏生產過程中的關鍵要素進行優選。結果所考查的因素中，小葉榕浸膏提取工藝各因數影響程度為：醇沉時溶液相對密度>加水量>提取時間；最佳搭配為：A2B3C1。結論小葉榕浸膏生產的最佳工藝條件為：加水量27（19+8），、提取時間4（3+1）小時，醇沉時溶液相對密度1.18/80℃。[關鍵詞]小葉榕浸膏；總黃酮；正交實驗；工藝研究引言小葉榕為桑科植物榕樹FicusmicrocarpaL.f.,入藥主用其葉。研究表明，小葉榕葉主要含有黃酮、三萜類等化合物。其藥用成份對治療心血管疾病、抗炎、抑菌等方面都有顯著療效。在兩廣民間廣泛將其用于咳嗽、哮喘、支氣管炎等多種疾病的治療[1，2]。以小葉榕浸膏為主要原料的產品—咳特靈片、咳特靈膠囊，由于療效確切已被中華人民共和國衛生部藥品標準所收載[3]，目前全國生產企業達210家以上[4]。目前浸膏的法定生產工藝為：水提—濃縮—乙醇沉淀。由于現行法定標準對生產工藝規定不夠嚴格，浸膏生產的三大主要因素：藥材提取時的加水量、提取時間、醇沉時溶液的相對密度等沒有明確規定，造成各企業浸膏質量水平參差不齊。雖然，近年來一些單位對浸膏的生產工藝做過研究，但結果有矛盾之處[5，6]，而以法定生產方法為依據的浸膏生產工藝研究未見報道（CNKI數據庫）。故本課題以浸膏總黃酮含量為指標，對前述3個主要因素開展初步實驗和正交實驗，以尋求法定標準條件下的最佳提取工藝。另外，還以總黃酮類成分含量為指標，采用70%酒精直接提取，水提取甲殼素沉淀兩種不同的生產工藝，對浸膏的生產方法進行研究對比，以尋求有效成分收得率更高、更經濟的生產工藝。1實驗材料和方法1.1材料與試劑小葉榕藥材：采集廣西天等縣，經植物園胡廷松教授鑒定為桑科植物榕樹FicusmicrocarpaL.f.干燥葉。蘆丁對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200306。小葉榕標準對照藥材：中國藥品生物制品檢定所，批號：121280-200503。乙醇、甲醇、苯、乙酸乙酯等試劑均為分析純。WFZUV-2102型紫外分光光度計(上海優尼柯儀器有限公司)、真空干燥箱、1/10萬分析天平（GR-202，A&D日本）、ZF—I型三用紫外分析儀等。1.2實驗方法1.2.1工藝流程加水定量過濾、蒸發濃縮 酒精調含酒量80%榕樹葉水提取液濃縮液定時提取定相對密度/溫度靜置、過濾蒸發濃縮、干燥濾液 最佳提取工藝總黃酮含量測定、分析1.2.2實驗步驟初步實驗：通過對相同產地、批次藥材4個不同提取時間、4個不同加水量、5個不同酒沉相對密度的初步研究，確定浸膏提取比較優化的提取條件。正交實驗：以浸膏提取比較優化的提取條件，開展3因素3水平的實驗研究，通過L9（34）正交表的分析，探索出最佳提取方案。2實驗及結果2.1溶液的配制精密稱取干燥恒重蘆丁0.0205g，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.205mg/l對照品溶液。精密稱取隆安小葉榕浸膏0.082g，加甲醇45ml；回流提取1h，放冷、濾紙過濾到50ml量瓶中，用少量甲醇洗滌殘渣，洗滌液過濾并入量瓶中，加甲醇到刻度，搖勻為供試小葉榕浸膏濃配液。精密取上述蘆丁對照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0、4.0ml、5.0ml與6.0ml，分別置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6鐘，加氫氧化鈉試液10ml，加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，作為蘆丁供試液。精密量取小葉榕浸膏濃配液5ml分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6鐘，加氫氧化鈉試液10ml，加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，作為浸膏供試液。2.2測定波長的確定與標準曲線取供試品及4.0ml對照品溶液制成的蘆丁供試品溶液和浸膏供試液，在200~700nm波長下掃描，結果兩溶液在385nm處有共同的最大吸收峰，故選擇385為測定波長。照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄íA)在385nm波長處測定以上蘆丁供試液的吸收度，結果見下表。以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為:Y=18.31X﹢0.008r=0.9992。線性范圍8.2μg～49.2μg/ml。2.3總黃酮含量測定分別取干浸膏細粉適量，置回流容器中，加甲醇加熱回流，濾過，濾液轉移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6鐘，加氫氧化鈉試液10ml，加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應的溶液為空白。照分光光度法（中國藥典2005年版一部附錄VA），在385nm測定吸收度，按Y=18.31X+0.008（Y為吸收度，X為濃度，單位為：mg/ml）計算各方法所得干浸膏量和總黃酮量。2.4初步實驗操作及結果分析2.4.1藥材提取時間的選擇取4份50g小葉榕干藥材,，統一按首次提取加水20倍，2次提取10倍，分別按煮沸時間不同的方法提取兩次，提取液濾布濾出準確計量后，分別從中精密吸取50ml，用恒重過的蒸發皿蒸干、100℃恒重，折算干浸膏收率。取藥渣統一加水500ml（浸沒為準）煎煮30分鐘，煎煮液統一濃縮到50ml，做鹽酸-鎂粉反應，結果見下表1所示：由表1可見，第四組提取效果最好，第一組最低，而且藥渣提取液與鹽酸鎂粉反應呈陽性，說明干膏收率隨著藥材提取時間的增加而增加，但綜合能耗等因素考慮，生產上選擇第一次提取3小時，第二次提取1.5小時為好。表1藥材不同提取時間的測定結果項目12341/0.52/13/1.54/2干膏率（%）7.211.2212.4113.09鹽酸鎂粉反應+2.4.2提取加水量研究取4份50g小葉榕干藥材，分別按1次、2次提取加水不同倍數，統一按首次提取3小時、2次提取1.5小時的方法提取。提取液濾布濾出準確計量后，分別從中精密吸取50ml，用100℃恒重過的蒸發皿蒸干、100℃恒重，折算干浸膏收率。取藥渣統一加水500ml煎煮30分鐘，煎煮液統一濃縮到50ml，做鹽酸-鎂粉反應，結果見下表2所示：表2藥材不同提取加水量的測定結果項目123415/818/1021/1224/14干膏率（%）13.0313.8612.7813.99鹽酸鎂粉反應由表2可知，隨著加水量的增加干膏率也增加，但第三組反而下降了，可能是實驗中的誤差造成的。但綜合能耗等因素考慮，生產上選擇首次加水18倍，2次加水10倍提取為好。2.4.精密量取5份50ml小葉榕提取濃縮液（廣西藥用植物園藥材提取），加水分別調節各溶液不同的相對密度，每份加酒精調節到含醇量為80%、攪勻、精確測定體積、放置分層后濾紙過濾，分別收集續濾液并精確量取50ml，用100℃恒重過的蒸發皿蒸干、100℃恒重，折算干浸膏量并取適量測定總黃酮含量。結果見表3所示：表3提取濃縮液酒精沉淀時相對密度不同對提取結果的影響序號調節d值含酒80%V50ml干膏量（g）折算干膏量（g）折算總黃酮量（g）11.15/801190ml0.719917.13362.161821.125/801155ml0.624014.41441.587931.10/801118ml0.522211.67641.425341.075/801025ml0.42528.71660.960351.05/801020ml0.22904.67160.6895由表4可知，濃縮液酒精沉淀時相對密度對小葉榕中黃酮類化合物的收率有較大影響，在相對密度較高的條件下有利于總黃酮的回收，其中酒精沉淀時相對密度為1.15/80℃黃酮收率最高。2.5正交實驗的結果在以上初步實驗和能耗綜合考慮的基礎上，制訂了以表4的加水量、提取時間、醇沉時溶液相對密度3方面因素的三個不同水平的L9（34）實驗設計。表4因素水平表水平ABC加水量（藥材重量倍數）提取時間（h）醇沉時溶液的相對密度116+10=262+1=31.18（稱量法、室溫）219+8=272.5+1=3.51.15（稱量法、室溫）320+9=293+1=41.12（稱量法、室溫）具體實驗操作如下：稱取50g藥材，按藥典方法進行凈制后，按不同的加水量和時間,提取兩次。用紗布過濾，合并濾液。加熱濃縮到20ml左右，用10ml的容量瓶稱取重量，以調節相應的相對密度，加水到100ml，加乙醇使含量達80%（酒精計測量），放置分層后濾紙過濾，分別收集續濾液并精確量取50ml，用100℃恒重過的蒸發皿蒸干、100℃結果與極差分析見表5，方差分析見表6。表5小葉榕浸膏工藝正交實驗設計及結果因素評價指標綜合評分（%）ABCD干膏率%(g/g)干膏總黃酮含量%(g/g)111114.7311.9777212224.309.6265313334.2610.7669.2421233.9813.7078.6522313.9612.4673.7623125.0615.6193.1731323.9711.9171.7832136.1012.3087.2933215.1912.4681.8K1211.20227.30257.30232.50K245.40225.90225.40229.80K3240.70244.10214.60235.00R11.406.0714.231.73Si229.1168.38328.624.51浸膏得率總黃酮含量綜合評分=×0.4×100%+×0.6×100%最大浸膏得率最大總黃酮含量表6方差分析表注：誤差來源SSfSFPA229.11211.5550.81<0.05B68.38234.1915.17>0.05C328.622164.3572.88<0.05誤差4.5122.251.00F0.02（2，2）=19.0以綜合評份為評價指標，由表6中極差值大小顯示，各因素作用主次為C>A>B；由表7方差分析結果表明：C因素和A因素的影響具有顯著性意義（P<0.05）,B因素無顯著性意義（P>0.05），以A2B3C1首次提取加水19倍、二次提取加水8倍，首次提取3h、二次提取1h，酒沉時濃縮液相對密度為1.18/802.670%乙醇提取工藝的研究取小葉榕藥材10g粉碎成粗粉，加70%酒精回流提取兩次，每次120ml，回流時間為首次2小時、2次1小時。提取液過濾（濾布），蒸餾回收酒精，余液蒸干，用100℃恒重過的蒸發皿蒸干、100℃恒重，得干浸膏0.2210g，折算干浸膏收率為2.21%。精密稱取0.0205g，按2.34總黃酮含量測定法，計算總黃酮量。Y385nm=0.541X=0.0291被測干浸膏總黃酮量=7.275mg干浸膏總黃酮含量=7.275/20.5×100%=35.49%藥材總黃酮提出量=35.49%×0.2210g=0.0802藥材總黃酮收率=0.0802g/10g×2.7水提取甲殼素沉淀除雜法工藝研究取小葉榕藥材10g粉碎成粗粉，按前述最佳提取工藝進行提取濃縮，濃縮液按2%甲殼素（2%醋酸）溶液：濃縮液=1.5：10的比例進行混合，濾出沉淀，清夜蒸發到小體積，用100℃恒重過的蒸發皿蒸干、100℃恒重，折算干浸膏收率。得干浸膏：0.829g取干浸膏細粉精密稱重0.0850g，按2.3.3總黃酮含量測定法，Y385nm=0.126X=0.0064總黃酮提取回收量=0總黃酮提取回收率=0.156%3實驗結果與討論3.1通過對小葉榕浸膏法定生產工藝的初步研究和正交實驗研究，優選提取工藝條件。對浸膏得率、總黃酮含量兩個評價指標分別賦予不同的權重，考慮到總黃酮的重要性和生產成本，將浸膏得率的權重定為0.4，浸膏總黃酮含量的權重定為0.6，用綜合評分方法優選出的最佳工藝為：首次加水量19倍提取3個小時，第二次加水量8倍提取1個小時，醇沉時溶液相對密度1.18/80℃。3.2本課題除藝開展系統研究外，對70%乙醇提取，水提取甲殼素沉淀除雜法等兩種浸膏生產工藝也進行了初步研究。其中，70%乙醇提取方法的藥材總黃酮收率為0.802%，比水提取酒精沉淀法（藥材總黃酮收率0.5%左右）總黃酮收率略高，這與小葉榕醇提物止咳平喘作用稍強于水提物[7]的文獻報道相吻合。但此方法沒有通過系統的藥理學和臨床驗證，真正運用于生產實踐還要做大量工作。甲殼素是目前在飲料和液體制劑澄清除雜工藝方面廣泛使用的天然、安全陽離子型絮凝劑，從原理來看，甲殼素分子中的氨基帶正電荷，可與溶液中的膠質、蛋白以及帶負性電荷懸浮顆粒生成不溶于水的共聚沉淀物[8]，使其沉淀去除。但在小葉榕藥材的分離除雜過程中，可能引起了黃酮類成分的沉淀，總黃酮的收率很低（僅為0.156%），故不應進一步研究。4.結論通過初步實驗和正交實驗，按現行法定生產工藝生產小葉榕浸膏的最佳生產工藝為：首次提取加水19倍、二次提取加水8倍，首次煮沸提取3h、二次提取1h，酒沉時濃縮液相對密度為1.18/80℃。[參考文獻][1]江蘇