生命科學院生理實驗101140003操哲3A操哲車燁劉暢12.10.9實驗六神經肌肉接點的興奮傳遞與阻滯骨骼肌電興奮與收縮的時相關系及電活動與收縮的關系101140003操哲實驗目的學習同時記錄骨骼肌電興奮與機械收縮的方法觀察并掌握骨骼肌電興奮與收縮的時相關系學習測定骨骼肌終板電位的方法并觀察其波形了解突觸傳遞的的特性理解肌電圖的原理，夯實肌電圖描記方法并學習肌電圖分析方法對比分析掌握甘油、琥珀酰膽堿對神經-肌肉標本雙向動作電位、肌電圖及機械收縮的影響實驗原理神經干在受到有效刺激以后可以產生復合動作電位，標志著神經發生興奮。如果在離體神經干的一端施加刺激，從另一端引導傳來的興奮沖動，可以記錄出雙相動作電位，假如在引導的兩個電極之間將神經干麻醉或損壞，阻斷其興奮傳導能力，這時記錄出的動作電位就成為單相動作電位。神經細胞的動作電位是以“全或無”方式發生的，而復合動作電位的幅值在一定刺激強度下隨刺激強度的增加而增大肌電圖是骨骼肌在收縮前的電興奮活動，經過引導、放大、記錄而成的圖形。用于引導肌電的電極有兩類：針電極（包括普通針電極、埋藏電極、微電極）和表面電極。本實驗繼續使用表面電極，表面電極根據容積導體原理設計，即肌肉收縮時，動作電位可以從肌纖維組織液反映到皮膚表面表面電極為直徑1cm的盤狀電極，由導電橡膠、氯化銀等材料制成，固定在所測肌肉皮膚表面，可引導出骨骼肌較多運動單位的動作電位，以研究動物體活動時整塊肌肉的狀態。通過表面電極采集肌電，因其無創性而易于接受，故而廣泛應用于臨床醫學、生理學、生物工程學、心理學及運動體育科學等眾多領域骨骼肌受到刺激時先發生興奮，隨后才發生收縮反應，同時記錄骨骼肌的電變化和收縮過程，即可觀察到二者之間關系箭毒：從箭毒蛙中提取出的，有效成分為d-管箭毒堿的一種神經毒素。其可以阻斷脊椎動物的神經肌肉的接點作用而使骨骼肌松弛，但此時肌肉本身并不受影響。據認為d-管箭毒堿與乙酰膽堿發生競爭性的頡頏而抑制興奮傳導的，動物中毒死亡是基于呼吸肌的麻痹。其對交感神經肌的突觸也有阻斷作用，相反地脊髓的反射興奮卻可因此藥而增強。對昆蟲等無脊椎動物的神經節或神經肌肉接點無效甘油：甘油可以破壞肌管系統，導致即使肌細胞興奮也無法收縮實驗對象與器材實驗對象： 1只蟾蜍/組實驗試劑： 任氏液、琥珀酰膽堿、甘油實驗設備： 橋式前置、張力感受器、刺激電極、棉纖維電極、手術器械、鐵架臺、萬向輪、細線等實驗方法與步驟離體神經肌肉標本制備夾握好蟾蜍后，對其進行雙毀髓處死，剖開蟾蜍，于脊柱骨由上2-3cm處剪開，剝制后肢標本，將蟾蜍皮及內臟等一并清理至廢液缸一手捏住恥端，另一手用手術鑷在腓腸肌跟腱下面穿線，并用結線扎緊剪斷跟腱，提起結線，游離腓腸肌實驗裝置搭設將結線一端通過雙凹夾與張力感受器連接，調整鐵架臺位置使感受器靈敏度適當于腓腸肌正前方的股二頭肌和半膜肌之間找到坐骨神經，用浸濕過組織液的雙針形露絲刺激電極及引導電極導線挑出，用試管夾固定電極，調整電極位置使電極不觸碰肌肉另一試管夾夾住棉刺激電極，先讓電極前端棉花浸潤任氏液，再將，棉花覆蓋于腓腸肌表面設置參數打開chart7軟件，設置掃描頻率為4k/s打開stimulator和sampling窗口，設定參數如下測定對樣本施加刺激，在channel1記錄單收縮譜圖，channel2記錄肌電圖，channel3記錄雙向動作電位，測定空白對照組于腓腸肌近心端注射琥珀酰膽堿，并滴加少量到腓腸肌表面，重新測定單收縮、肌電圖、雙向動作電位換蟾蜍另外一條腿做神經-肌肉標本，先測定空白對照組，再于腓腸肌兩端注射甘油，并滴加少量到腓腸肌表面，重新測定實驗結果與分析神經干雙向動作電位肌電圖機械收縮琥珀酰膽堿對照組有有有琥珀酰膽堿實驗組有無無甘油對照組有有有甘油實驗組有有無神經干雙向動作電位肌電圖機械收縮琥珀酰膽堿對照組琥珀酰膽堿實驗組甘油對照組甘油實驗組琥珀酰膽堿實驗組組合圖：甘油實驗組組合圖：骨骼肌興奮收縮時相圖:實驗討論棉纖維電極前端棉花使用前應先完全浸潤任氏液，并且棉花前端應注意剪細，本次試驗前三組由于電極制作不佳，肌電圖全部顯示為單峰本次試驗所用蟾蜍解剖后肌肉有所萎縮，刺激反應時所需電流較高，到實驗末段，刺激電流達到最大值肌肉也無明顯反應，一方面可能未及時用任氏液潤濕標本，一方面也有可能蟾蜍長時間置于蛇皮袋中對其肌肉反應有影響注射、覆加棉花纖維電極、施加刺激電流等操作都應注意勿觸碰到牽拉腓腸肌的棉線，防止輕微的影響破壞實驗記錄圖本次試驗甘油較為粘稠，吸取和注射都應謹慎；另外吸取甘油及琥珀酰膽堿的注射器應注意貼好標簽多次刺激神經易產生疲勞，所以應注意在每次刺激間隙休息一段時間，否則神經因被挑起而變得松弛，肌肉由于長時間重復收縮而變得收縮緩慢或無反應，對實驗結果造成不利影響本次試驗使用琥珀酰膽堿而不是箭毒，一是由于箭毒價格昂貴，另一方面其對人體還是有一定的危害；但雖然甘油與與琥珀酰膽堿毒性較低，實驗中還是應注意避免針頭觸碰到皮膚等思考題琥珀酰膽堿和甘油對肌肉的作用？琥珀酰膽堿可同乙酰膽堿競爭終板膜上的Ach受體亞單位，因而可以阻斷接頭傳遞，使后膜動作電位不能形成而使肌肉失去收縮能力甘油破壞了肌肉細胞的橫管系統，這時如果再給肌肉以外加刺激，雖然仍可在完好的肌細胞上引起動作電