止痢寧片中苦參堿的HPLC測定【摘要】目的用HPLC法測定止痢寧片中苦參堿的含量。方法HPLC用外標(biāo)一點法，KromasilNH2柱，乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相，流速為/min，λ=220nm。結(jié)果苦參堿在～/ml范圍內(nèi)呈良好線性，回歸方程為Y=+，r=，平均加樣回收率%，RSD為%。結(jié)論方法簡便、準(zhǔn)確，專屬性強，測定結(jié)果重復(fù)性好，為止痢寧片中苦參堿的定量分析提供了科學(xué)有效的方法。

【關(guān)鍵詞】止痢寧片；苦參堿；HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofMatrineinZhiliningpianbyUsingKromasilNH2Column,Acetonitrile-Ethanolabsolute-3%Phosphoricacidglacialasthemobilephase,detectionwavelengthas220nmandflowratewas/Thecalibrationcurvewaslinearatarangeof/ml～/mlfortheMatrineandlinearequationwasY=r=Theaveragerecoverywas%andtherelatedstandarddeviationwas%.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofMatrineinZhiliningPianandthereduplicationoftheresultwasgood.

【Keywords】ZhiliningPian；matrine；HPLC

止痢寧片收載于部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊中，功能主治：清熱祛濕，行氣止痛。用于腸炎、痢疾，表現(xiàn)為腹痛瀉泄，下痢膿血，肛門灼熱，里急后重者［1］。處方由穿心蓮、苦參、木香組成，原標(biāo)準(zhǔn)中只有檢查項，沒有含量控制項。為了更好地控制止痢寧片的質(zhì)量，提高止痢寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者對止痢寧片處方進行了分析，經(jīng)過預(yù)試驗及參考相關(guān)資料，進行本品中苦參堿含量測定，并進行了方法學(xué)研究，控制藥品質(zhì)量。采用高效液相色譜法測定苦參堿含量，方法簡便快速，穩(wěn)定可靠，專屬性強。

1儀器與試藥

儀器高效液相譜儀：SPD-10A日本島津；紫外分光儀：上海康化生化儀器制造廠；超聲波清洗器：SK3200H上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司。

試藥苦參堿對照品由中國生物制品檢定所提供；止痢寧片由河南百年康鑫藥業(yè)有限公司提供；止痢寧片對照藥品由江西某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

色譜條件［2］以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相；檢測波長為220nm；流速為1ml/min；柱溫為室溫。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于2000。

溶液的制備

對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇溶液，制成每毫升含苦參堿的溶液，即得。色譜圖見圖1。

圖1苦參堿對照品色譜圖

供試品溶液的制備取本品20片，研細，取，精密稱定，精密加入/L鹽酸溶液50ml振搖使溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置分液漏斗中，用三氯甲烷15ml振搖提取1次，棄去三氯甲烷提取液，水層用氨試液調(diào)至強堿性，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘渣用乙醇適量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得。色譜圖見圖2。

圖2止痢寧片色譜圖

陰性樣品的測試取缺苦參的樣品，按供試品制備法制備陰性樣品后測定，在苦參堿相應(yīng)位置無峰出現(xiàn)，說明陰性樣品的其他成分無干擾。色譜圖見圖3。

圖3陰性樣品色譜圖

線性關(guān)系的考察精密稱苦參堿對照品適量，用乙腈-無水乙醇溶液稀釋制成不同濃度的對照品溶液，分別為、、、、、/ml，各進樣10μl，測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，苦參堿的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程Y=+，r=,表明苦參堿在～/ml之間呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗取濃度為/ml的苦參堿對照品溶液，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，測定結(jié)果RSD為%，表明精密度良好。

重現(xiàn)性試驗取本品20片，稱取總重后研細，分別稱取6份，每份，精密稱定，然后按供試品溶液制備方法制備供試品溶液。按照含量測定方法，測定每份樣品中苦參堿的含量，結(jié)果RSD為%，重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗取本品20片，研細，稱取，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8h測定峰面積，RSD為%。表明制備的供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率試驗取本品20片，稱取總重后研細，分別稱取6份，每份，精密稱定。分別置之50ml量瓶中，精密加入用/L鹽酸溶液配制濃度為/ml的苦參堿對照品溶液，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進樣量10μl，測定苦參堿含量，平均回收率為%，RSD為%。見表1。表1加樣回收率試驗

樣品測定按照供試品溶液制備方法對3批中試產(chǎn)品進行測定，測定結(jié)果見表2。表2樣品測定結(jié)果

3討論

根據(jù)含量測定結(jié)果，每片含苦參以苦參堿計，均不少于,由于各地苦參藥材的差別較大，因此暫規(guī)定：本品每片含苦參以苦參堿計，不少于。

在止痢寧片處方中，君藥為穿心蓮，其主要成分為穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯，《中國藥典》2005年版一部穿心蓮藥材就是以此成分控制穿心蓮藥材質(zhì)量，為控制止痢寧片質(zhì)量也擬測定止痢寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量來控制產(chǎn)品質(zhì)量，但在陰性樣品試驗中，在與穿心蓮內(nèi)酯對照品相應(yīng)位置出現(xiàn)了嚴(yán)重干擾。

供試品溶液制備方法的考察：為了考察擬定供試品溶液制備方法的合理性，分別取3份樣品，精密稱定，按供試品溶液處理方法處理，在最后用三氯甲烷萃取時分別萃取3次、4次、5次，測定供試品溶液的含量，結(jié)果表明，萃取3次結(jié)果偏小，而萃取4