牛結核病防治技術

牛結核病主要是由牛型結核分枝桿菌引起的一種人獸共患的慢性傳染病。世界動物衛生組織（OIE）將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。1危害經濟損失巨大例如患病奶牛的壽命要比健康牛短得多，產奶量顯著減少，常常不能懷孕。如果該病未能控制，其病死率可達10％－20％。在執行本病的防治措施是要花費很大的人力和物力。結核病牛也往往是人感染結核病的重要傳染源。結核病的分布結核病曾經廣泛流行于世界各地，尤以奶牛業發達國家為嚴重。盡管各國政府都十分重視對結核病的防治，一些國家亦在該病的控制方面取得了很大的成就，有效地控制甚至消滅了此病，但更多的國家依然呈現地區流行或散發流行。

2診斷流行病學癥狀病理變化病原檢測免疫學試驗傳染原：牛型結核桿菌人型結核桿菌禽型結核桿菌牛型結核桿菌亦能感染人、豬及其他家畜。本病依據流行病學、臨床癥狀、病理變化可做出初步診斷。確診需進一步做病原分離鑒定或免疫學診斷。2.1流行特點本病奶牛最易感，其次為水牛、黃牛、牦牛。人也可感染。結核病病牛是本病的主要傳染源。牛型結核分枝桿菌隨鼻汁、痰液、糞便和乳汁等排出體外，健康牛可通過被污染的空氣、飼料、飲水等經呼吸道、消化道等途徑感染。2診斷2.2臨床癥狀：

潛伏期一般為10～45天，有的可長達數月或數年。通常呈慢性經過。臨床以肺結核、乳房結核和腸結核最為常見。咳嗽

病牛常發的為肺結核，易疲勞，常有短而干的咳嗽，尤其當起立、運動、吸入冷空氣或塵埃時隨后咳嗽加重，頻繁且表現痛苦。呼吸次數增多或發生氣喘。消瘦

病畜日漸消瘦，貧血，有的牛肩前、股前、腹股溝、頜下、咽及頸淋巴結等體表淋巴結腫大。當縱膈淋巴結受侵害腫大，壓迫食道，則有慢性脹氣癥狀。病勢惡化，可能發生全身性結核，即粟粒性結核。胸膜、腹膜發生結核病灶時呈現所謂的“珍珠病”，胸部聽診可聽到摩擦音。

乳房感染多數病牛乳房常被感染侵害，可見乳房上淋巴結腫大無熱無痛，泌乳量減少，乳汁初期無變化，病重時呈水樣稀薄。

頑固性下痢腸道結核多見于犢牛，可表現為消化不良，食欲不振，頑固性下痢，迅速消瘦。性機能紊亂生殖器官結核可出現性機能紊亂，發情頻繁且表現性欲亢進，慕雄狂與不孕。孕畜流產，公畜副睪及睪丸腫大，陰莖前部可發生結節、糜爛等。

神經癥狀中樞神經系統主要是腦及腦膜發生結核病變，常引起神經癥狀，如癲癇樣發作、運動障礙等。肺結核：以長期頑固性干咳為特征，且以清晨最為明顯。患畜容易疲勞，逐漸消瘦，病情嚴重者可見呼吸困難。乳房結核：一般先是乳房淋巴結腫大，繼而后方乳腺區發生局限性或彌漫性硬結，硬結無熱無痛，表面凹凸不平。泌乳量下降，乳汁變稀，嚴重時乳腺萎縮，泌乳停止。

腸結核：消瘦,持續下痢與便秘交替出現，糞便常帶血或膿汁。乳房感染2診斷2.3病理變化：在肺臟、乳房和胃腸粘膜等處形成特異性白色或黃白色結節。結節大小不一，切面干酪樣壞死或鈣化，有時壞死組織溶解和軟化，排出后形成空洞。胸膜和肺膜可發生密集的結核結節，形如珍珠狀。禽型結核分枝桿菌感染可能無臨床癥狀，但亦可能出現昏睡和消瘦。在應激條件下，可能發生突然死亡，這往往與嚴重的肝臟病變有關，象這樣的病變在死后解剖時容易觀察到。禽型結核分枝桿菌能引起人的一種漸進性的難以治療的疾病。因此所有操作均須在有充分生物防護裝置的條件下進行。人型結核分枝桿菌感染除靈長類動物會出現咳嗽等癥狀外，其他動物一般無明顯臨床癥狀。大體解剖觀察牛型結核分枝桿菌感染病變可發生在所有內臟器管最常見的是肺、胸膜、腸系膜淋巴結。感染早期，可在肺門部位及肺門淋巴結見到干酪樣壞死或鈣化的病灶。感染中后期，可在胸膜、胸腔見到“珍珠狀”增生，形成所謂的“珍珠胸”。在腸系膜可見到串珠狀淋巴結腫大。禽型結核分枝桿菌感染主要表現為肺、肝、脾的粟粒狀結核病變，肝脾顯著腫大，表面及組織內可見到大小似小米、顏色為灰黃色的化膿斑點。人型結核分枝桿菌感染可見干酪樣壞死或鈣化的病灶。病變可發生在所有內臟器官，漿膜表面，特別是胸膜，骨及關節。最常發生在肺、支氣管、縱隔及咽喉淋巴結、乳腺、肝、脾及腸。早期的病變包括在咽喉、支氣管縱隔，以及偶爾可見的腸系膜等淋巴結的干酪樣及鈣化肉芽腫，其大小從針尖大到榛實大，偶爾有蒂。粟粒狀結核病變的大小似小米，在肺、肝、脾以及其它器官可大量發現，其顏色為灰黃色。病理學診斷在巨噬細胞內繁殖結核桿菌侵入機體后，易被巨噬細胞吞噬，但在某些情況下不被殺死，而且能在巨噬細胞內繁殖并沿淋巴管蔓延。原發性結節局部病變主要是由該菌的直接作用形成特異性原發性病灶――原發性結節。當動物機體抵抗力強，則原發性病灶囊化，形成瘢痕或鈣化而痊愈。當動物抵抗力弱時，病菌可從淋巴、血管和天然管道三條途徑散布全身，引起其他組織器官的結核病灶或全身性結核（粟粒性結核病）。組織病理變化病理學特點在器官組織發生以增生性或滲出性炎，或兩者混合存在。增生性結核結節動物機體抵抗力強時，機體對結核菌的反應以細胞增生為主，形成增生性結核結節，由類上皮細胞，和巨噬細胞集結在結核菌周圍，構成特異性肉芽腫，外圍是一層密集的淋巴細胞和成纖維細胞，形成非特異性肉芽組織。器官原有輪廓被破壞。滲出性結核當機體抵抗力降低時，機體的反應則以滲出性炎為主，即在組織中有纖維蛋白和淋巴細胞的彌漫性沉積。后發生干酪樣壞死，化膿或鈣化，這種變化主要見于肺和淋巴結。滲出性結核的干酪樣壞死保存了一般組織的結構，而在增生性病灶中。需要指出的是由上皮樣及巨細胞組成的結節是不夠作確診結核病用的，因為該病變不是結論性的，尚需揭示出病原的存在。結核菌素反應與病變牛結核菌素陽性反應，但剖檢時找不到病變。當牛結核病在牛群中嚴重流行時，遇到這種情況不多。但對于牛結核病清凈的牛群，這種情況就比較常見了。無病變的牛結核菌素陽性反應是不是完全屬于非特異性反這種情況很難作出明確診斷，因為有些牛雖然感染牛型結核分枝桿菌，但病變很少或不明顯，解剖時不易發現. 2診斷2.4實驗室診斷2.4.1病原分離鑒定采集病牛的病灶、痰、尿、糞便、乳及其它分泌物樣品，作抹片或集菌處理（見附件）后抹片，用抗酸染色法染色鏡檢，并進行病原分離培養和動物接種等試驗。病料淋巴結痰乳精液子宮分泌物尿和糞便樣品運送樣品應封裝在無菌的容器內冷藏運送。對那些提純結核菌素皮內變態反應試驗陽性，但尸檢時無病理學病變的動物，可從下頜、咽后、支氣管、肺（特別是肺門及肺門淋巴結）、縱隔及一些腸系膜的淋巴結采集樣品送檢。病原牛結核分枝桿菌屬于分枝桿菌屬哺乳動物結核桿菌種牛型結核桿菌亞種。結核分枝桿菌也可感染牛極少數情況下，禽結核分枝桿菌也可感染牛。病原檢測染色鏡檢培養特性動物試驗生化試驗分子生物學診斷染色鏡檢涂片先在玻片上涂布一層薄甘油蛋白，甘油蛋白的配制：雞蛋白20mL，甘油20mL，水楊酸鈉0.4g，混勻。如檢驗標本為乳汁等含脂肪較多的材料，在涂片制成后，用二甲苯或乙醚脫脂1－2分鐘后傾去，再滴加95％酒精以除去二甲苯，待酒精揮發后即可染色。然后吸取標本滴加其上，涂布均勻。萋－尼氏抗酸染色涂片后，經火焰固定加石炭酸復紅染色液用100mL95％酒精加3g堿性復紅配制成堿性復紅飽和酒精溶液，取堿性復紅飽和酒精溶液10mL，與5％苯酚溶液90mL混合后用濾紙濾過將玻片在火焰上加熱至出現蒸汽（不能產生氣泡），如此熱染5分鐘（如染色液干涸，須加適量補充）。水洗后滴加3％鹽酸酒精脫色30－60秒（至無色素脫下為止）濃鹽酸3mL，95％酒精97mL，混勻。水洗后，以駱氏美蘭染色液復染1分鐘。甲液：美蘭0.3g，95％酒精30mL。乙液：0.01％氫氧化鉀溶液100mL。混合即成水洗，吸干，鏡檢。抗酸菌應不被鹽酸酒精脫色而染成紅色，其他細菌與動物細胞可被鹽酸酒精脫色而均被染成蘭色。菌體形態牛結核分枝桿菌呈細長平直或微彎曲的桿菌，長1.5-5微米，寬0.2-0.5微米.在陳舊培養基上或干酪性淋巴結內的菌體，偶而可見長達10微米或更長培養將經過處理的被檢樣品標本接種到培養基上（同時作2－4份）培養一天后，以熔化的石蠟封口，繼續培養。

牛型結核分枝桿菌生長緩慢，初次分離培養時，需36－37℃培養5－8周方可出現菌落。在固體培養基上不產生任何顏色，菌落濕潤、略顯粗糙并發脆。加1％的丙酮酸鈉能促進生長。若是非典型分枝桿菌，則生長較快，大部分（但不是全部）產生白色或具有橙色或黃色色素，常形成黃色或橙色菌落。某些種類的色素只有在亮處才顯出。試驗動物豚鼠兔雞牛型結核分枝桿菌易感