第1部分專題2課題2理解教材新知把握熱點考向應用創新演練知識點一知識點二考向一考向二1.測定微生物數量的常用方法有稀釋涂布平

板法和顯微鏡直接計數法。2．稀釋涂布平板法常用來統計活菌的數目，

但統計結果往往比活菌數目低。3．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的選擇培養基分離該細菌。4．鑒定分解尿素細菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，據是否變紅進行判斷。

[自讀教材·夯基礎]1．篩選菌株的思路(1)自然界中目的菌株的篩選：①依據：根據它對

的要求，到相應的環境中去尋找。②實例：PCR技術過程中用到的耐高溫的

，就是從熱泉中篩選出來的Taq細菌中提取出來的。生存環境TaqDNA聚合酶(2)實驗室中目的菌株的篩選：①原理：人為提供有利于

生長的條件(包括營養、溫度、pH等)，同時

其他微生物的生長。②方法：利用選擇培養基分離。a．選擇培養基：允許

微生物生長，同時

其他種類微生物生長的培養基。b．實例：選擇分解尿素的細菌的培養基，以

作為唯一氮源，只有能合成

的微生物才能分解尿素。目的菌株抑制或阻止特定阻止或抑制尿素脲酶稀釋涂布平板稀釋度活菌②計數原則：一般選擇菌落數在

的平板進行計數。③結果分析：統計的菌落數往往比活菌的實際數目

。原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是

。(2)其他方法：利用

直接計數。30～300低一個菌落顯微鏡圓褐固氮菌生活于土壤中，能以氮氣作為氮源。請探討、交流實驗室分離圓褐固氮菌的方法。提示：配制無氮培養基作為選擇培養基。

[跟隨名師·解疑難]1．選擇培養基的類型及作用(1)在培養基中加入某種化學物質。如加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入指的是在培養基的培養成分的基礎上加入。(2)改變培養基中的營養成分。如培養基中缺乏氮源時，可以分離固氮微生物，因為非固氮微生物不能在此培養基上生存。當培養基的某種營養成分為特定化學成分時，也具有分離效果。(3)改變微生物的培養條件。如將培養基放在高溫環境中培養只能得到耐高溫的微生物。2．統計菌落數目(1)稀釋涂布平板法：①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數。②注意事項：a．設置重復組：同一稀釋度下，至少涂布3個平板作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性。分析結果時，需考慮重復組的結果是否一致，結果不一致，意味著操作有誤，需要重新實驗。[特別提醒]

教材中的實例說明了設置重復組的重要性。第一位同學只涂布了1個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。第二位同學考慮到設置重復組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數值結果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數值用來求平均值。b．設置對照：目的是排除實驗中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗的可信度。③計算公式：每克樣品中的菌株數＝(C÷V)×M。C：代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數。V：代表涂布平板時所用的稀釋液的體積。M：代表稀釋倍數。(2)顯微鏡直接計數法：①原理：此法利用特定細菌計數板或血球計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數量。②缺點：不能區分細菌的死活。③方法：用計數板計數。計數板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積為1mm2和高為0.1mm的計數室，在1mm2的面積里又被劃分成25個(或16個)中格，每個中格進一步劃分成16個(或25個)小格，但計數室都是由400個小格組成的。如圖所示。④計算公式：每毫升原液所含細菌數＝每小格平均細菌數×400×10000×稀釋倍數。[自讀教材·夯基礎]有機質中性3～8cm30～300溫度時間數目穩定(4)計數：當菌落數目穩定時，取同一

下的3個平板進行計數，求出

，并根據所對應的

計算出樣品中細菌的數目稀釋度平均值稀釋度2．菌種鑒定(1)原理：分解尿素的細菌合成的脲酶將尿素分解為

，使培養基的

增強。(2)方法：在以

為唯一氮源的培養基中加入

指示劑培養細菌，若指示劑變

，可確定該種細菌能夠分解尿素。氨堿性尿素酚紅紅1．當第一次測定時為什么要將稀釋的范圍放寬一些？提示：為確保能從中選擇出菌落數在30～300之間的平板進行計數。2．為什么要選取菌落數目穩定時的記錄作為結果？提示：防止因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目。

[跟隨名師·解疑難]1．操作中的注意事項(1)無菌操作：鐵鏟和信封都要滅菌。稱取土壤、將稱好的土樣倒入錐形瓶、稀釋土壤溶液，每一步都要在酒精燈的火焰旁進行。(2)做好標記：如在培養皿上注明培養基種類、培養日期以及培養樣品的稀釋度等。2．結果分析與評價(1)培養物中是否有雜菌污染以及選擇培養基是否篩選出菌落：對照的培養皿在培養過程中沒有菌落生長，說明培養基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養基的菌落數目明顯大于選擇培養基的數目，說明選擇培養基已篩選出一些菌落。(2)樣品的稀釋操作是否成功：如果得到了2個或2個以上菌落數目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數。(3)重復組的結果是否一致：如果不同同學選取的是同一種土樣，統計的結果應該接近。如果結果相差太遠，需要分析產生差異的原因。[例1]